人牙髓细胞

摘要： 目的 通过氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)体外模拟细胞缺血缺氧,观察人牙髓细胞(hu-man dental pulp cells,hDPCs)内质网应激变化,为缺血缺氧条件调控hDPCs的机制研究提供依据.方法 应用无糖DMEM培养液联合低氧培养(体积分数2％O2)构建hDPCs OGD模型,体外模拟hDPCs缺血缺氧,设置对照组和实验组.对照组:常规培养;实验组:OGD处理0、2、4、8 h.MTT检测hDPCs OGD处理0、2、4、8 h后细胞存活率;qRT-PCR检测hDPCs内质网应激关键分子:剪切X盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein 1,sXBP1)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,chop)mRNA水平,Western blot检测内质网应激关键蛋白:磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated RNA-activated protein kinase-like ER-resident kinase,p-perk)、磷酸化真核起始因子-2α(phosphorylated eukaryotic initia-tion factor-2α,p-eIF2α)表达水平.结果 相较于OGD处理0 h,OGD培养hDPCs 2、4、8 h后,死亡细胞增多,细胞存活率显著下降(P<0.05).与对照组相比,OGD处理4 h后,hDPCs内质网应激关键信号分子sXBP1、ATF4、CHOP mRNA表达水平升高;内质网应激关键蛋白p-perk、p-eIF2α表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 hDPCs OGD培养条件下内质网应激水平明显升高.

摘要： 背景:聚己内酯具有良好的热稳定性、生物相容性、降解速率可调等优点,有作为组织工程支架应用于牙髓组织工程的潜能,但其亲水性和生物活性较差.目的:制备聚多巴胺及纳米羟基磷灰石改性的多孔聚己内酯(polycaprolactone-polydopamine-nano-hydroxyapatite,PCL-PDA-nHA)微球,探索其物理性能及对牙髓细胞增殖和矿化的影响.方法:采用双乳化法制备多孔聚己内酯微球,通过聚多巴胺进行表面改性,得到PCL-PDA微球,提高其亲水性和结晶能力;通过模拟体液在PCL-PDA微球表面原位形成纳米羟基磷灰石涂层(分反应7 d组与反应14 d组),得到PCL-PDA-nHA微球.通过扫描电镜、X射线光电子能谱技术和蛋白吸附实验检测各组微球的理化性质,通过溶血实验、凝血因子激活实验和血小板凝集实验检验各组微球的血液相容性.将4组微球分别与人牙髓细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶、茜素红与天狼星红染色分析微球的矿化诱导能力.结果 与结论:①扫描电镜显示,4组微球为均匀疏松的多孔结构,微球直径无明显差异,微球孔隙率为87.4％,孔隙直径在20-50μm之间;X射线光电子能谱显示,聚多巴胺和纳米羟基磷灰石有效修饰到聚己内酯表面;蛋白吸附实验显示,改性后的材料可增强血清白蛋白的吸附能力;②溶血实验显示,4组微球的溶血率在1％以下,不会造成明显的溶血;凝血因子激活实验显示,各组改性聚己内酯微球对凝血影响较小;扫描电镜显示,各组微球表面无明显的血小板聚集;③CCK-8检测显示,各组改性微球表面的细胞增殖均快于聚己内酯微球;④碱性磷酸酶、茜素红与天狼星红染色显示,各组改性微球的矿化诱导能力均强于聚己内酯微球,其中PCL-PDA-nHA-14 d微球与PCL-PDA-nHA-7 d微球的矿化诱导能力强于PCL-PDA微球;⑤结果表明,PCL-PDA-nHA纳米微球的血液相容性良好,可促进人牙髓细胞的增殖和矿化.

