全细胞膜片钳

摘要： 目的 探讨多巴胺激活电压依赖性钾(Kv)通道抑制葡萄糖刺激胰岛素分泌的电生理机制.方法 分离雄性SD大鼠胰岛和β细胞,根据实验使用多巴胺(DA)、D1样受体激动剂(SKF38393)和D2样受体激动剂(Quinpirole)及阻断剂(Eticlopride)进行干预.酶联放射免疫实验测定胰岛素含量;膜片钳电压钳记录β细胞膜上Kv通道电流的变化,电流钳记录动作电位时程的长短;DiBAC4(3)染色观察INS-1细胞膜电位的变化.结果 SKF38393对胰岛素分泌和Kv通道均没有明显影响;Quinpirole明显抑制胰岛素分泌,并且增加Kv通道电流;多巴胺明显抑制胰岛素分泌,增加Kv通道电流,缩短β细胞动作电位时程,且均可被Eticlopride逆转;此外,多巴胺降低INS-1细胞膜电位.结论 多巴胺作用于D2样受体,活化Kv通道,缩短动作电位时程,降低 β细胞膜电位,从而发挥抑制葡萄糖促进胰岛素分泌的作用.

摘要： 目的探讨芍药苷通过抑制钙激活氯通道TMEM16A进而减少NFκB活性治疗急性胰腺炎作用。方法采用细胞培养、ELISA、Western blot、细胞转染、全细胞膜片钳技术及分子模拟对接等方法,观察腺泡细胞炎症时芍药苷对TMEM16A蛋白以及通道电流,及其对下游核转移因子NFκB活性和炎性细胞因子的作用,以及芍药苷与TMEM16A蛋白的结合情况。结果芍药苷能降低腺泡细胞中TMEM16A蛋白表达,减少腺泡细胞内NFκB的磷酸化程度,减少AR42J腺泡细胞炎症时细胞培养上清液中TNF-α和IL-6含量。此外芍药苷可降低转染TMEM16A质粒的HEK293细胞中TMEM16A钙激活氯电流作用。芍药苷分子与TMEM16A蛋白通过Arg373,Leu627和Asp812三个重要氨基酸残基紧密结合。结论芍药苷可靶向抑制钙激活氯通道TMEM16A减少NFκB磷酸化作用治疗急性胰腺炎。

摘要： 目的观察中药单体芍药苷及丹皮酚对hERG、Iks、Katp、Cav 3.2、HCN_(2)、HCN4等离子通道的作用,探讨2种中药单体在离子通道水平上的作用机制。方法运用全细胞膜片钳技术观察1 uM及10 uM 2种不同浓度芍药苷及丹皮酚对hERG、Cav 3.2、Iks、Katp、HCN2、HCN4等离子通道电流的抑制作用。结果2种浓度的芍药苷及丹皮酚均对离子通道的电流具有一定的抑制作用,10 uM浓度药物对离子通道电流的阻断作用普遍优于1 uM。针对不同的离子通道,芍药苷对Cav 3.2离子通道的抑制作用较明显,丹皮酚对IKs通道的抑制作用较显著。结论2种中药单体对多种离子通道均有一定的阻断作用,且呈浓度依赖性,这可能是2种中药单体发挥抗心律失常的作用机制之一。

摘要： 目的研究替米沙坦对大鼠胰岛素分泌的影响及相关的电生理机制。方法胰岛和胰岛细胞由成年Wistar大鼠胰腺分离获得。通过胰岛素分泌实验观察替米沙坦对胰岛素分泌的影响,使用钙成像实验和全细胞膜片钳技术观察药物对β细胞内Ca浓度的影响和对离子通道的作用。结果替米沙坦在低糖浓度下对胰岛素分泌无影响,在高糖浓度下则表现出逐渐增强的促胰岛素分泌作用。钙成像实验显示在高糖浓度下替米沙坦可以升高β细胞内Ca浓度。膜片钳实验表明替米沙坦可以抑制β细胞的电压门控性钾(voltage-gated potassium channel,Kv)通道和激活电压门控性钙通道(voltage-gated calcium channel,VGCC)。结论替米沙坦可以通过作用于β细胞的Kv通道和VGCC升高细胞内Ca浓度,从而葡萄糖浓度依赖性地促进胰岛素分泌。

