抗独特型抗体

摘要： Bt蛋白制剂及其转基因作物长时间推广应用,害虫抗药性等问题日益凸显,探索新型安全抗虫材料已成为竞先研究的热点。基于抗体免疫网络学说的抗独特型抗体技术被证实可用于研发抗原生物活性类似物,有望成为靶向创制模拟Bt蛋白抗虫功能材料的新途径。以Bt Cry1C蛋白多克隆抗体为包被抗原,从人源化噬菌体单链抗体库中获得9个阳性单克隆,其中E8-Anti-Id scFv经鉴定为β型抗独特型基因工程单链抗体。Bt Cry1C蛋白多克隆抗体、小菜蛾(Plutella xylostella)刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)蛋白和稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)BBMV蛋白对E8-Anti-Id scFv的竞争抑制中浓度(IC_(50))分别为2.625、3.638和4.605μg/mL。室内生物测定显示,噬菌体展示形式的E8-Anti-Id scFv在滴度为1.2×10^(8) CFU/mL浓度条件下,对供试的小菜蛾和稻纵卷叶螟在72 h内的校正死亡率为58.69%和52.82%,其抗虫活性分别达到浓度为20μg/mL的原Bt Cry1C蛋白的77.87%和73.21%。由此表明,获得的E8抗独特型基因工程单链抗体材料初步具备模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的特性,为后期深入研究和推进应用奠定了技术和材料基础。

摘要： The hazards which affect the quality and safety in edible agricultural products are widely sourced and varied. The hazard risks of biological and chemical pollutants almost accompany the entire supply chains in edible agricultural products, from production environment and agricultural inputs to the harvest, storage and transportation links. It is an inevitable requirement for the sustainable development to efficiently monitor the hazardous materials and research its functional effector for edible agricultural products. The immune network theory-based anti-idiotype antibodies have been proved to be useful for antigenic effector preparation because the characterizing of simulate conformation and even biological activity of antigenic epitope, which provided a new idea of monitoring the hazards of edible agricultural products or functional alternative materials. In this study, the hazards and safety risks which may involve in the process of production and supply of edible agricultural products have been systematically sorted out. Meanwhile, anti-idiotype antibodies technology and the application status in monitoring hazards of ed-ible agricultural products have been comprehensively introduced and collated. Finally, we have studied the application prospects, existing problems and counter measures of anti-idiotype antibodies for monito-ring hazards in edible agricultural products.%食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链.对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全监控可持续发展的必然要求.基于"免疫网络学说"的抗独特型抗体,因具有模拟抗原表位构象乃至生物活性的特性,已被证实可以用于免疫原功能效应物创制,这为食用农产品质量安全危害物检测或功能替代材料研发提供了新思路.系统梳理了食用农产品产供过程中可能涉及的危害物及其安全风险;全面整理并介绍了抗独特型抗体技术及其在食用农产品质量安全危害物监控中的应用状况;结合作者及所在团队近年科研成果,探讨了抗独特型抗体在食用农产品质量安全危害物监控中的应用前景、存在问题以及拟解决对策.

摘要： 为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库.以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫.在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分.选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成cDNA第一链.设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接.SOE-PCR产物和pIT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli.TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定.结果表明,免疫鼠血清的效价在1:1.6×105到1:6.4×105倍之间.免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17.6％的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在.最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6.04.

摘要： Some unique subclasses of Camelidae antibodies are devoid of the light chain,and the antigen binding site is comprised exclusively of the variable domain of the heavy chain(VHH).The recombinant VHHs have a high potential as alternative reagents for the next generation of immunoassay.In particular,they might be very useful for molecular mimicry.The present study demonstrated an alpaca immunized with the F(ab’)2fragment of anti-aflatoxin B1 mAb and developed an important anti-idiotypic(anti-Id)responses.Antigen-specific elution method was used for panning private anti-Id VHHs from the constructed alpaca VHH library.The selected VHHs were expressed,renatured,purified,and then identified by a competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Our findings indicated that the VHH would be an alternative tool for haptens mimicry studies.

摘要： 建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法,并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1.通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体(11A9和1G3)制备F(ab')2片段,并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体.最终得到两种抗独特型抗体,并对抗独特型抗体和AFB1进行相关性分析.通过实际样品添加回收,其批内回收率为115.60％～121.88％,变异系数在5％以内;而批间回收率为111.89％～126.98％,变异系数低于8％.分析结果准确可靠,表明此无毒绿色ELISA是一种安全可靠的AFB1分析方法.