摘要： 背景:聚己内酯具有良好的热稳定性、生物相容性、降解速率可调等优点,有作为组织工程支架应用于牙髓组织工程的潜能,但其亲水性和生物活性较差。目的:制备聚多巴胺及纳米羟基磷灰石改性的多孔聚己内酯(polycaprolactone-polydopamine-nano-hydroxyapatite,PCL-PDA-nHA)微球,探索其物理性能及对牙髓细胞增殖和矿化的影响。方法:采用双乳化法制备多孔聚己内酯微球,通过聚多巴胺进行表面改性,得到PCL-PDA微球,提高其亲水性和结晶能力;通过模拟体液在PCL-PDA微球表面原位形成纳米羟基磷灰石涂层(分反应7 d组与反应14 d组),得到PCL-PDA-nHA微球。通过扫描电镜、X射线光电子能谱技术和蛋白吸附实验检测各组微球的理化性质,通过溶血实验、凝血因子激活实验和血小板凝集实验检验各组微球的血液相容性。将4组微球分别与人牙髓细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶、茜素红与天狼星红染色分析微球的矿化诱导能力。结果与结论:(1)扫描电镜显示,4组微球为均匀疏松的多孔结构,微球直径无明显差异,微球孔隙率为87.4%,孔隙直径在20-50μm之间;X射线光电子能谱显示,聚多巴胺和纳米羟基磷灰石有效修饰到聚己内酯表面;蛋白吸附实验显示,改性后的材料可增强血清白蛋白的吸附能力;(2)溶血实验显示,4组微球的溶血率在1%以下,不会造成明显的溶血;凝血因子激活实验显示,各组改性聚己内酯微球对凝血影响较小;扫描电镜显示,各组微球表面无明显的血小板聚集;(3)CCK-8检测显示,各组改性微球表面的细胞增殖均快于聚己内酯微球;(4)碱性磷酸酶、茜素红与天狼星红染色显示,各组改性微球的矿化诱导能力均强于聚己内酯微球,其中PCL-PDA-nHA-14 d微球与PCL-PDA-nHA-7 d微球的矿化诱导能力强于PCL-PDA微球;(5)结果表明,PCL-PDA-nHA纳米微球的血液相容性良好,可促进人牙髓细胞的增殖和矿化。

摘要： 目的探讨不同质量浓度的三氧化矿物凝聚体(MTA)对脂多糖(LPS)诱导人牙髓细胞(HDPC)分泌白细胞介素-6(IL-6)的影响,为MTA应用于牙髓细胞炎性损伤后再修复提供实验依据。方法采用改良组织块酶消化法原代培养HDPC,取第4代HDPC,经质量浓度为1μg/mL的LPS致炎24 h,分别与不同质量浓度的MTA浸提液(0.002、0.02、0.2、2、20 mg/mL)共同培养,ELISA法检测IL-6含量,并进行统计学分析。苏木精—伊红染色,电镜下观察细胞形态变化。结果5种质量浓度的MTA浸提液对LPS诱导HDPC分泌IL-6的水平均低于实验对照组(P<0.05)。MTA作用后,受损的HDPC细胞外形有恢复。结论MTA对LPS诱导HDPC分泌IL-6有抑制作用,在一定范围内随着MTA质量浓度的增加和作用时间的延长,抑制效果更好。

摘要： 目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2和连接蛋白(Cx) 43在促进人牙髓细胞(hDPCs)成牙本质分化过程中的联系。方法:在hDPCs中过表达Cx43并施以300 ng/m L BMP-2刺激1 h,qRT-PCR、Western blot和免疫荧光(IF)检测成牙本质分化标记物的表达变化;检测BMP-2介导的Smad1/5/9和Erk1/2通路活性,并施加PD98059(Erk1/2抑制剂)刺激1 h,检测抑制Erk1/2后过表达Cx43对BMP-2诱导的DSPP等的表达变化影响。结果:BMP-2上调hDPCs内osterix、DSPP、DMP-1、ALP和OCN RNA水平以及osterix蛋白表达,增强hDPCs中DSPP的荧光强度。过表达Cx43明显促进BMP-2诱导的hDPCs成牙本质分化。BMP-2激活hDPCs中的Smad1/5/9通路,过表达Cx43上调hDPCs中Erk1/2磷酸化水平。抑制Erk1/2明显减弱过表达Cx43对BMP-2诱导的osterix、DSPP、DMP-1、ALP、OCN mRNA表达以及osterix蛋白水平和DSPP染色强度的增强作用。结论:Cx43通过Erk1/2促进BMP-2诱导的osterix和DSPP等表达以及hDPCs成牙本质分化。