摘要： 从东亚钳蝎蝎毒中分离鉴定出新型的Na~+通道毒素,采用Sephadex-G-50分子筛、高效液相色谱、多肽指纹图谱及氨基酸测序等技术从野生东亚钳蝎毒液中分离鉴定了一种长链多肽毒素BmK M2,其相对分子质量为7 235.5,由64个氨基酸组成,包含4对二硫键。序列比对显示,BmK M2的序列与已发现的Na~+通道毒素BmK M1、BmK M3、BmK M9等具有较高的序列和结构相似性,是一种潜在的新型Na~+通道调节剂。全细胞膜片钳实验结果显示,BmK M2可显著增强电压门控Na~+通道Nav1.7的激活,延迟Nav1.7的稳态失活及关闭状态失活,但对Nav1.8无活性。实验结果表明BmK M2可作为一种新型的Na~+通道探针,用于Nav1.7结构功能研究以及靶向药物的开发。

摘要： 目的:介绍一种利用膜片钳技术标记脑片神经元形态的方法.方法:利用振动切片机切好实验目标部位的脑片,用含有NeurobiotinTM Tracer的电极内液灌注玻璃微电极,并进行全细胞膜片钳记录;实验结束后将脑片先用4％多聚甲醛固定、漂洗,再用含有Streptavidin-Texas Red和Triton X-100的PB染色,2h后即可用荧光显微镜观察着色的神经元.结果:将细胞膜电压钳制在-70 mV,阶跃刺激后神经元表现为逐渐增大的膜电流.电流钳模式记录时,阶跃刺激使神经元去极化,达到阈电位后爆发动作电位.荧光显微镜下可看到胞体和主要突起清晰完整的神经元形态.结论:本方法适用于在膜片钳实验后观察所记录的神经元的形态特征,操作方便,图像直观清晰.

摘要： 家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu,S.jiafu)是一种生活在中国广西、云南等地的蜘蛛新种.研究发现其粗毒对大鼠背根神经节(Rat dorsal root ganglion,DRG)细胞河豚毒素不敏感型钠通道(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)具有抑制作用.为了筛选得到抑制TTX-R活性的毒素分子,经反相高效液相色谱,从家福捕鸟蛛粗毒中分离得到1种新的毒素分子,命名为家福捕鸟蛛毒素-22(Jiafu toxin-22,JFTX-22).MALDI-TOF质谱分析和氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为2807.227 Da,全序列为RCLPSGKACAGVTQK IPCCGSCVRGKCS.全细胞膜片钳分析表明JFTX-22对DRG细胞TTX-R通道具有抑制作用.此外,采用生物信息学方法初步分析了JFTX-22的基本理化性质、空间结构预测和同源序列比对等.结果表明JFTX-22的全长cDNA为471bp,编码一个65个氨基酸残基多肽.JFTX-22的二级结构主要以无规卷曲为主,其空间结构主要包含无规卷曲和三段反平行beta-折叠.同源序列比对发现JFTX-22跟Covalitoxin-I序列完全一致,与另外三种蜘蛛毒素JZTX-51、U1-theraphotoxin-Pf3和HWTX-X同源性较高.结果表明JFTX-22是一种潜在的具有镇痛活性的新型毒素分子.

摘要： 目的:研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用.方法:以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征.结果:刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显.结论:ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程.

