摘要:
目的 探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)抑制TLR4/NF-κB通路减少蛛网膜下腔出血(SAH)后神经元凋亡的作用及其机制.方法 采用随机分组的方式将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham 组 n=24,Sham 2组 n=21)、SAH 模型组(SAH 组 n=24,SAH 2组 n=21)及 SAH 模型+G1激动剂组(简称G1组,n=24).通过颈内动脉穿刺法进行SAH模型的构建.采用Sugawara评分评价大鼠SAH的严重性.SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度.成功建模24 h后,称重脑组织湿重和干重,计算脑组织含水率.绘制伊文思蓝标准曲线,评估血脑屏障通透性.采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况.采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组GPR30、TLR4及NF-κB蛋白的表达情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血TNF-α、IL-1β和IL-6促炎细胞因子的表达情况;采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 与SAH组相比,G1组Sugawara评分降低、平衡木试验评分和Garcia评分升高、脑含水率和伊文思蓝的渗出率均降低(均P<0.05).随着时间的变化,Sham 2组GPR30表达量无明显变化(P>0.05),建模后6、12、24、48和72 h,SAH2组的GPR30表达量均较Sham 2组高,SAH 2组建模24 h的GPR30表达量最高,而后下降(均P<0.05).Sham组、SAH组与G1组三组间比较,GPR30、TLR4和NF-κB表达量的差异均有统计学意义(均P<0.05),其中G1组较SAH组TLR4和NF-κB表达量下降(均P<0.05).免疫荧光染色结果显示,SAH组小胶质细胞数目较Sham组增多,而G1组较SAH组的小胶质细胞减少.ELISA结果显示,SAH组、Sham组与G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达差异均有统计学意义(均P<0.05),其中,与SAH组比较,G1组的TNF-α、IL-1 β及IL-6的表达均降低(均P<0.05).TUNEL法染色结果显示,SAH组的TUNEL阳性细胞数较Sham组增加,而G1组较SAH组的TUNEL阳性细胞数减少.结论 GPR30活化后可能通过抑制TLR4/NF-κB通路减少SAH后的神经元凋亡,改善SAH后早期脑损伤,保护神经功能.