原代细胞培养

摘要： 目的采用木瓜蛋白酶联合DNA酶法提取24 h内新生SD大鼠皮层神经元,改进体外原代培养方法。方法取24 h内新生SD大鼠,剥离脑血管膜分离出大脑皮层,采用木瓜蛋白酶和DNA酶顺序消化、纯化后,以含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为神经元接种液,4 h后更换为预热的含有B27的Neurobasal-A神经元培养液,连续培养7 d。分别以1×10^(5)、5×10^(5)、1×10^(6)细胞/mL接种于L-多聚赖氨酸浸泡后的6孔板内,并在显微镜下观察细胞的生长状态。取培养7 d后的神经元,采用β-Tubulin免疫荧光法和神经元特异性核蛋白(Neun)抗体免疫组化法鉴定神经元,神经元微管相关蛋白2抗体(MAP2)免疫荧光法鉴定神经元纯度。结果神经元以密度为5×10^(5)细胞/mL接种最为合适,接种24 h后,皮层神经元部分贴壁;接种3 d后,贴壁细胞逐渐增多,神经元突触进一步生长并延长,交联成稀疏网络;接种7 d后,神经元仍大量生长,胞体丰满,并形成更为紧密的神经元网络系统。经β-Tubulin免疫荧光法和Neun抗体免疫组化法鉴定,提取培养细胞为神经元,并经神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定神经元纯度为(91.06±1.51)%。结论采用24 h内新生SD大鼠分离大脑皮层,经木瓜酶与DNA酶顺序消化,可提取到优质皮层神经元。

摘要： 目的分离、培养及鉴定继发性甲状旁腺功能亢进症患者来源甲状旁腺。方法采用胶原酶消化法提取10例继发性甲状旁腺功能亢进症的甲状旁腺原代细胞进行体外培养,通过显微摄像、细胞计数研究其形态学变化及生长特性,用细胞免疫荧光、qRT-PCR及Westernblot检测原代及传代甲状旁腺细胞甲状旁腺素(PTH)、钙敏感受体(CaSR)和神经胶质细胞缺失因子2(GCM2)mRNA及蛋白的表达情况,对所得细胞进行分析鉴定。结果本研究成功提取甲状旁腺原代细胞,其细胞PTH免疫荧光结果为阳性,细胞增长曲线显示甲状旁腺细胞体外分散培养的群体倍增时间约为71.61 h。P2代细胞分泌PTH较P0、P1代细胞减少(P<0.001)。P1代细胞和P0代细胞间PTH(P=0.572)和GCM2(P=0.892)的mRNA表达差异无统计学意义,PTH(P=0.572)和GCM2(P=0.892)的蛋白表达差异也无统计学意义。但P1代细胞的CaSR mRNA(P=0.017)和蛋白表达(P=0.006)均较P0代甲状旁腺细胞减少。结论采用胶原酶消化法培养的甲状旁腺细胞一定程度上具有与在体细胞相似的细胞生物学特性。

摘要： 目的探讨丙戊酸钠(VPA)对癫痫样放电海马神经元铁死亡的抑制作用及其机制。方法原代培养孕期为19~20 d的SD大鼠胎鼠的海马神经元,建立无镁诱导的癫痫细胞模型,随机以不同的培养液进行培养,正常培养液(A组)、无镁细胞外液+0.5 mmol/L VPA(B组)和无镁细胞外液(C组),采用CCK-8实验检测各组细胞的细胞活性,采用比色法检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)、铁离子和丙二醛(MDA)含量,采用Western blot法检测各组细胞中酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7a11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)蛋白的表达情况。结果A~C组原代海马神经元的细胞活性、GSH含量以及SLC7a11、Gpx4蛋白相对表达水平比较差异均有显著性(F=9.844~262.900,P<0.05),其中C组较A组显著降低(q=5.992~19.480,P<0.05),B组较C组显著升高(q=4.610~32.190,P<0.05)。A~C组原代海马神经元的ACSL4蛋白表达及MDA、铁离子含量比较差异均有显著性(F=16.050~81.770,P<0.05);其中C组较A组显著升高(q=7.150~14.540,P<0.05),B组较C组显著降低(q=4.991~16.580,P<0.05)。结论铁死亡可能参与癫痫的病理生理过程,VPA可通过抑制铁死亡和提高细胞活性对癫痫细胞模型起神经保护作用。