摘要： 目的:观察高氧环境下星形胶质细胞焦亡过程中的电生理学变化特征及其与细胞形态变化的相关性.方法:星形胶质细胞暴露于氧浓度为90％的常压高氧环境中12～72 h,应用全细胞膜片钳技术分别于不同时间点检测各组细胞的电生理活动特性,并观察相应时间点的细胞形态学变化,然后收集同批次细胞,应用蛋白质印迹法检测其caspase-1,caspase-3,功能蛋白(gasdermin,GSDM)D和GSDME表达水平.结果:常压高氧暴露后12～72 h,全细胞膜片钳记录到内向电流较对照组明显降低(P0.05).各时间点细胞形态学表现相应改变.蛋白质印迹法检测显示:caspase-1表达活性在高氧暴露24 h时明显增加(P0.05),但是在高氧暴露48 h时开始减少(P<0.05);GSDME在高氧暴露24 h后逐渐增加(P<0.05).结论:高氧环境下星形胶质细胞离子通道受损,维持细胞内外离子稳态的功能发生障碍,GSDME被激活,使受损细胞脱离凋亡通路并介导细胞焦亡途径.

摘要： 目的 观察转录因子特异性蛋白1(specific protein 1,Sp1)对心肌细胞Kv2.1钾通道蛋白及电流的影响.方法 构建Sp1基因的表达质粒pEGFP-N2-Sp1,转染H9C2心肌细胞.Western blot检测转染前后Kv2.1钾通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测转染前后Kv2.1电流密度和电流特性的变化.结果 与对照组相比,Sp1能明显增强Kv2.1钾通道蛋白表达(P0.05).结论 Sp1增强Kv2.1钾通道电流,加快该通道的激活.

摘要： 目的：探讨昆明(KM)小鼠和C57BL6/J(C57)小鼠的心脏电生理不同性及其机制。方法：分别记录KM和C57小鼠的在体ECG和Langendorff灌流下左右心室外膜单相动作电位,分析QT间期和程序电刺激(PES)下动作电位各参数的改变。全细胞膜片钳技术记录左右心室外膜单个细胞的瞬时外向钾电流(Ito)。结论：KM小鼠的QT间期和APD明显长于C57小鼠，从而更容易诱发室性心律失常，其可能机制与KM小鼠的Ito明显降低有关。

摘要： 目的：观察单独及联合使用延胡索乙素和人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响。rn 方法：采用急性酶解分离法获得大鼠的单个心肌细胞，使用全细胞膜片钳技术记录钙通道电流。观察给药前后钙通道电流峰值的变化。rn 结果：单独使用延胡索乙素（3，10，100μmol/L）对钙电流峰值的抑制率分别为:1.4±2.7%（n=5）;8.3±6.4%（n=6）;27.2±8.7%（n=13）。单独使用人参皂苷Re（3，10，100μmol/L）对钙电流峰值的抑制率分别为5.2±4.7%（n=3）；20.4±13.3%（n=4）；68.8±9.5%（n=6）。联合使用人参皂苷Re（20μmol/L）和延胡索乙素（40μmol/L）对钙通道电流峰值的抑制作用强于单独使用人参皂苷Re（20μmol/L）或延胡索乙素（40μmol/L），差异有统计学意义（P﹤0.05）。毛喉素（forskolin 10mmol/L）能够减弱人参皂苷Re 对L-型钙通道的抑制作用，而加强延胡索乙素的抑制作用。rn 结论：人参皂苷Re和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道均有抑制作用，两者联合使用能够产生增强协应，并且这两种有效成分调控L-型钙通道的作用机制不同。

