逆转录酶

摘要： 以2份AA染色体组野生种花生为试验材料,扩增分离Ty3-gypsy类逆转座子逆转录酶序列,分析其序列特征、多样性及进化关系。利用根据Ty3-gypsy类逆转座子逆转录酶的保守区设计的简并引物进行PCR扩增,对目的条带进行回收、克隆和测序后,对逆转录酶序列进行生物信息学分析。目的条带大小均约为430 bp,分别从2份AA染色体组野生种花生材料中分离到32、33条逆转录酶序列,对于65条逆转录酶序列,其长度变化范围为397~440 bp,A+T所占比例范围为56.48%~68.14%,(A+T)/(G+C)为1.3~2.13,核苷酸序列间相似性范围为62.6%~97.9%;65条逆转录酶序列被划分为9个家族,其中家族Ⅰ为主要成分;翻译成氨基酸后,序列间相似性范围为12.4%~98.6%,相比核苷酸序列,氨基酸序列表现出更高的异质性;65条逆转录酶序列中有26条发生了无义突变,2份野生种花生材料的无义突变发生率相当;序列间保守基序大体一致,但也发生了一定的变异,呈现出一定的异质性;9个家族所选代表序列的蛋白质结构总体类似,但也在螺旋结构数、折叠结构数、转角数、氢键数、α-螺旋数、β-折叠数上存在差别;系统进化树显示,所有逆转录酶序列被分为13类,A类和B类中包含大部分逆转录酶序列,E类中的5条AA染色体组野生种花生与其他物种植物的逆转录酶序列具有较高相似性,表明这些序列在进化过程中有可能发生了横向传递;通过比对花生EST数据库,发现3条来自Archis duranensis(PI262133)和2条来自A.duranensis(PI219823)的Ty3-gypsy类逆转座子具有转录活性,本研究为下一步分离Ty3-gypsy类逆转座子全长序列、研究其转录转座活性和功能提供序列基础,也为基于Ty3-gypsy类逆转座子的花生属分子标记开发奠定基础。

摘要： 酶的相关知识在高中生物学教学中具有非常重要的地位。本文重点讨论在教学中关于聚合酶的两个问题。

摘要： 新冠病毒基因会嵌入人类基因吗?麻省理工学院干细胞生物学家Rudolf Jaenisch和基因调控专家Richard Young共同研究发现,人类细胞中的一种酶可能会将新冠病毒的序列复制到DNA中,让病毒基因嵌入人类的染色体。在极少数情况下,人类细胞中的酶,即逆转录酶,由逆转录转座子LINE-1编码。这些序列散落在17%的人类基因组中,代表了由逆转录病毒引起的原始感染。研究人员提供了试管证据,表明当添加了额外的逆转录转座子LINE-1的人类细胞被新冠病毒感染时,新冠病毒序列的DNA版本嵌入了人类细胞的染色体。然而,许多专门研究逆转录转座子LINE-1和其他逆转录转座子的研究人员认为,这些数据过于单薄,无法支持这种说法。

摘要： 《科学》(2021.5.14)新冠病毒基因会嵌入人类基因吗?麻省理工学院干细胞生物学家Rudolf Jaenisch和基因调控专家Richard Young共同研究发现,人类细胞中的一种酶可能会将新冠病毒的序列复制到DNA中,让病毒基因嵌入人类的染色体。在极少数情况下,人类细胞中的酶,即逆转录酶,由逆转录转座子LINE-1编码。

摘要： [目的] 从甘蔗基因组中分离Ty3-gypsy类逆转座子的RT基因序列,分析序列的特点、差异及系统进化关系,为研究其转录活性和调控功能奠定基础.[方法] 根据Ty3-gypsy类逆转座子RT基因序列的保守区设计简并引物,对甘蔗品种新台糖22的基因组DNA进行PCR扩增,目的条带经回收、克隆和测序后,对所获得序列进行生物信息学分析.[结果] 目的条带大小约430 bp,成功分离到36条RT基因序列,只有1条序列的长度为430 bp,其余序列的长度均为432 bp,AT所占比为56.71％～64.81％,AT与GC比值为1.31～1.84;核苷酸序列间相似性为46.2％～99.3％.聚类分析后,36条RT基因序列被划分为5个家族,家族Ⅰ和家族Ⅳ是包含序列最多的家族.翻译后,有6条序列发生了无义突变;氨基酸序列间相似性为10.1％～100％,呈现高度异质性;36条RT基因序列中的34条序列的保守基序完全一致,呈现高度保守性.各家族中代表序列的蛋白质三级结构整体构型基本类似,但在氢键数和转角数上存在着较大差别,呈现一定异质性和多态性.系统进化树显示,所有RT基因序列被分为7类,Ⅰ类中的18条甘蔗RT基因序列与拟南芥的BAB40828.1具有较高相似性,Ⅶ类中的SoRT3-26与大豆的BAB40834.1、菠菜的BAB40833.1和粳稻的BAB40824.1的亲缘关系最近,暗示在进化过程中甘蔗与这些物种植物之间可能发生了Ty3-gypsy类逆转座子的横向传递;通过比对甘蔗EST数据库,发现了10条具有转录活性的甘蔗品种新台糖22的Ty3-gypsy类逆转座子.[结论] 获得甘蔗Ty3-gypsy类逆转座子RT基因序列及其具有转录活性序列,为下一步分离Ty3-gypsy类逆转座子全长序列及研究Ty3-gypsy类逆转座子转录转座活性和功能提供序列基础,也为开发甘蔗LTR逆转座子的分子标记奠定基础.