摘要： 目的探索一种简单方便、重复性好的非人灵长类动物原代肾小球系膜细胞(GMCs)体外提取、培养及鉴定的方法。方法在无菌条件下取出猕猴肾脏,利用两种不同孔径的纱网(介于100目到200目之间)分离出肾小球,设置不同浓度(0.1、0.2 mg/ml)Ⅵ型胶原酶消化肾小球,同时在这两个浓度基础上设置不同消化时间(10、15 min),将消化后的肾小球接种到细胞瓶中,观察不同消化条件下GMCs的生长状况。显微镜下观察GMCs的结构,免疫荧光和Western blot法检测GMCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nephrin蛋白的表达。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后观察GMCs生物学特性,CCK-8法和高内涵细胞成像系统法分别检测GMCs活力和增殖情况;Transwell法和细胞划痕实验检测GMCs迁移能力。结果利用0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min搜集到的肾小球贴壁较多,肾小球细胞生长状态较好。原代培养的肾小球3 d贴壁,7 d开始移出不规则形状或星状的细胞,经21~35 d GMCs逐渐铺满瓶底。GMCs中α-SMA蛋白阳性,Nephrin蛋白阴性。10 ng/ml TNF-α体外刺激能显著增强GMCs的增殖与迁移能力。结论利用胶原酶消化法(0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min)成功建立了GMCs的分离及培养的方法体系,为之后更好模拟人类肾脏疾病提供合适的细胞模型。

摘要： 目的:构建原代小鼠心脏成纤维细胞的衰老模型。方法:取24h内出生的乳小鼠心脏组织,使用酶消化法分离获得心脏成纤维细胞,通过形态学和Vimentin免疫荧光染色法鉴定心脏成纤维细胞。分别使用阿霉素(DOX)(10 nmol/L)和重组转化生长因子-β1(TGF-β1)(5ng/mL)刺激心脏成纤维细胞48h后换正常培养基72h,采用EdU染色法检测细胞增殖情况,使用β-半乳糖苷酶衰老染色评估衰老细胞比例,使用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测细胞中衰老标志分子P16和P21以及衰老分泌表型相关基因(Il1b,Il6,Ccl2)的mRNA表达变化。结果:分离提取的心脏成纤维细胞呈梭状或星形的扁平细胞,Vimentin蛋白免疫荧光染色呈阳性。与对照细胞相比,使用DOX和TGF-β1刺激后,成纤维细胞中EdU阳性细胞比例均显著减少,β-半乳糖苷酶阳性的衰老细胞比例均显著增加。qRT-PCR的结果显示诱导衰老的心脏成纤维细胞中衰老标志分子P16和P21的表达显著上调,同时衰老分泌表型相关基因Il1b,Il6,Ccl2的表达水平也显著增加。结论:使用具有心脏毒性的化疗药物DOX以及促纤维化性细胞因子TGF-β1均可成功建立心脏成纤维细胞的细胞衰老模型。

摘要： 目的探讨一种高效、可重复的宫颈上皮细胞原代培养方法。方法本研究选取4例正常宫颈组织和4例宫颈鳞状细胞癌组织,并分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶联合法)及Ⅰ型胶原酶消化法分离后进行原代培养。通过CD326、P40以及Ki-67+P16双染进行免疫荧光染色鉴定细胞来源。结果正常宫颈上皮细胞原代培养14 d,汇合度可达70%~80%,传代可至4~5代,且荧光染色CD326、P40均表达强阳性,P16表达弱阳性,Ki-67仅在个别细胞核中表达;宫颈鳞状细胞癌细胞原代培养14 d,汇合度可达70%~80%,传代可至5~6代,荧光染色CD326和P40均表达强阳性,P16表达阳性,Ki-67广泛表达于细胞核。结论Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA分离法及5%FBS的KFSM培养基可高效、多次重复原代培养正常宫颈上皮细胞;Ⅰ型胶原酶消化分离法及5%FBS的KFSM培养基培养可高效、多次重复原代培养宫颈鳞状细胞癌细胞。