摘要： Mycotoxin immunoassays depend on interactions between antibodies and mycotoxins.Although intact antibodies with high affinity and specificity were well developed,novel materials instead of conventional antibodies or mycotoxins for immunoassays attracted more and more attention. The alternatives can be classified into those that are represented by recombinant antibodies and their fragments such as single chain variable fragments,and those that are obtained by chemical synthesis such as molecularly imprinted polymers,and those that are used to replace mycotoxin standards such as anti-idiotypic antibodies. Recent developments of novel materials and their potential for application in mycotoxin immunoassays were reviewed.%真菌毒素免疫分析是基于抗体与真菌毒素间的相互作用 . 虽然具有高亲和力及特异性的抗体制备技术已非常成熟,但代替传统抗体或真菌毒素的新型检测元件越来越受到人们的关注.这些元件分为以重组抗体片段为代表的重组类检测元件,如单链抗体,以化学法人工合成的合成类检测元件,如分子印迹聚合物,及其他用于取代真菌毒素标准品的检测元件,如抗独特型抗体.本文重点综述了新型真菌毒素检测元件的研究进展,及其在真菌毒素免疫分析中的应用前景.

摘要： 目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据.方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定.结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在“内影像”关系.结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测.

摘要： 【Objective】 This study was done to investigate the mechanism of porcine growth hormone anti-idiotypic antibody using rat hepatocytes as the experimental model.【Method】 We produced the monoclonal anti-idiotypic antibody(named as CG1) by immunization of BALB/c mice with purified monoclonal anti-pGH antibody.This antibody was used as biological tools to explore biological activity of CG1 by flow cytometry,laser confocal microscope and Western-blot.【Result】 Three strains of porcine growth hormone anti-idiotypic monoclonal antibody,named CG1,CG2,and CG3,were produced successfully.CG1 showed the strongest positive signal among them.It was identificated that CG1 belonged to Ab2β anti-idiotypic antibody,IgG2a subclass.The results confirmed that CG1 may activate growth hormone receptor throught dimerization and signal transduction protein JAK2.【Conclusion】 The anti-body CG1 may bind to growth hormone receptor expressed on the surface of rat liver cell and trigger signal transduction protein JAK2.%【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F（ab′）2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。

摘要： 目的:以抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab')2片段作为免疫原制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体.方法:制备抗总黄曲霉毒素单抗2G2 株F(ab')2片段,分别用F(ab')2片段和F(ab')2-KLH免疫日本大耳白兔,制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体.采用ELISA检测该抗体替代黄曲霉毒素B1(AFB1)的情况,并分析与其他单克隆抗体的交叉反应情况.用该多克隆抗体免疫BALB/C小鼠,采用间接非竞争ELISA检测小鼠血清,鉴定该抗体的亚型.结果:由2G2株F(ab')2片段所得的抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体纯化后,替代游离AFB1达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和25 mg/L,分别相当于0.47、2.74和16.00 μg/L游离AFB1;该抗体替代AFB1包被抗原达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和19 mg/L,分别相当于0.33、1.35和5.45 μg/L游离AFB1.小鼠生物鉴定显示该多克隆抗体为Ab2β型.结论:成功制备了抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体,为研制AFB1无毒检测试剂盒提供了依据.%Aim:To prepare polyclonal anti-idiotype antibody against anti-aflatoxins(AFBs) monoclonal antibody F(ab')2 fragment.Methods:Polyclonal anti-idiotype antibody against anti-AFBs monoclonal antibody was prepared by immunizing Japanese Flap-eared rabbits with anti-AFBs monoclonal antibody's F(ab')2 or F(ab')2 -KLH. The status of these polyclonal anti-idiotype antibodies in place of dissociative AFB1 and associative AFB1 was detected by indirected competitive ELISA and directed competitive ELISA, respectively. The subclass was identified by detecting the serum of BALB/C mouse immunized by these antibodies.Results:As the substitutiton for dissociative AFB1,the concentration of the polyclonal anti-idiotype antibody based on F(ab')2 fragment corresponded to AFB1,was 1 mg/L to 0.47 μg/L, 4 mg/L to 2.74 μg/L, 25 mg/L to 16 μg/L at IC20, IC50 and IC80;as the substitution for associative AFB1,was 1 mg/L to 0.33 μg/L,4 mg/L to 1.35 μg/L,19 mg/L to 5.45 μg/L at IC20, IC50 and IC80,respectively;and the identified subclass was Ab2β.Conclusion:The polyclonal anti-idiotype antibody against anti-AFBs monoclonal antibody has been established successfully,which provides the base of innocuity AFB1 ELISA kit.

