顺铂耐药

摘要： 目的探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)基因在胰腺癌(PC)顺铂(DDP)耐药中的作用机制,以及PC对DDP化疗增敏的启示。方法收集2016年1月至2020年12月在南京医科大学附属南京医院行根治性手术治疗的PC患者52例,其中DDP耐药PC组26例,DDP非耐药PC组26例,免疫印迹法检测PC组织中Drp1蛋白的表达;采用DDP浓度梯度递增法建立DDP耐药PC细胞系BXPC-3/CDDP,构建Drp1质粒进行BXPC-3/CDDP细胞转染,实验分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Drp1组、pcDNA3.1-Drp1 mut组;以20μg/ml DDP作用转染Drp1质粒的BXPC-3/CDDP细胞,实验分为DDP组、DDP+pcDNA3.1-Drp1 mut组、DDP+pcDNA3.1-Drp1组。以细胞内活性氧(ROS)的产生、线粒体膜电位及线粒体内ATP含量作为评估线粒体功能的指标;分别采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法、Transwell小室以及流式细胞术检测BXPC-3/CDDP细胞的增殖活性、迁移及凋亡情况。结果在DDP耐药PC组,PC组织中Drp1蛋白表达量低于其对应的癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001);与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Drp1 mut组中ROS水平减少,线粒体膜电位及ATP含量增加,差异有统计学意义(P<0.05),pcDNA3.1-Drp1组ROS水平增加,线粒体膜电位及线粒体内ATP含量减少,差异有统计学意义(P<0.05);与pcDNA3.1-Drp1组比较,pcDNA3.1-Drp1 mut组ROS水平减少,线粒体膜电位及线粒体内ATP含量增加,差异有统计学意义(均P<0.05);与DDP组、DDP+pcDNA3.1-Drp1 mut组比较,DDP+pcDNA3.1-Drp1组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Drp1基因通过诱导线粒体功能紊乱促进PC细胞对DDP的敏感性,改善DDP耐药细胞株的化疗抗性,Drp1基因有望成为PC对DDP增敏的新靶点。

摘要： 在全世界,肺癌是发病率最高的癌症,同时具有较高死亡率。非小细胞肺癌是肺癌的常见病理类型,由于暴露在油烟等环境下,中国女性非小细胞肺癌的发病率较国外高^([1-3]),因起病的隐匿性,患者出现症状就医时已是晚期,含顺铂的化疗方案是常见晚期非小细胞肺癌的治疗手段,其耐药性的出现极大的影响了患者的预后。长链非编码RNA是一种长度大于200个核苷酸单位的不具备编码能力的RNA,许多研究发现其在恶性肿瘤的发生、发展^([4-6])甚至对逆转顺铂耐药发挥了一定的作用,本文就近些年来LncRNA与非小细胞肺癌的发生、发展及对顺铂耐药相关的研究做综述,期待可以为非小细胞肺癌的临床诊治及逆转顺铂耐药提供新的思路及突破口。

摘要： 目的:探讨miR-184对顺铂耐药的肺癌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法:选择人肺腺癌A549和鳞癌SKMES1细胞系分别建立顺铂耐药细胞模型。构建miR-184过表达和低表达质粒载体并成功转染耐药A549和SKMES1细胞,构建过表达和低表达miR-184的耐药细胞。实验分为对照组(未处理的肺癌细胞)、耐药组、过表达组和低表达组,各组细胞培养24、48和72 h后采用MTT法检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,培养72 h后Western blot法检测细胞中PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果:耐药组A549和SKMES1细胞中miR-184表达水平高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞增殖率升高;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞增殖率升高,而低表达组降低(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞凋亡率降低;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞凋亡率降低,而低表达组升高(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达水平升高;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达水平升高,而低表达组降低(P<0.05)。结论:miR-184可能通过激活PI3K/AKT/mTOR细胞信号通路,促进顺铂耐药肺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡。