摘要： 目的:建立人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,为浆液性卵巢癌患者的临床用药提供实验模型和理论依据.方法:采用Ⅱ型胶原酶消化和差速离心法分离培养人浆液性卵巢癌细胞,培养至第3代的浆液性卵巢癌细胞用于实验.倒置相差显微镜下观察卵巢癌细胞形态表现,绘制并分析细胞生长曲线.免疫荧光法检测细胞中人癌抗原125(CA125)、配对盒基因8(PAX8)和人附睾蛋白4(HE4)表达情况,对所培养原代细胞进行鉴定,同时检测胚胎干细胞同源转录因子Nanog和八聚体结合转录因子4(Oct-4)的表达情况.药物敏感性检测分为不同浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组、紫杉醇(PTX)(0、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000 mg·L-1)组、替莫唑胺(TMZ)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L-1)组、卡铂(CBP)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组、阿霉素(DOX)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L-1)组和褪黑素(MLT)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L-1)组,其中0 mg·L-1组为对照组,CCK-8法检测各组细胞存活率.结果:原代浆液性卵巢癌细胞接种4 h后开始贴壁,培养8～10 d生长融合成片;连续传代后细胞形态均一,生长迅速,细胞接种后2～7d为线性增长期.免疫荧光法检测细胞中CA125、PAX8、HE4、Nanog和Oct-4均呈高表达.药物敏感性检测,卵巢癌细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT均有较高的敏感性,与相对应对照组比较,不同浓度5-FU组、TMZ组、CBP组、MLT组及0.0625和0.1250 mg·L-1PTX组细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),且细胞存活率随药物浓度升高逐渐降低.结论:成功建立了人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,该细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT具有较高的敏感性,该结果对浆液性卵巢癌患者术后化疗药物的选择有指导意义.

摘要： 目的:体外分离新生SD大鼠视网膜神经节细胞(RGCs),建立新生SD大鼠RGCs体外原代培养方法及高糖模型.方法:取15～20只出生1～3d SD大鼠的视网膜组织,分离纯化RGCs进行原代培养.甲苯胺蓝法及免疫荧光细胞染色法进行鉴定.细胞连续培养48～72h后,随机分为6组并分别加入含不同葡萄糖浓度5.5、20、25、30、35、40mmol/L的培养基培养24、48、72h,采用CCK8法及TUNEL凋亡检测法分析各组细胞存活率及凋亡率.结果:离体纯化原代培养的RGCs具有典型的细胞形态且生长良好,细胞之间呈小片状融合聚集生长,轴突相互交错成网络状,胞体周围可见细胞光晕.甲苯胺蓝着染细胞胞质中可见结构清晰的尼式小体,神经元率达95％以上.RGCs特异性抗体Thy-1、Brn-3a定体外纯化培养细胞,阳性率达90％以上.CCK8检测发现随着时间及葡萄糖浓度的增加,各组细胞的存活率降低;在不同葡萄糖浓度干预细胞24h时,各分组之间OD值均小于正常对照组,但与正常对照组相比较OD值大小无差异(均P>0.05);随着时间延长,35、40mmol/L葡萄糖浓度干预RGCs 48h,30、35、40mmol/L干预RGCs 72h时的OD值较正常对照组OD值明显降低(均P<0.05).TUNEL检测发现随着葡萄糖浓度及时间的增加,RGCs凋亡率增加.其中葡萄糖浓度为30、35、40mmol/L培养RGCs 48、72h后RGCs细胞凋亡率与正常对照组相比较有差异(均P<0.05).结论:本研究建立的RGCs体外原代培养方法能获得典型且纯度较高的RGCs,随着葡萄糖浓度的增加,体外纯化培养的RGCs存活率降低,凋亡率增加.35mmol/L葡萄糖浓度干预RGCs 48h可为有效诱导RGCs建立高糖模型最佳干预浓度及时间.

