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海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测r及免疫效果评价

         

摘要

为检测斑点叉尾鮰源海豚链球菌兼职蛋白(fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10_RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(rFBA),制备了兔抗rFBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果.结果显示,海豚链球菌DX09 fba基因有1个882 bp的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸.生物信息学分析显示,其分子式为C1378H2172N368O422S8,分子质量为30.9 ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100%;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位.SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47 ku.Western blot分析表明,兔抗rFBA血清能特异性结合菌体蛋白.同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55%,免疫后鱼体抗体水平相对对照组显著升高.本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09 rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值.

著录项

  • 来源
    《水产学报》 |2018年第9期|1454-1462|共9页
  • 作者单位

    中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380;

    四川农业大学鱼病研究中心,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物疫病与人类健康/四川省重点实验室,四川 成都 611130;

    四川农业大学鱼病研究中心,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物科技学院,四川 成都 611130;

    四川农业大学鱼病研究中心,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物疫病与人类健康/四川省重点实验室,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物科技学院,四川 成都 611130;

    四川农业大学鱼病研究中心,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物疫病与人类健康/四川省重点实验室,四川 成都 611130;

    中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380;

    四川农业大学鱼病研究中心,四川 成都 611130;

    四川农业大学动物疫病与人类健康/四川省重点实验室,四川 成都 611130;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 转化及克隆;水产生物学;
  • 关键词

    斑点叉尾鮰; 海豚链球菌; 兼职蛋白; 原核表达; 候选疫苗;

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