摘要： 目的 探讨高糖对人牙髓细胞(HDPCs)增殖和氧化应激的影响,以探索高糖环境对牙髓的影响机制.方法 分离培养牙髓细胞,鉴定组织来源,实验分为4组:低糖组(葡萄糖5.5 mmol/L)、正常组(葡萄糖25 mmol/L)、高糖组(葡萄糖50mmol/L)、高渗组(与50 mmol/L组渗透压相等,并与5.5 mmol/L组葡萄糖浓度相等),CCK-8法检测HDPCs 1、3、5d后的增殖水平.DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶标法检测丙二醛(MDA)含量,四唑盐法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力.流式细胞术分析各组细胞线粒体膜电位.结果 ①高糖组与正常组相比较,可知高浓度葡萄糖对HDPCs的增殖有明显的抑制作用,有统计学意义(P＜0.05).②ROS、MDA水平在50 mmol/L葡萄糖浓度下暴露72 h后显著升高,SOD活力降低,相比正常组具有统计学差异(P＜0.05).③流式细胞术检测线粒体膜电位显示高糖组荧光值高于正常组,具有统计学差异(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖抑制牙髓细胞增殖,导致HDPCs线粒体膜电位下降,诱导氧化应激产生,说明高血糖环境降低了牙髓细胞的活力,也可能是糖尿病患者牙髓组织发生改变的一个潜在因素.

摘要： 目的:检测人牙髓细胞成牙本质细胞方向分化中INI1的表达规律,分析INI1对人牙髓细胞成牙本质细胞方向分化的调控作用.方法:利用分化诱导培养基诱导人牙髓细胞,构建牙髓细胞成牙本质细胞方向分化模型.通过Real-time PCR及Western Blot检测该模型中INI1的表达规律.慢病毒介导的INI1-ShRNA载体感染人牙髓细胞敲减INI1表达后,通过茜素红染色,碱性磷酸酶活性染色,Real-time PCR检测分析敲减INI1对牙髓细胞成牙本质细胞方向分化的影响.结果:人牙髓细胞成牙本质细胞方向分化过程中,INI1升高表达;敲减INI1造成人牙髓细胞成牙本质细胞方向分化受到抑制.结论:INI1对人牙髓细胞成牙本质细胞方向分化有重要作用.

摘要： 目的:观察低浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)在细胞中的转位及其hDPCs细胞活性的影响.方法:采用原代组织块培养法,培养人牙髓细胞,取第3～6代细胞用于实验.分别用含不同质量浓度(0、10、50、100、500、1000 ng/mL)LPS的培养液培养hDPCs 3 d,采用CCK-8法检测细胞活性;100 ng/mL LPS刺激hDPCs后,免疫荧光检测0 h、6 h、12 h及24 h HMGB1在hDPCs中的表达定位,RT-PCR检测各时间点hDPCs细胞TNF-α,IL-1及HMGB1的mRNA表达,ELISA试剂盒分析细胞上清中HMGB1的含量.结果:低浓度LPS刺激hDPCs后,细胞活性并无明显改变,提示hDPCs具有抵抗低浓度LPS的能力.RT-PCR结果示LPS浓度在10 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL时,IL-1和HMGB1的mRNA水平无显著变化;500 ng/mL和1000 ng/mL时,TNF-α、IL-1和HMGB1的mRNA水平显著上调.免疫荧光示LPS诱导后,在6 h、12 h及24 h均可见hDPCs细胞浆中HMGB1的表达,ELISA结果示HMGB1能分泌到细胞上清中.结论:低浓度LPS可对hDPCs活性基本无影响,且可诱导HMGB1在hDPCs中从细胞核转位到细胞浆,并释放到细胞外.

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了OPTN基因在鉴定牙髓干细胞中的应用和鉴定牙髓干细胞的方法与产品。发明人通过试验首次发现可以用于鉴定牙髓干细胞的生物标志物OPTN基因，通过该基因的差异表达，能够鉴定分离出高纯度的牙髓干细胞。

摘要： 一种牙髓干细胞复苏液及牙髓干细胞的复苏方法，通过在常规干细胞培养基中添加添加一定量的碱性成纤维细胞生长因子构建新的干细胞复苏液，并用这种复苏液应用于DPSCs的复苏过程，可以使DPSCs活力在短时间内快速恢复，并保持原有干细胞的干性和多向分化潜能，能够缩短干细胞复苏时间以及提高干细胞临床使用存活率，增殖速度超过常规培养基组，同时维持细胞干性和多向分化潜能，能够有效为临床干细胞治疗提供性能和状态较好的种子细胞，节省了大量的时间、人力以及物力成本。