摘要： 本研究旨在培养符合实验要求的牛胎盘滋养层细胞,并探究外源hTERT基因对细胞生长及功能特性的影响.利用联合组织块培养法、胰蛋白酶消化法获得原代牛胎盘滋养层细胞,利用脂质体转染pc1-neo-hTERT质粒,通过Western Blot检测细胞角蛋白7(Cytokeratin 7,CK7)和波形蛋白(Vimentin)的表达,又通过免疫组化检测胎盘催乳素(Placental Prolactin,PL)和绒毛膜促性腺激素(Chorionic Gonadotropin,CG)等的表达.结果表明:研究中培养获取的原代牛胎盘滋养层细胞90％以上可表达特异性角蛋白CK7,转染质粒后细胞可连续稳定传代15代以上,且CG和PL的分泌量与原代细胞相比无显著差异,证明转染质粒对细胞主要功能及生长特性没有明显影响,细胞可用于后续实验.

摘要： 目的 体外培养C57BL/6小鼠关节软骨细胞,建立符合骨关节炎实验需求的凋亡模型.方法 采用两步酶消化配合机械吹打法分离C57BL/6小鼠关节软骨细胞,倒置相差显微镜分别观察5代软骨细胞的形态及生长情况,甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,CCK-8法分别检测5代软骨细胞的活力情况,实时荧光定量(RT-PCR)法分别检测5代软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA的变化.在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20μmol/L)的星形孢菌素及200μmol/L H2 O2作用24 h,通过检测细胞凋亡率,选择合适的浓度,并利用AOEB法进一步验证10μmol/L星形孢菌素的促凋亡作用.结果 体外培养的C57BL/6小鼠关节软骨细胞,第1代类圆形,第2代三角形,第3代三角形及短梭形,3代后软骨细胞主要呈长梭形且形态不规则,胞核增大,胞质边缘模糊化.经甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色证实为软骨细胞.与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的细胞活力显著降低(均P<0.05).与第1代软骨细胞相比,第4代和第5代软骨细胞的Ⅱ型胶原mRNA相对表达量显著降低(均P<0.001).与H2O2阳性对照相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞24 h凋亡率为(63.97±1.67)％,差异无统计学意义.AOEB结果显示,与正常细胞相比,10μmol/L星形孢菌素作用软骨细胞后,凋亡早期细胞核质体呈绿色,细胞形状不规则;凋亡晚期细胞,核质体呈橙色,细胞核碎裂成点状,大小不一.结论 本研究成功培养了C57BL/6小鼠关节软骨细胞,10μmol/L星形孢菌素作用3代内软骨细胞24 h建立凋亡模型最适宜.

摘要： 鸠球虫病对养鸡业危害十分严重,随着抗球虫药物的使用甚至滥用,鸡球虫的抗药性日趋广泛而严重.为了研究鸡球虫入侵机制以及快速高通量筛选抗球虫药物的需要,鸡球虫的体外培养技术从20世纪70年代初至今已历经近50年,研究取得了一定的进展,逐步形成一整套比较完备的体外培养技术体系.本文主要就鸡球虫的原代细胞培养模型、传代细胞培养模型和鸡胚培养模型在建立和应用方面进行详细阐述,为研究鸡球虫的入侵机制和快速筛选抗球虫制剂等提供技术平台.