摘要： 教学中发现,一些教师对胰岛素受体的分布、病毒的组成、HIV病毒的宿主细胞、逆转录酶和葡萄糖感受器等知识点存在认识上的偏颇,从而影响课堂教学和试题命制的科学性,笔者认为有必要对以上问题进行探讨和辨析。1疑问1:肝细胞膜上有没有胰岛素受体?

摘要： 目的：建立简单快捷的逆转录酶活性检测方法。方法：在传统逆转录酶活性检测方法的基础上减少试验步骤、优化试验条件、降低反应体系PH值及增加琼脂糖凝胶浓度。结果：通过减少和优化试验方法减少了操作步骤，使检测灵敏度增加的同时也使得实验过程中外来污染降低，另外，通过降低反应体系PH值及增加琼脂糖凝胶浓度成功地区分了试验用试剂及动物源细胞内的非传染性病毒样颗粒造成试验结果的假阳性。结论：10倍提高了检测的灵敏度，降低了假阳性结果。

摘要： 目的：在我们传统PERT方法的基础上建立荧光实时定量逆转录PCR（Real-time Quantitive Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）检测方法，使得检测灵敏度进一步增强。方法：以噬菌体MS2 RNA为模板，应用标准AMV逆转录酶催化体外逆转录反应合成相应cDNA.实时荧光定量PCR法检测底物cDNA模板量,进而得出逆转录酶的相对活性。结果：将AMV逆转录酶标准10倍倍比连续稀释后催化逆转录反应,实时荧光定量PCR分析所得的逆转录产物cDNA, 得到标准荧光值曲线，从而间接推测样品中有无逆转录病毒污染。结论：成功建立了基于实时荧光定量PCR检测逆转录酶活性的新型方法,为生物制品外来污染尤其是逆转录病毒的污染的检测提供了参考指标。

摘要： 本文是以果梅甲州小梅(Prunus mume‘Jiazhou Xiaomei’)的春梢叶片为试材，以Tyl-copia类逆转座子逆转录酶保守片段对应的兼并引物进行PCR扩增、克隆。研究了果梅中Tyl-copia类逆转座子逆转录酶序列的特点。研究发现，由于存在着缺失和终止密码子突变，果梅基因组内Tyl-copia类逆转座子存在着很大异质性，例如：PM19在3′端发生了明显的缺失，并有11条序列发生了1-4个终止密码子：并且由于物种间的差异，果梅基因组中的逆转座子与其他物种问存在着较大的差异。在对克隆到的果梅逆转录酶序列，进行了聚类分析，可以将着37条序列分成3个家族；其中第一个家族包含了16条序列，并与芥菜(Brassicajuncea)有着很高的相似性；第二家族和第三家族分别包含8条和13条序列。将克隆到的37条序列(DQ494215-DQ494251)与已在Genbank上登陆的不同物种的同类型逆转座子的逆转录酶进行了聚类分析，发现果梅中Tyl-copia类逆转座子与芥菜、苹果、缘毛杨、挪威云杉、玉米和水稻中同种类型的逆转座子可能有相同的起源。这对进一步研究果梅基因组内逆转座子的特性有重要的意义。

摘要： 本文对恶性行为在端粒酶阴性的致瘤性肾上腺皮质细胞中的渐进性消失及其通过人端粒酶逆转录酶的恢复进行了研究。复制衰老/危机被认为是一种肿瘤抑制机制。尽管最近的研究表明，没有端粒酶，人的正常细胞是无法转变为肿瘤细胞的，但衰老最初作为肿瘤抑制机制的概念却是因为复制衰老/危机可以限制端粒酶阴性肿瘤细胞的生长。研究显示，当表达原癌基因的人和牛的肾上腺皮质细胞通过组织重建技术被引入免疫缺陷小鼠体内后，这一概念在此依然正确。编码Ha-RasG12V和SV40大T抗原的逆转录病毒转染人和牛的原代肾上腺皮质细胞后，通过组织重建技术种植于免疫缺陷小鼠体内。在这个模型中，转染细胞完全表现为恶性倾向，即具有侵袭性和转移性。在种植前及在肿瘤形成后，这些细胞的端粒酶活性均可忽略不计。当系列移植时，肿瘤表现出渐进性生长速度减慢、侵袭性和转移性降低、端粒缩短及危机的形态学特征。