摘要： 本发明的目的在于提供一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法，属于干细胞冻存技术领域。本发明所提供的保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，2.5mg/ml‑10mg/ml海雹菜多糖。本发明的有益效果在于，使用本发明冻存保护液进行牙髓干细胞冻存时，不仅可以有效的维持牙髓干细胞的活性，而且可以使牙髓干细胞具有更好的干性和成骨能力。

摘要： 本发明涉及一种人牙髓干细胞培养基及人牙髓干细胞的制备方法，属于干细胞制备技术领域。本发明提供的人牙髓干细胞培养基，以α‑MEM培养基为基础，包含体积百分含量为5％～10％的人AB血清、100μM抗坏血酸、2mM L‑谷氨酰胺、100U/ml青霉素钠和100mg/ml链霉素。本发明提供的培养基制备得到的牙髓干细胞产量高、无人体免疫排斥反应，为临床牙的修复与再生提供可靠的种子细胞。

摘要： 本发明属于细胞培养方法技术领域，设计一种用于保持人牙髓干细胞干性的细胞微图案方法。其包括两种细胞微图案的排列模式：长45微米，宽22.5微米，5000个矩形以上的微图案形成行间距90微米，列间距45微米的矩形微图案阵列和长64微米，宽14微米，5000个以上的矩形微图案形成行间距128微米，列间距28微米的微图案阵列。本发明用于人牙髓干细胞的细胞培养接种，简单易操作，经过免疫荧光染色细胞干性标记物SOX2和Nanog，从这两个标记物的表达可以证明本发明可以实现人牙髓干细胞的干性和分化潜能维持，是一种廉价高效的细胞培养方法，有助于临床上组织工程技术的应用。

摘要： 本发明涉及生物干细胞领域，主要涉及一种细胞表面标记特异性富集的人牙髓干细胞微胶囊及其制备方法，所述微胶囊包括微球内核及外壳。发明还涉及其制备方法、生物学效力检测方法。本发明也涉及将通过本发明制备的细胞微胶囊用于再生医学的用途。

摘要： 本发明主要涉及一种细胞表面标记特异性富集的人牙髓干细胞微胶囊及其制备方法，所述微胶囊包括微球内核及外壳。发明还涉及其制备方法、生物学效力检测方法。本发明也涉及将通过本发明制备的细胞微胶囊用于再生医学的用途。

摘要： 本发明提供了一种特异的人牙髓干细胞亚群及其富集方法。本方法包含牙组织样品的采集运输，牙髓干细胞的分离，及表达CD18干细胞的富集。本发明还提供了一种富集的牙髓干细胞亚群生物学特性的检测方法。包括与干性相关的集落形成能力检测，增殖能力检测，体外成骨分化能力检测，体内成骨分化能力检测。

摘要： 一种制备牙髓间充质干细胞及建立牙髓间充质干细胞库的方法及细胞复苏方法，它涉及一种制备干细胞库的方法及细胞复苏方法。本发明步骤如下：将牙齿的髓腔打开，经胰酶替代物半消化法对牙髓组织进行原代培养，经过传代培养即获得牙髓间充质干细胞，将制备的牙髓间充质干细胞进行生物特性检测，扩大培养，冻存，建立牙髓干细胞库。本发明采用了胰酶替代物半消化法对牙髓组织进行消化，这与传统的消化法不同，胰酶替代物价格便宜容易购买，半消化法有效防止了细胞的丢失，提高了细胞的冻存数量。本发明采用了牙齿作为制备间充质干细胞的组织材料来源，为储存牙间充质干细胞提供了机会。

摘要： 一种牙髓干细胞原代培养促贴壁基质及原代牙髓干细胞的培养方法，本发明提供了一种可促进细胞贴壁生长的材料，用其包被培养皿的培养方式，为牙髓干细胞原代制备建立成熟的体外培养体系并且为后续实验研究提供优质及丰富的细胞来源，本发明在牙髓干细胞原代培养时，使用多酚蛋白作为促贴壁试剂预包被培养皿，增加了组织块细胞爬出率及原代细胞的数量，缩短了原代制备时间，提升了原代培养的成功率。