摘要： 当前细胞生物学在生命科学和医学领域的重要作用日益受到国内外学术界的高度重视,已成为具有领头效应、进展极为迅速的学科.二十一世纪生命科学领域后基因组时代的到来更预示着医学革命的新阶段,从过去对单个生物分子运动规律认识的逐个突破,到对以细胞为单位的生物分子整体运动规律认识的飞跃.因此,掌握医学细胞生物学知识将有助于培养学生把握医学发展方向,并为医学创新提供必要的学科结构平台. 近年来,我们在开设的细胞生物学实验中,认识到实验课的设置应与学科发展相适应,对实验课的设置的要求也越来越高.细胞培养是医学细胞生物学实验最要基本掌握的技术之一;通过细胞培养技术的训练,对于医学生来讲,不仅仅是来如何学好医学细胞生物学内容,更重要的是掌握这一基本技术,才能对今后在临床医学各领域的学习和科学研究打下良好的基础.本着这一原则,在细胞培养实验课的教学过程中,我们注重了教学内容要丰富,同时也体会到了教学的讲授过程中引导学生提高道德品质的教育. 众所周知,《细胞培养》是培养学生动手能力最基本的训练过程.原代细胞的培养是细胞培养中最为重要的,它是传代培养的前提,也是关系到医学细胞生物学后续实验重要基础.在原代培养的实验课中,我们应该留给学生印象最深、体会最多的是什么呢?本文就如何提高细胞培养实验课的教学质量,提高在实验教学中做到教书育人.谈点肤浅的体会,以期得到同行的指教.

摘要： 目的：探讨用HO制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。方法：用不同浓度的HO作用于原代培养的大鼠海马细胞氧化损伤模型,利用MTT比色法检测细胞存活率,光镜和透射电镜进行细胞形态学观察。结果：当HO浓度为1000umol/L时,制作的海马细胞氧化损伤模型最佳。结论： 1000umol/L HO为制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。

摘要： 目的：探讨用HO制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。方法：用不同浓度的HO作用于原代培养的大鼠海马细胞氧化损伤模型,利用MTT比色法检测细胞存活率,光镜和透射电镜进行细胞形态学观察。结果：当HO浓度为1000umol/L时,制作的海马细胞氧化损伤模型最佳。结论： 1000umol/L HO为制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。

摘要： 目的：探讨用HO制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。方法：用不同浓度的HO作用于原代培养的大鼠海马细胞氧化损伤模型,利用MTT比色法检测细胞存活率,光镜和透射电镜进行细胞形态学观察。结果：当HO浓度为1000umol/L时,制作的海马细胞氧化损伤模型最佳。结论： 1000umol/L HO为制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。

摘要： 目的：探讨用HO制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。方法：用不同浓度的HO作用于原代培养的大鼠海马细胞氧化损伤模型,利用MTT比色法检测细胞存活率,光镜和透射电镜进行细胞形态学观察。结果：当HO浓度为1000umol/L时,制作的海马细胞氧化损伤模型最佳。结论： 1000umol/L HO为制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。

摘要： 目的：探讨用HO制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。方法：用不同浓度的HO作用于原代培养的大鼠海马细胞氧化损伤模型,利用MTT比色法检测细胞存活率,光镜和透射电镜进行细胞形态学观察。结果：当HO浓度为1000umol/L时,制作的海马细胞氧化损伤模型最佳。结论： 1000umol/L HO为制作海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度。

摘要： 本发明涉及一种细胞培养容器及原代细胞的培养方法，该细胞培养容器包括至少一个培养单元，培养单元包括培养槽、固定件和盖体，培养槽用于承装细胞培养液，固定件位于培养槽的槽底上，用于固定组织块，以使组织块贴附于培养槽的槽底，盖板能够收容于培养槽中，盖板与固定件活动连接。上述细胞培养容器可以提高原代培养的细胞产量。

摘要： 本发明提供了一种用于原代培养肿瘤细胞的细胞培养组合物及用途。在本发明的细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途中，所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。本发明的细胞培养组合物能够成功地对上皮来源的肿瘤细胞进行体外原代培养，大大地提高了上皮来源的肿瘤细胞原代培养的成功率，并且能够抑制癌组织中的间质细胞如成纤维细胞和内皮细胞的生长，例如，应用本发明所述的细胞培养组合物能在10天内使上皮来源的肿瘤细胞原代培养成功，培养的成功率大部分在80％以上；并基本上能稳定传代至8代以上，可成功建系。