摘要： 食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链.对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全监控可持续发展的必然要求.基于“免疫网络学说”的抗独特型抗体,因其具有模拟抗原表位构象乃至生物活性的特性,已被证实可以用于免疫原功能效应物创制,这为食用农产品质量安全危害物检测或功能替代材料研发提供了新思路.本文系统梳理了食用农产品产供过程中可能涉及的危害物及其安全风险;全面介绍和整理了抗独特型抗体技术及其在食用农产品质量安全危害物监控上的应用状况;并结合作者及所在团队近年科研成果,探讨了抗独特型抗体在食用农产品质量安全危害物监控上的应用前景、存在问题以及拟解决对策.

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种全球性猪传染病,已成为威胁世界养猪业的主要疫病之一.PRRSV感染宿主细胞是一个多步骤且需要多种细胞受体参与的过程.本实验室前期研究以免疫网络学说为理论基础,利用抗PRRSV GP5的独特型抗体Mab2-5G2找到了与PRRSV感染相关的一个新的受体-NMHCⅡA.本试验以Mab2-5G2杂交瘤细胞的mRNA为模板,通过RT-PCR技术克隆其VH和VL基因;构建表达抗独特型抗体Mab2-5G2的单链可变区片段(single-chain variable antibody fragment,SFv)的慢病毒真核表达载体并转导至PRRSV易感细胞系Marc-145中,经筛选鉴定后获得了稳定表达SFv的MARC-145,不同毒株(包括VR2332,SD16,BJ-4,JXA1,CH-1a,TA-4)感染后观察病毒复制增殖情况.Western blot、IFA和病毒滴定结果表明:与对照组细胞相比,不同PRRSV毒株N蛋白表达量及病毒滴度均出现不同程度的减少或下降.本研究结果证明SFv转导MARC-145后明显抑制PRRSV的增殖,提示NMHCⅡA在PRRSV感染中发挥重要作用.以上研究结果不仅丰富了对PRRSV与受体之间相互作用的了解,也为进一步探索和寻找潜在的抗PRRSV药物靶标提供了理论依据.

摘要： 用PRRSV感染SPF猪,血清检测结果显示,机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1),而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2).根据各种蛋白质的等电点不同,应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG.分别以纯化的抗PRRSV-GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头,7d后经鼻腔感染PRRSV,定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验.抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3～7d均检出PRRSV;3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV;2头猪在感染后14～35d检出PRRSV,从42～56d转为阴性,其中1头猪在63d时检出PRRSV.抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3～7d均检出PRRSV;2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV;3头猪在感染后14～35d检出PRRSV,从42～56d转为阴性,其中1头猪在63d时检出PRRSV.抗PRRSV-GP5和抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫作用显著,可作为PRRSV-GP5和PRRSV-M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体,保护机体免受PRRSV的感染。

摘要： 本文详细论述了抗独特型抗体的类型、功能、免疫调节作用及其在感染性疾病中的应用,它将在疫苗生产、肿瘤防治、自身免疫疾病的控制、防治和诊断中起着十分重要的作用.

摘要： 本文制备了鸡马立克氏病病毒IgG,建立了MDV单克隆抗独特型抗体的间接ELISA方法,并对试验结果进行了讨论.

摘要： 本文主要研究了鸡马立克氏病病毒抗独特型抗体在动物实验中诱导产生抗肿瘤的体液免疫的能力,为筛选用于临床的抗独特型疫苗提供依据.

摘要： 自1963年Kunkel等人发现抗体独特型idiotype，简称Id及1974年Jerne的免疫网络理论问世后，抗独特型抗体的研究日益兴旺。目前，这方面的研究已涉及新一代疫苗的产生、自身免疫性疾病发生机理、肿瘤治疗及生物受体的研究等领域。本文就抗独特型抗体的分子模拟机制及内影像抗独特型抗体的应用研究进展进行分述。

摘要： 选用六月龄内蒙古半细毛羯羊8只按体重相近原则分为3组:(1)对照组、(2)生长激素处理组、(3)抗独特型抗体组.各组动物日粮组成、营养水平及饲养管理相同.研究抗独特型抗体对动物蛋白、糖、脂肪代谢的影响,从而确定其捉生长作用机理.结果表明,这种免疫调节剂发挥了与生长激素类似的促生长、改善胴体品质的效力,尽管其效力较弱(特虽在提高日增重方面)但在氮代谢效率方面二者相当.进一步研究发现这种促生长作用是在组织代谢层次上实现的,具体讲就是通过降低尿素再循环、增加糖异生、提高组织氮沉积量途径来达到增加蛋白组织合成目标.

