摘要:鉴定PLIN1基因转录起始位点,确定牛PLIN1基因核心启动子区域,为进一步研究牛PLIN1基因的转录调控机制奠定基础.以秦川牛脂肪5'RACE准备cDNA为模板,设计5'RACE扩增试验,确定牛PLIN1基因转录起始位点.以秦川牛外周血基因组DNA为模板,通过PCR克隆获得牛PLIN1基因转录调控区-1844/+134目的片段.通过生物信息学分析软件预测可能包含的转录因子结合位点,设计逐段缺失引物,获得8个亚克隆,将其分别与pGL3-Basic载体连接,得到牛PLIN1基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,通过脂质体法转染3T3L1细胞系,检测8个重组质粒的荧光素酶活性,分析启动子活性.确定了牛PLIN1基因的转录起始位点,成功克隆获得8个系列缺失的牛PLIN1基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒;pPLIN1-1844/+134,pPLIN1-1431/+134,pPLIN1-1011/+134,pPLIN1-744/+134,pPLIN1-582/+134,pPLIN1-353/+134,pPLIN1-209/+134,和pPLIN1-17/+134,其中重组质粒pPLIN1-209/+134启动子活性极显著高于pPLIN1-17/+134和pGL3-Basic,推测牛PLIN1基因-209/-17区域可能包含核心启动子.生物信息学分析发现,牛PLIN1基因启动子-209/-17片段可能包含SP1、GCBox、CAAT等多个重要转录因子结合位点.成功构建了8个系列缺失的牛PLIN1基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,且初步确定了牛PLIN1基因的核心启动子区域位于-209/-17.