摘要： 目的:探讨承载丸对鼠成骨细胞钙离子通道的影响与动物模型中组织学改变的相关性。方法:进行两种实验。实验一,利用全细胞膜片钳技术测定经甲基强的松龙(mPSL)预处理及预处理后加入承载丸含药血清的成骨细胞钙离子通道电流;实验二,使用内毒素及mPSL制作股骨头坏死大鼠动物模型,在此基础上给与承载丸干预,测定各组动物股骨头骨小梁面积、骨矿化速率、毛细血管面积、空骨陷窝率、髓腔空缺率,并将实验一和二进行相关性分析。结果:mPSL可明显降低成骨细胞钙离子通道电流,承载丸可明显升高经mPSL降低后的钙离子通道电流;动物实验的模型组呈现:骨小梁面积、骨矿化速率、毛细血管面积均明显降低,空骨陷窝率及髓腔空缺率均明显升高。承载丸组则明显地升高了骨小梁面积、骨矿化速率、毛细血管面积,而明显降低了空骨陷窝率及髓腔空缺率。结论:承载丸属钙离子通道激动剂,提示在治疗激素性股骨头坏死时使用钙离子通道激动剂有助于成骨细胞的生长发育,有助于坏死细胞的修复。

摘要： 一种用于细胞膜片钳的微流控细胞吸附芯片，属于微流控相关领域。该芯片包括主通道和膜片钳通道；主通道主要由流体入口、入口主通道、“蛇形”通道、出口主通道和流体出口依次连接构成；“蛇形”通道由多组弯道依次连接构成，每个弯道包括两个弧度通道和一个平直通道，平直通道设置于两个相互对称的弧度通道之间；每个平直通道的左右两端各连通一条膜片钳通道；每条膜片钳通道由内侧的尖端通道与外侧的非尖端通道构成；尖端通道设置在平直通道和非尖端通道的底部，相对称的两条膜片钳尖端通道与平直通道构成“十”字型。本发明不仅可消除已有膜片钳微流控细胞吸附芯片的缺陷，并且可以提升细胞捕获效率，减少需施加的负压值，且制作工艺简单。

摘要： 一种平面膜片钳装置，具有：电绝缘性基板(2)，其在细胞配置区域(4)内具有不使细胞通过但能够使液体通过的贯通孔(3)；第一贮液部(6)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第一表面(2S)侧，且保持第一导电性液体；第一电极部(7)，其配置为能够与第一贮液部(6)电导通；第二贮液部(6′)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第二表面(2S′)侧，且保持第二导电性液体；第二电极部(7′)，其配置为能够与第二贮液部(6′)电导通；送液流路(8)，其向第二贮液部(6′)输送第二导电性液体；排液流路(9)，其从第二贮液部(6′)排出第二导电性液体；以及阀(10)，其设置于送液流路(8)以及/或者排液流路(9)，能够允许或者停止第二导电性液体的流通，并且能够允许或者停止第二贮液部(6′)与第二电极部(7′)的电导通。

摘要： 一种用于细胞膜片钳的微流控细胞吸附芯片，属于微流控相关领域。该芯片包括主通道和膜片钳通道；主通道主要由流体入口、入口主通道、“蛇形”通道、出口主通道和流体出口依次连接构成；“蛇形”通道由多组弯道依次连接构成，每个弯道包括两个弧度通道和一个平直通道，平直通道设置于两个相互对称的弧度通道之间；每个平直通道的左右两端各连通一条膜片钳通道；每条膜片钳通道由内侧的尖端通道与外侧的非尖端通道构成；尖端通道设置在平直通道和非尖端通道的底部，相对称的两条膜片钳尖端通道与平直通道构成“十”字型。本发明不仅可消除已有膜片钳微流控细胞吸附芯片的缺陷，并且可以提升细胞捕获效率，减少需施加的负压值，且制作工艺简单。

摘要： 本发明确保在培养基内细胞膜片的位置稳定的状态下容易地对细胞膜片两面进行观察。细胞膜片制造装置(100)具备容器(20)以及可接触/分离地收纳于容器(20)中的支撑体单元(10)，所述支撑体单元(10)具有网状膜片(2)以及将网状膜片(2)保持为从容器(20)的底面浮起的基座(3)；支撑体单元(10)是以在培养基中垂直方向及水平方向的位置均固定的方式收纳于容器(20)中。