摘要： 本发明涉及针对结合因子VIII的C1结构域的因子VIII抑制性抗体的抗独特型单克隆抗体，还涉及产生这种抗独特型单克隆抗体的细胞系，涉及所述抗独特型单克隆抗体作为药物的用途，以及更特别地涉及它用于制造用于治疗血友病A的药物的用途。

摘要： 本发明涉及结合对抗淀粉样β肽的抗体的互补决定区的抗独特型抗体。在一个实施方案中，所述抗体结合与获自细胞系DSM ACC2939的抗体相同的表位或重叠的表位。还报道了用于测定对抗淀粉样β肽的抗体的免疫试验和用于测定结合对抗淀粉样β肽的抗体的抗独特型抗体的免疫试验。

摘要： 本发明公开了针对人CD22抗体的抗独特型抗体及其应用。该针对人CD22抗体的抗独特型抗体包括3个抗体重链互补决定区和3个抗体轻链互补决定区；所述3个抗体重链互补决定区的氨基酸序列分别如序列表中序列1的第31-35位、第50-66位和第99-106位，所述3个抗体轻链互补决定区的氨基酸序列分别如序列表中序列1的第154-168位、第184-190位和第223-231位。该抗独特型抗体特异性针对人CD22抗体，可以阻抑人CD22抗体与其自然配体人CD22抗原结合。

摘要： 本发明涉及的是一种血吸虫抗独特型抗体NP30嵌合Fab抗体片段及制备方法、应用，属于基因工程技术和制备免疫治疗药物领域。本发明是利用基因工程技术制备鼠源性血吸虫抗独特型抗体NP30的嵌合Fab片段，即将鼠源性抗独特型抗体的重链和轻链可变区与人IgG1的重链部分恒定区(CH1)及轻链恒定区(Cκ)进行重组，并插入到原核表达载体pComb3XSS中，进行表达。该嵌合Fab抗体片段保留了鼠源性抗独特型抗体的模拟抗原性及特异性，可用于血吸虫病免疫保护及急性血吸虫病的治疗。

摘要： 本发明涉及一种日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体及其制备方法、应用，属于基因工程技术和制备免疫治疗药物领域。本发明是利用基因工程技术制备日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体，应用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-linker-VL(Diabody，简称D)，linker长度选用5个氨基酸残基，序列为GGGGS，强迫两个scFv分子互相形成VH和VL配对，以非共价键结合而形成的二聚体，被称为双链抗体。该抗体可以用于急性血吸虫感染的治疗，以及血吸虫病的免疫保护。

摘要： 本发明涉及结合对抗淀粉样β肽的抗体的互补决定区的抗独特型抗体。在一个实施方案中，所述抗体结合与获自细胞系DSM ACC2939的抗体相同的表位或重叠的表位。还报道了用于测定对抗淀粉样β肽的抗体的免疫试验和用于测定结合对抗淀粉样β肽的抗体的抗独特型抗体的免疫试验。

摘要： 本发明公开了针对人CD22抗体的抗独特型抗体及其应用。该针对人CD22抗体的抗独特型抗体包括3个抗体重链互补决定区和3个抗体轻链互补决定区；所述3个抗体重链互补决定区的氨基酸序列分别如序列表中序列1的第31-35位、第50-66位和第99-106位，所述3个抗体轻链互补决定区的氨基酸序列分别如序列表中序列1的第154-168位、第184-190位和第223-231位。该抗独特型抗体特异性针对人CD22抗体，可以阻抑人CD22抗体与其自然配体人CD22抗原结合。

摘要： 本发明涉及结合对抗淀粉样β肽的抗体的互补决定区的抗独特型抗体。在一个实施方案中，所述抗体结合与获自细胞系DSM ACC2939的抗体相同的表位或重叠的表位。还报道了用于测定对抗淀粉样β肽的抗体的免疫试验和用于测定结合对抗淀粉样β肽的抗体的抗独特型抗体的免疫试验。

摘要： 本发明涉及的是一种血吸虫抗独特型抗体NP30嵌合Fab抗体片段及制备方法、应用，属于基因工程技术和制备免疫治疗药物领域。本发明是利用基因工程技术制备鼠源性血吸虫抗独特型抗体NP30的嵌合Fab片段，即将鼠源性抗独特型抗体的重链和轻链可变区与人IgG1的重链部分恒定区(CH1)及轻链恒定区(Cκ)进行重组，并插入到原核表达载体pComb3XSS中，进行表达。该嵌合Fab抗体片段保留了鼠源性抗独特型抗体的模拟抗原性及特异性，可用于血吸虫病免疫保护及急性血吸虫病的治疗。

摘要： 本发明涉及一种日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体及其制备方法、应用，属于基因工程技术和制备免疫治疗药物领域。本发明是利用基因工程技术制备日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体，应用overlap PCR法扩增双链抗体基因V