摘要： 本文通过对药学研究和药理毒理的研究，F18是天然产物的抗艾滋病药物，结构上完全不同于其他的HIV-1逆转录酶抑制剂药物，并分析了药物市场及其环境。

摘要： 目的:通过大样本临床研究结合表型分析,阐明我国慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者HBV逆转录酶(RT)区rtA181S变异的临床发生特点、病毒学特点及临床意义.rn 方法:研究样本来自2007.07-2013.03在解放军第302医院救治的18419例慢性HBV感染患者,用巢式PCR法扩增HBV全长RT基因,直接测序法检测病毒耐药变异和基因型,克隆测序法进行证实并分析各种变异株在准种中的比例,重点对HBV rtA181S变异进行分析.从典型病例样本中克隆各种含有rtA181S变异的病毒基因,构建具有复制能力的变异型和野生型重组质粒转染HepG2细胞,在含或不含梯度稀释核苷(酸)类似物的培养液中培养.定量细胞内HBV复制中间体,并计算50％有效药物浓度(EC50),检测病毒复制力和耐药性.rn 结果:共98例患者检测到含rtA181S变异的12种变异模式.rtA181S变异阳性患者中,C基因型和B基因型HBV感染者分别占91.8％和8.2％;相比之下,rtA181S未变异患者C基因型和B基因型HBV分别为84.6％和15.4％(P＜0.01).rtA181S变异的患者均曾接受核苷(酸)类似物治疗,且多伴随病毒学突破.表型分析显示临床分离株rtA181S、rtA181S +N236T、rtN236T和rtA181V的复制力是野生株复制力的68.5％、49.9％、71.4％和66.2％,其对阿德福韦酯的EC50值分别上升了3.7、 9.8、7.9和5.4倍.rtA181S变异株仍对拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦敏感,定点消除该突变后的相应野生株对阿德福韦酯的敏感性得到恢复.临床实践中,单用或联用恩替卡韦对rtA181S变异引起的阿德福韦酯失败患者实施挽救治疗的疗效显著,患者HBV DNA均达到检测不到水平(＜100 IU/ml).rn 结论:rtA181S变异对阿德福韦酯中度耐药,该变异可由拉米夫定或阿德福韦酯诱发,能引起阿德福韦酯治疗失败,临床用核苷类药物恩替卡韦挽救治疗有显著疗效.研究有助于加深临床对HBV耐药及耐药管理的新认识.

摘要： 目的：利用单基因组扩增法(SGA)检测病毒准种的优势，分析一例长期接受逆转录酶抑制剂治疗、换用含蛋白酶抑制剂(IDV)治疗方案的患者体内IDV耐药的分子进化特点。rn 方法：对病例在换药前后进行6次随访，对采集的血浆样本用SGA方法扩增pol区基因并测序，对准种中每一条序列均提交斯坦福大学的耐药数据库，进行基因型耐药分析，共得到蛋白酶(protease，PRO)全长序列149条，逆转录酶(RT)全长序列171条。rn 结论：从耐药病毒准种的角度揭示了IDV耐药的发生发展规律、确定了一种新型耐药突变型、微量耐药突变毒株可逐渐进化为优势耐药种群。

摘要： 近年来艾滋病迅速在全球范围内蔓延，艾滋病毒不断地对已经研发出的抗HIV药物产生了耐药性，而且目前大部分药物都具有较大的副作用，因此急需寻找新的抗HIV药物。中草药由于成本低廉，资源丰富，含有大量的药用成分，是一个庞大的天然产物库，从中草药中筛选具有抗阳HIV活性的高效低毒药物已成为开发新药的一种重要途径。槲皮素类化合物是研究较多并且具有较强抗HIV活性的黄酮中的一类化合物，它主要作用于HIV复制所需的三个关键酶——蛋白酶、逆转录酶、整合酶，从而抑制HIV在体内的复制。