摘要： 目的探究在肺腺癌顺铂耐药过程中起关键调控作用的相关基因。方法利用生物信息学方法在TCGA数据库和GDSC数据库下载肺腺癌患者顺铂敏感组与耐药组之间的差异表达基因,对差异基因进行GO功能分析和KEGG通路富集分析,构建蛋白质互作网络,并进行层次聚类分析,筛选得到关键基因并利用实时荧光定量PCR和ELISA法在细胞水平进行验证。通过siRNA沉默A549/DDP细胞中CXCL10基因的表达并检测其对顺铂的敏感度。结果筛选得到178个差异表达基因,经过聚类分析最终获得肺腺癌顺铂耐药的关键基因CXCL9、CXCL10、NKX2-1以及SFTPA1。暂时选择CXCL10进行后续验证及功能实验。实时荧光定量PCR结果显示CXCL10在A549/DDP细胞中的mRNA表达量显著高于A549细胞(P<0.001),A549/DDP细胞上清液中CXCL10蛋白的表达量高于A549细胞,均与生物信息学预测一致。MTT结果显示沉默CXCL10表达后,A549/DDP细胞对DDP的敏感度增加。结论CXCL10是调控肺腺癌顺铂耐药的关键基因,下调CXCL10表达可成为逆转肺腺癌顺铂耐药的潜在靶点。

摘要： 目的研究脂质体莪术醇(LC)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法采用卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组(含12.5μg/ml脂质体)、顺铂组(4μg/ml)、LC组(20μg/ml)、联合组[顺铂(4μg/ml)+LC(20μg/ml)],CCK-8检测各组细胞增殖能力,高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内顺铂平均含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测P糖蛋白(P-gp)的mRNA相对表达量,免疫细胞化学和Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达情况。结果联合组细胞增殖能力最低,凋亡率最高(P<0.05);联合组细胞内顺铂平均含量大于顺铂组(P<0.05);联合组细胞的P-gp mRNA和蛋白相对表达量低于单用顺铂组(P<0.05)。结论LC可通过抑制P-gp的表达,降低人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。

摘要： 目的应用生物信息学方法分析mi R-125b-5p在肺腺癌(LUAD)中的表达,预测其靶基因及预后价值。方法选取GEO数据库中LUAD顺铂耐药组织和细胞芯片,应用R软件筛选差异表达miRNA。应用miRBase数据库进行保守性分析,并采用db DEMC3.0数据库进行表达水平分析。利用Target Scan、mi RDB、mi RTar Base数据库预测靶基因,并运用DAVID在线网站对靶基因进行功能富集分析。联合TCGA数据库LUAD患者生存信息,进行预后分析。实时荧光定量PCR技术检测mi R-125b-5p在人正常支气管上皮细胞系16HBE、LUAD细胞系A549以及顺铂耐药细胞系A549/DDP中的表达水平。结果分析芯片数据获得LUAD顺铂耐药相关miR-125b-5p,其具有高度保守性,并在LUAD中显著下调。预测到的54个靶基因主要富集在调节基因表达、细胞大分子生物合成等过程,以及Micro RNAs in cancer、Protein processing in endoplasmic reticulum、HIF-1 signaling pathway等通路。Kaplan-Meier生存分析结果提示,mi R-125b-5p低表达与肺腺癌患者预后不良相关。q RT-PCR结果显示,mi R-125b-5p在A549细胞中表达水平显著低于16HBE(P=0.008);与亲本细胞相比,在耐药细胞A549/DDP中表达水平明显下降(P=0.023)。结论miR-125b-5p在肺腺癌中表达异常,且其靶基因参与调控多个生物学过程及信号通路,可能是肺腺癌预后的生物标志物。

摘要： 目的探讨葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(glucose‑6‑phosphate dehydrogenase,G6PD)在卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用及其潜在的机制。方法通过低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CDDP,采用Label‑free定量蛋白质组学法分析A2780和A2780/CDDP细胞差异蛋白G6PD,Western blot和RT‑qPCR检测G6PD表达情况。通过siRNA技术将siRNA‑G6PD及其阴性对照(siRNA‑NC)转染至A2780/CDDP细胞,然后采用Western blot验证G6PD基因沉默效果,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞仪和酶标仪检测铁死亡相关物质活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化物的表达水平。结果与A2780细胞相比,A2780/CDDP细胞中有95个上调蛋白和102个下调蛋白,其中上调蛋白中以G6PD表达差异最为显著;这些蛋白大多富集在代谢通路,且其功能主要与细胞氧化应激反应、核糖磷酸代谢途径相关。与A2780细胞相比,A2780/CDDP细胞中G6PD mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化物水平均降低(均P<0.05),而GSH水平升高(P=0.001)。沉默G6PD后的A2780/CDDP细胞中顺铂的IC_(50)值降低(P=0.012),细胞凋亡率升高(P=0.006),铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化水平均升高(均P<0.05),而GSH水平降低(P=0.007)。结论沉默G6PD可能通过诱导卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/CDDP中的铁死亡水平而增强顺铂敏感性。