摘要： 本发明提供了一种硬腭来源间充质干细胞膜片和细胞膜片种植体复合物及其制备方法，涉及牙齿种植修复技术领域。本发明以动物硬腭来源的间充质干细胞为原料，采用特殊的光控二氧化钛纳米点表面培养形成细胞膜片，并包裹于种植体周围形成细胞膜片种植体复合物。本发明利用具有生物活性表面的种植体，提升了种植体的生物相容性，可拓宽口腔种植适应证、提高骨愈合能力、缩短种植周期；并且将细胞膜片包裹于种植体表面，动物实验证实其与未包裹膜片的种植体相比，能促进成骨，加快骨结合。

摘要： 本说明书涉及一种多层细胞膜片的制备方法，包括：(a)在0°C至30°C中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。本说明书还涉及利用所述制备方法制备的多层细胞膜片。

摘要： 本发明公开了PD‑1细胞膜纳米囊泡联合干细胞膜片在恶性黑色素瘤术后治疗中的应用。所述细胞膜纳米囊泡过表达有免疫检查点对应受体且带有DBCO标记；所述干细胞膜片为叠氮化物修饰的干细胞膜片。通过将叠氮化物修饰的干细胞膜片敷在恶性黑色素瘤伤口处，促进伤口愈合，同时注射表达免疫检查点对应的受体且标记有DBCO的细胞膜纳米囊泡，囊泡经过血液循环到达伤口处时，能够通过点击化学反应跟干细胞膜片结合，实现在伤口处的富集，进而起到靶向作用，实现对黑色素瘤术后精准靶向免疫治疗的目的，从而实现促进伤口愈合和靶向抗黑色素瘤的双重功能。

摘要： 一种平面膜片钳装置，具有：电绝缘性基板(2)，其在细胞配置区域(4)内具有不使细胞通过但能够使液体通过的贯通孔(3)；第一贮液部(6)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第一表面(2S)侧，且保持第一导电性液体；第一电极部(7)，其配置为能够与第一贮液部(6)电导通；第二贮液部(6′)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第二表面(2S′)侧，且保持第二导电性液体；第二电极部(7′)，其配置为能够与第二贮液部(6′)电导通；送液流路(8)，其向第二贮液部(6′)输送第二导电性液体；排液流路(9)，其从第二贮液部(6′)排出第二导电性液体；以及阀(10)，其设置于送液流路(8)以及/或者排液流路(9)，能够允许或者停止第二导电性液体的流通，并且能够允许或者停止第二贮液部(6′)与第二电极部(7′)的电导通。

摘要： 本实用新型公开了一种膜片钳银丝以及用于膜片钳银丝的电镀装置，其包括电镀盒体、电镀盖体和电源模块，所述电镀盒体与电源模块的负极连接用于放置电镀液，所述电镀盖体与电源模块的正极连接，所述电镀盖体用于固定膜片钳银丝，这样，本实用新型利用电镀的原理设计用于膜片钳银丝的电镀装置，能够快速、便携、稳定地对膜片钳银丝进行电镀，并且能够在膜片钳银丝的表面获得一层致密、均匀、牢固的AgCl层；此外，采用本实用新型对膜片钳银丝进行电镀，是直接对银丝和膜片钳探头焊接后的膜片钳银丝进行电镀，能够避免将银丝与连接金属拆卸、电镀、电焊的步骤，同时便于银丝的安装，操作简单，极大地提高了电镀的效率。

摘要： 本发明提供一种适用于全细胞膜片钳装置的视网膜成像系统，其特征在于，包括：投影装置，用于给光；显微镜装置，包括第一透镜以及第二透镜；灌流装置，包括浴槽，用于盛装预定溶液以及视网膜；滤纸，设置在浴槽底内，位于视网膜下方；其中，投影装置，包括电脑、数字微镜器件、分束镜以及显示屏，电脑用于获取自定义图形，并将该图形传输给数字微镜器件，数字微镜器件包括小镜片，用于将该镜片旋转适当角度得到并发出与图形对应的光，分束镜、第二透镜以及第一透镜依次设置在数字微镜器件的光路上，第一透镜位于视网膜的上方。