摘要： 本发明公开了一种细胞培养基，原料配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F‑12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y‑276327～9μmol/L。所述细胞培养基可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了培养基，用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞。

摘要： 本发明提供一种用于快速、稳定地培养原代肝癌细胞的原代肝癌细胞培养基和原代肝癌细胞培养方法。上述原代肝癌细胞培养基含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、IL‑6、表皮生长因子、胰岛素、Y27632、N2添加剂、B27添加剂、Primocin、青霉素和链霉素、胎牛血清、以及任选的氢化可的松、任选的R‑spondin1。由本发明的原代肝癌细胞培养基以及本发明的原代肝癌细胞培养方法得到的细胞模型，能够用于药物的疗效评估和筛选。

摘要： 本发明提供了一种原代汗腺细胞条件培养基及原代汗腺细胞培养方法，其中，所述原代汗腺条件细胞培养基包括：细胞基础培养基、血清、Glutamax、缓冲液、细胞培养添加剂、青霉素/链霉素、表皮生长因子、碱性成纤维细胞因子、非必需氨基酸、胰岛素、ROCK抑制剂及NF‑κB激动剂。本发明在原代汗腺细胞基础培养基中添加有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、NF‑κB激动剂及ROCK抑制剂。通过这些生长因子和小分子的组合，以实现人原代汗腺细胞在二维条件下的体外长期扩增培养，并在传代中维持其自身的生物学特性，延缓原代汗腺细胞的衰老进程，为快速大量制备高质量的、可移植用人汗腺细胞，满足大规模临床治疗的需求提供了前提条件。

摘要： 本发明涉及一种细胞培养容器及原代细胞的培养方法，该细胞培养容器包括至少一个培养单元，培养单元包括培养槽、固定件和盖体，培养槽用于承装细胞培养液，固定件位于培养槽的槽底上，用于固定组织块，以使组织块贴附于培养槽的槽底，盖板能够收容于培养槽中，盖板与固定件活动连接。上述细胞培养容器可以提高原代培养的细胞产量。

摘要： 本发明公开了一种细胞培养基，原料配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y-276327～9μmol/L。所述细胞培养基可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了培养基，用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞。

摘要： 本发明提供了一种用于原代培养肿瘤细胞的细胞培养组合物及用途。在本发明的细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途中，所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。本发明的细胞培养组合物能够成功地对上皮来源的肿瘤细胞进行体外原代培养，大大地提高了上皮来源的肿瘤细胞原代培养的成功率，并且能够抑制癌组织中的间质细胞如成纤维细胞和内皮细胞的生长，例如，应用本发明所述的细胞培养组合物能在10天内使上皮来源的肿瘤细胞原代培养成功，培养的成功率大部分在80％以上；并基本上能稳定传代至8代以上，可成功建系。

摘要： 本发明提供具备适宜的亲水性和强度，细胞接种后的固定性较高，可高效进行细胞增殖的细胞培养用支架材料。本发明的细胞培养用支架材料为含有合成树脂的细胞培养用支架材料，其中，所述合成树脂的氮含量为0.1质量％以上10质量％以下。

摘要： 本发明涉及医疗培养装置技术领域，且公开了一种可监测鼻咽癌原代细胞培养液体环境的细胞培养装置，包括恒温培养箱和若干个原代细胞培养瓶，所述恒温培养箱的内侧设置有培养皿装载组件，若干个所述原代细胞培养瓶通过培养皿装载组件放置于恒温培养箱的内侧。该可监测鼻咽癌原代细胞培养液体环境的细胞培养装置，推动组件能够引流皿向上移动，从而使顶柱向上移动，顶柱向上移动会推动橡胶密封块，使橡胶密封块不再堵塞漏孔，从而使原代细胞培养瓶内侧的培养液通过漏孔流至底部内凹结构的内侧，并沿着引流管排出至恒温培养箱的外侧，达到无需从恒温培养箱的内侧取出原代细胞培养瓶，即可对原代细胞培养瓶内侧的培养液进行检测的效果。