摘要： 目的 观察靶向融合肽(MAP2K6-FP)对裸鼠顺铂耐药卵巢癌移植瘤生长的影响,并探讨其可能机制。方法 取裸鼠14只,每只裸鼠腹腔内注射200μL的SKOV3/DDP细胞(5×106/mL)制备顺铂耐药卵巢癌移植瘤模型,注射1周后,将制模成功的裸鼠随机分为两组(各7只)。观察1组尾静脉注射0.25 mg/kg的MAP2K6-FP,每周2次;对照1组尾静脉注射5 mL/kg的生理盐水,每周2次;两组均注射4周。腹腔注射细胞5周后,统一处死全部裸鼠。比较两组裸鼠腹围、腹水量、转移器官数、瘤结节数、瘤体重量及移植瘤中血管内皮生长因子特异性受体3(VEGFR-3)、淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、唾液酸糖蛋白(D2-40)、表皮生长因子受体3(EGFR3)。另取受精后4 d的斑马鱼卵,随机分成两组各20尾,观察2组加入20 mmol/L的MAP2K6-FP,对照2组加入等量生理盐水,1 h后比较两组斑马鱼淋巴管生成情况。结果 与对照1组比较,观察1组腹围、腹水量、转移器官数、瘤结节数、瘤体重量减少及移植瘤中VEGFR-3、LYVE-1、D2-40、EGFR3表达降低(P均<0.05)。观察2组鱼腹部不能形成连续的管腔,对照2组鱼腹部可见三条管腔伴行。结论 MAP2K6-FP可以抑制裸鼠顺铂耐药卵巢癌移植瘤生长,机制可能是抑制淋巴管生成;斑马鱼淋巴管生成受MAP2K6-FP抑制可进一步印证上述机制。

摘要： 目的·研究海绵来源的倍半萜胺醌类化合物smenospongine(SME)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549及其顺铂耐药株A549/DDP的抗肿瘤活性及作用机制。方法·利用2种细胞(母本细胞A549和顺铂耐药细胞A549/DDP)作为研究模型,采用CCK-8实验检测2株细胞对一线化学治疗药物的半抑制浓度(half maximum inhibitory concentration,IC50)以验证A549/DDP多药耐药的情况;通过克隆形成实验检测SME对母本及耐药细胞增殖的影响,同时采用Transwell侵袭实验以及蛋白质印迹法(Western blotting)检测SME对A549/DDP上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响;应用Western blotting和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测2株细胞中受到SME调节的多药耐药基因的蛋白和mRNA表达水平,探讨其耐药分子机制;进一步采用Western blotting检测SME对多药耐药蛋白ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)上游蛋白的影响;通过流式细胞技术检测SME对母本细胞和顺铂耐药株细胞周期的影响,同时应用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-end labeling)染色以及Western blotting检测SME对2株细胞凋亡的影响。结果·与母本细胞相比,顺铂耐药株A549/DDP细胞对顺铂表现出显著耐药性,同时对多种临床一线肺癌化学治疗药物表现出多药耐药的特征;SME显著抑制A549和A549/DDP的增殖、克隆形成,同时抑制耐药株的EMT;通过筛选多药耐药蛋白发现,SME显著下调ABCG2的蛋白以及mRNA表达;SME可抑制ABCG2上游的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)信号通路,进而下调ABCG2,并上调FoxO1;SME诱导母本细胞和耐药株细胞周期阻滞在G0/G1期,同时诱导2株细胞凋亡。结论·SME作为抑制NSCLC耐药的新小分子化合物通过抑制EGFR-Akt信号通路,下调ABCG2蛋白、上调FoxO1蛋白,进而抑制A549和A549/DDP的细胞活力,抑制耐药株的EMT,最终促进细胞凋亡。

摘要： 目的研究高迁移率族蛋白A1(HMGA1)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)与子宫内膜癌浸润、转移及顺铂耐药的相关性。方法收集行手术切除的96例子宫内膜癌组织标本,另选因子宫内膜增生手术切除的病理子宫组织标本45例作为对照组。检测两组织标本HMGA1、S100A4表达情况,比较其在不同临床病理参数中表达水平,通过logistics分析危险因素,再经相关性分析其与HMGA1、S100A4表达的关系。结果子宫内膜癌组HMGA1表达水平高于对照组(P0.05),在组织学分级、FIGO分期、肌层浸润程度、有无淋巴结转移、对顺铂有无耐药方面,差异具有统计学意义(P<0.05)。经logistics分析,HMGA1、S100A4高表达是子宫内膜癌组织肌层浸润≥1/2、淋巴结转移、对顺铂耐药的危险因素。经相关性分析,HMGA1高表达、S100A4阳性表达与肌层浸润深度、淋巴结转移、对顺铂耐药呈正相关(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中HMGA1表达上调、S100A4呈阳性表达,组织肌层浸润程度、淋巴结转移、对顺铂耐药与其密切相关,可作为临床观察有效指标。