摘要： 转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

摘要： 背景：1981年美国疾控中心首次报道了艾滋病,二十多年来其在全球迅速蔓延,对人类造成了极大的危害.当前,艾滋病的治疗以高效抗逆转录病毒疗法(HAART)为主,但其价格昂贵,毒副作用强,病毒耐药性不断发生,停药后易反跳,且不能彻底清除病毒,在相当程度上限制了其的应用.天然产物由于其其结构的多样性、较低的毒副作用以及广泛的来源等特点,越来越为国内外许多研究者所重视.目的对具有抗HIV-1活性的天然产物及其成分进行总结,并对有效成分的作用靶点进行综述,希望为今后的研究工作和临床应用提供参考.方法:通过PubMed,medline,google及其它网络电子资源查询相关文件,并对具体章节进行综述总结. 结果：目前发现具有抗HIV作用的天然产物中,抗HIV-1逆转录酶的活性成分居多,有效成分包含生物碱、黄酮类、香豆素、萜类、糖类、鞣质及酚酸类、蛋白质、和木质素类等.而作用于整合酶和蛋白酶的有效成分相对较少,整合酶抑制剂的有效成分以肽类、黄酮类、生物碱类及鞣质酚酸类为主,蛋白酶抑制剂的有效成分以萜类、木质素类、酚酸及醌类等为主. 结论：天然产物中含有多种抗HIV的活性成分,可作用于HIV复制的各个环节,本文仅对抑制病毒复制三个关键酶(RT、IN、PR)的部分天然产物及其有效成分进行了综述,希望从中找出作用于HIV复制周期相关靶点的药物,从而为治疗艾滋病做出更大贡献.

摘要： 式I化合物，其中nuc为通过它的一个羟基在环或无环糖基团上连接的核苷类残基；R

摘要： 本发明涉及5′-L-缬氨酰-2′，3′-双脱氧-3′-氟鸟苷所指的化合物及其在制备用于治疗或者预防HBV或者逆转录酶病毒感染的药物中的用途。

摘要： 本发明涉及从螺旋藻中提取的新的硫脂、获得所述硫脂的方法、含有所述硫脂的组合物及其作为HIV-1和HIV-2的抑制物的用途。本发明还涉及富含具有抑制HIV-1和HIV-2逆转录酶活性的硫脂的螺旋藻生物体，以及所述硫脂或富含所述硫脂的螺旋藻生物体在制备预防或治疗AIDS的药物中的用途。

摘要： 本申请涉及用于增强逆转录酶(RT)活性和/或减少RT被抑制剂(例如福尔马林、单宁酸和/或肝素)抑制的组合物和方法。在一些实施方式中，通过向包含聚合酶的反应混合物中添加谷氨酸钾、组氨酸盐酸盐一水化物、泊洛沙姆188或其任意组合，以减少RT抑制。在其他实施方式中，通过向反应混合物中添加聚乙烯磺酸钠盐(PVSA)来增强RT。本申请还提供了用于目标序列的逆转录及其增强的寡核苷酸引物。这些引物具有高GC含量或低GC含量。还提供了在具有RNA模板和RT的组合物中使用RT抑制减少剂或RT增强剂改进RT产量、RT敏感性或RT对各种化学品的耐受性的方法。

摘要： 本发明提供了泊洛沙姆在提高逆转录酶效率或提高逆转录酶抑制剂耐受性中的应用，以及以泊洛沙姆为核心成分配制的用于逆转录过程中的添加剂混合物。这种添加剂混合物不仅能够提高正常高纯度RNA样本的逆转录产物（约8倍），对复杂来源RNA样本如FFPE RNA或含甲醛、乙醇、盐酸胍、异硫氰酸胍、肝素、鞣酸、甲酰胺和苯酚等逆转录抑制剂的RNA具有更强的耐受和更高的cDNA产量。这种逆转录酶添加物组合可以在RT‑qPCR检测和RNA NGS建库上显著提高复杂来源病理学样本检测的灵敏度和准确性，非常适用于疾病快速诊断领域。

摘要： 本发明提供了一种逆转录酶及逆转录检测试剂，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过大量筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的逆转录酶突变体，进而提供了包含本发明的逆转录酶突变体的逆转录检测试剂。

摘要： 本发明提供了逆转录酶突变体及逆转录方法，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体，进而提供了使用该逆转录酶突变体的高效逆转录方法。

摘要： 本发明提供了具有高逆转录效率的耐高温逆转录酶突变体及其应用，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_38)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_38的逆转录效率提高了22.47倍。

摘要： 本发明提供了高逆转录效率的逆转录酶突变体，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_26)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_26的逆转录效率提高了442.64倍。

摘要： 本发明提供了一种具有高逆转录效率的耐高温逆转录酶突变体及其应用，具体地，本发明构建了逆转录酶(M‑MLV)突变库，通过逐步筛选，最终筛选出了热稳定性提高且扩增效率较高的突变体(逆转录酶突变体Mu_40)。在高温条件下(58°C)，与野生型相比，本发明的逆转录酶突变体Mu_40的逆转录效率提高了46.52倍。