摘要： 本研究旨在以比较蛋白质组学的策略从人肺腺癌细胞株中发现与耐药有关的泛素化蛋白。以亲和色谱从A549 细胞和A549/DDP 细胞裂解液中捕获、富集泛素化蛋白质后，通过 1D SDS PAGE 分离，选取45-85kDa 的差异表达条带，胰蛋白酶酶解后，进行HPLC-CHIP-MS/MS 分析，鉴定了11 种蛋白质，其中，有7 种是可能发生了单-泛素化或多-泛素化的底物蛋白质，4 种是E3 泛素蛋白连结酶相关蛋白。以Western blotting 和Confocal laser scanning microscope 进行验证的结果表明，RNF6、LRSAM1、TRIM25 三种E3 泛素蛋白连结酶在A549 细胞中的表达均明显低于在A549/DDP 细胞中的表达；顺铂（DDP）作用后，在两种细胞株中，三者的表达均明显下调，而在A549/DDP 细胞中，DDP 作用后的表达下调幅度较小。底物蛋白PKM2 在A549 细胞中的表达明显高于在A549/DDP 细胞中的表达；DDP 作用后，PKM2 在A549 细胞中的表达上调，在A549/DDP 细胞中的表达下调。研究工作从蛋白质水平提示，在人肺腺癌细胞株中，耐药与泛素化过程的改变密切有关。

摘要： 本发明属于抗宫颈癌药物领域，具体涉及TOPK作为宫颈癌顺铂耐药防治靶点的应用。现有技术中针对TOPK与宫颈癌增殖及顺铂耐药的关系尚未见研究。为了明确宫颈癌患者顺铂耐药的机制，为宫颈癌患者提供更好的治疗药物，本发明针对TOPK对宫颈癌增殖及顺铂耐药的影响进行一系列研究。结果表明TOPK在宫颈癌患者组织中高表达；TOPK促进宫颈癌细胞增殖；TOPK过表达促进宫颈癌细胞对顺铂耐药。进一步研究表明TOPK特异性抑制剂OTS514在体内外明显抑制宫颈癌细胞增殖，本发明采用TOPK抑制剂OTS514与顺铂联合应用于宫颈癌治疗，治疗效果优于单独的顺铂治疗效果。

摘要： 一种三阴性乳腺癌顺铂耐药诊断用长链非编码RNA及其应用，首次克隆了在顺铂耐药三阴性乳腺癌和顺铂敏感三阴性乳腺癌中差异表达的LINC01778 V2的序列，为进一步研究其在三阴性乳腺癌顺铂耐药性产生、发展中的功能奠定基础。LINC01778 V2在顺铂耐药三阴性乳腺癌中高表达，在顺铂敏感三阴性乳腺癌中低表达，其能作为诊断标志物存在，通过检测LINC01778 V2表达水平能诊断三阴性乳腺癌对顺铂药物的耐药与否，从而便于实现针对性治疗，提高治疗效果，延长患者生存期。且其表达与顺铂耐药显著相关，因此，本发明还公开了长链非编码RNA在制备三阴性乳腺癌的治疗、顺铂治疗预测、顺铂治疗预后的产品中的应用。

摘要： 本发明提供一种具有克服顺铂耐药的抗肿瘤化合物及其制备与应用，所述的具有克服顺铂耐药的抗肿瘤化合物，其结构如式Ⅰ所示的化合物1和化合物2，鉴于顺铂在临床应用中存在严重的毒性和耐药性，本发明所要解决的技术问题在于利用具有抑制蛋白激酶2活性的化合物能够抑制DNA损伤修复的特性，与已知含有功能基团的铂(II)化合物结合,设计合成一种新的铂(II)化合物，所获得的化合物，不仅对顺铂敏感的肿瘤而且对顺铂耐药的肿瘤具有很强的抑制作用，且毒性较小，具有高效低毒的特点，可用于制备抗肿瘤药物。

摘要： 本发明公开了一种靶向于肺癌顺铂耐药细胞的喹啉铱配合物及其合成方法和应用，属于医药领域，主要解决的是现有技术的肺癌顺铂类药物耐药性的技术问题，所述方法具体如下：(1)将铱二聚体[I r(2pq)2Cl]2和4‑溴‑8‑羟基喹或5‑溴‑8‑羟基喹啉加入到极性溶剂中，得到混合溶液；(2)将得到的混合溶液在密封条件下于100°C条件下反应，得到沉淀物；(3)将沉淀物过滤、干燥，得到目标配合物。研究发现配合物4BrIr和5BrIr靶向抑制A549/DDP的生长，其IC50值分别为0.53±0.11μM和0.09±0.03μM，其体外抗肺癌活性远远大于4Br、5Br配体，说明它们靶向肺癌且克服了顺铂的耐药性。体内抗癌研究发现，其体内抗癌抑制作用达到43.5％，高于顺铂药物，具有潜在的药用价值，有望用于各种抗肺癌药物的制备。

摘要： 本发明公开了一种与肿瘤细胞顺铂耐药性相关的miR‑517a‑3p及其应用；本发明还公开了一种检测肿瘤细胞对顺铂耐药性程度的试剂盒。本发明通过建立SK‑OV‑3/DDP耐药细胞株发现miR‑517a‑3p可以作为肿瘤细胞耐药性的标志物；miR‑517a‑3p在SK‑OV‑3/DDP细胞对DDP耐药中发挥着一定的作用，通过下调miR‑517a‑3p能逆转SK‑OV‑3/DDP细胞对DDP耐药；并且能抑制卵巢癌SK‑OV‑3/DDP细胞的增殖速度，同时也抑制其克隆行成能力。从而为寻找新的分子治疗靶标，指导临床用药，并更加有效对抗顺铂耐药提供科学的依据。

摘要： 本发明属于药学领域，特别涉及穿心莲内酯与顺铂联合用药在制备治疗顺铂耐药性肺癌药物中的应用。本发明首次分析穿心莲内酯与顺铂联合用药在治疗顺铂耐药性肺癌的效果，拓展了该化合物的新用途。

摘要： 本发明公开了一种Smad3蛋白作为卵巢癌抗顺铂耐药新靶点的应用。目前针对Smad3蛋白与卵巢癌的关系、及卵巢癌中顺铂耐药机制的关系尚未见研究。为了明确卵巢癌患者顺铂耐药的机制，为卵巢癌患者提供更明确的治疗策略和药物，本发明获得了调控顺铂敏感性的新分子靶标Smad3蛋白，表明Smad3蛋白作为卵巢癌抗顺铂耐药新靶点的应用。本发明采用双硫仑与顺铂联合应用于治疗卵巢癌，治疗效果优于单独的顺铂治疗效果。

摘要： 本发明提供了八宝丹在制备用于治疗顺铂耐药性胃癌的药物中的用途。研究发现，不同浓度的八宝丹能明显地抑制耐DDP的胃癌细胞的生长、迁移、侵袭及黏附能力，能够抑制胃癌耐药细胞SGC7901/DDP细胞生长和转移，降低其对DDP的耐药性，由此八宝丹能够用于DDP耐药性胃癌的治疗。

摘要： 本申请公开了一种人膀胱癌顺铂耐药细胞株，命名为人膀胱癌顺铂耐药细胞株5637‑CDDP‑A1，其保藏编号为GDMCC No：61947。该人膀胱癌耐药细胞株的耐药指数符合耐药株的评定要求，在研究膀胱癌耐药机制、挖掘膀胱癌顺铂耐药新靶点，逆转膀胱癌细胞耐药性和指导病人用药方面具有重要的应用前景。

摘要： 本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及异荭草素联合顺铂在制备逆转肺癌耐药的药物中的应用；本发明通过建立A549细胞株、顺铂耐药细胞模型A549/DDP及其小鼠模型，通过体内外药效学研究发现，IO与顺铂联用后，耐药细胞活力明显下降，细胞内铁、MDA和ROS浓度明显上升，GSH浓度明显下降，细胞发生铁死亡；同时，发现Nrf2、GPX4和SIRT6蛋白的表达水平均下调，基于介导SIRT6/Nrf2/GPX4信号通路调控细胞铁死亡，IO可以增加肿瘤细胞内顺铂的浓度，与顺铂联用能抑制顺铂耐药性肿瘤的生长。