丝状真菌

摘要： 丝状真菌是一类非常重要的生物资源,其数量庞大、种类繁多、分布广泛,在食用、药用、环保等多个领域为人类创造着越来越多的利益。对丝状真菌产物的研究与开发具有非常大的发展空间。本文围绕丝状真菌培养及其产物的研究进展,对丝状真菌的研究现状作一简要的概述。

摘要： 目的探究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在临床分离丝状真菌鉴定中的应用。方法收集2019年1-12月该院临床标本中分离培养的230株常见丝状真菌,行MALDI-TOF-MS技术鉴定,并与传统形态学及DNA基因测序结果进行综合对比,评价MALDI-TOF-MS技术在丝状真菌鉴定中的能力。结果临床分离230株丝状真菌包括曲霉菌属183株(79.6%)、青霉菌属23株(10.0%)、镰刀菌属13株(5.7%)、石膏样小孢子菌6株(2.6%)、根毛霉3株(1.3%)、米根霉2株(0.9%);主要来源于痰液及肺泡灌洗液,其次为角膜分泌物和耳道分泌物。传统形态学鉴定到种水平的准确率为69.1%,主要为烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉等常见曲霉菌,其余均鉴定到属水平。DNA基因测序分析鉴定到种水平的准确率为100.0%。MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率为88.7%,主要为曲霉菌属和镰刀菌属;其鉴定丝状真菌曲霉菌属中烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉及镰刀菌属到种水平的准确率为100.0%,与DNA测序方法结果符合一致。以DNA测序结果为准,MALDI-TOF-MS技术鉴定丝状真菌到种水平的准确率显著高于传统形态学鉴定(χ^(2)=26.455,P<0.001)。结论MALDI-TOF-MS技术鉴定临床丝状真菌符合率高,快速、准确且操作便捷,可作为临床真菌实验室鉴定的有效补充手段,为真菌鉴定提供了新的选择。

摘要： 丝状真菌是具有完整细胞结构的真核生物,其基本形态是单细胞孢子和多细胞菌丝体。丝状真菌在城镇供水系统中广泛存在,会造成严重的人类健康风险和水污染问题,然而,因真菌很少引起急性疾病,供水系统中真菌污染问题未受到足够重视。但是,供水系统中的真菌对免疫力低下的老人和小孩影响很大。在不同水源中均能频繁检测出丝状真菌,传统水处理工艺过程能大幅降低真菌数量,但深度水处理工艺生物活性炭出水真菌浓度升高,具有很高的生物风险;传统氯消毒不能有效控制水中真菌,管网输配过程真菌容易二次繁殖并进入用户家中,引发真菌生物风险。目前,供水系统中真菌污染的研究还处于初级阶段,还有很多问题值得进一步研究。水中真菌的快速检测方法、快速暴发条件、安全高效消毒方法以及真菌毒素的控制是今后的研究方向。需要从水源、水厂、联合消毒、管网等多方面控制丝状真菌污染,建立多单元协同控制真菌污染的多级屏障体系,保障供水安全。

摘要： 为了在实验室条件下更加快速、经济、安全、高效地提取丝状真菌DNA,研究出了一种利用NaOH碱裂解快速提取DNA的方法,主要包括以下步骤:利用液氮快速粉碎样品;采用碱裂解(NaOH)的方式一步提取DNA;以TE缓冲液中和;以中和后的DNA作为模板进行基因克隆及PCR分析。通过比较不同的NaOH浓度提取尖孢镰刀菌DNA质量,确定最适NaOH浓度为0.5 mol/L。试验用此方法提取了丝状真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的基因组并用于基因克隆。同时,利用该方法提取的DNA质量可满足尖孢镰刀菌转化子的快速PCR鉴定需求。综上所述,与利用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)提取DNA相比,利用NaOH碱裂解法,可以更加快速提取丝状真菌的DNA,操作步骤简单,节约时间,无须使用氯仿、异丙醇等有毒物质,而且提取的丝状真菌DNA完整性较好,质量可观,可用于基因克隆及转化子筛选鉴定,具有一定的利用价值和推广前景。

摘要： 灵芝霉菌污染,是指灵芝在栽培过程中,培养料上非特定培养的,对灵芝菌丝正常生长产生不利影响的一类营腐生为主的丝状真菌病害。一、防治原则按照“预防为主、综合防治”的方针,遵循以农业、物理、生态防治为主,化学防治为辅的防控原则,从产地环境、生产投入品、栽培等关键环节上采取综合措施预防和控制霉菌污染。

摘要： 利用丝状真菌的吸附和降解作用对废水进行处理具有较大的应用潜能,且在各种类型的废水中都得到了广泛的研究。文章主要阐述了丝状真菌的生物学特性、对废水的作用机理和在废水中的应用。旨在为废水的治理提供参考依据,也为丝状真菌在废水中的治理提供相关的信息及研究现状。

摘要： 将待保存菌株接种在PDA培养基平板中央,在菌落周围放置直径3~5 mm的圆形无菌滤纸片,待真菌菌丝(孢子)长满滤纸片后,将其取出放入无菌培养皿中,放置在底部盛有变色硅胶的干燥器中干燥3~5 d。将干燥后的带菌滤纸片再转入底部装有无菌变色硅胶的无菌离心管中,用封口膜封口,放入透明冷冻盒内-20°C保存。通过对保存周期为2~7年的15种真菌菌种共计260个菌株的存活情况及部分菌株的致病性进行检测,发现保存的菌种存活率高,致病性和生物学特性不易退化。因此,滤纸片低温干燥法保存丝状真菌菌种,具有对设备要求简单、占用空间小、保存容量大、保存时间长、工作效率高等优点。

摘要： 随着对丝状真菌基因水平研究的不断深入,CRISPR/Cas9技术作为先进的基因编辑技术,已被广泛应用于丝状真菌的基因编辑。探究了CRISPR/Cas9系统在不同丝状真菌中的应用情况,主要从sgRNA的构建与表达、Cas9蛋白的改造与表达、不同的DNA双链断裂修复(DNAdouble-strandbreak,DSB)方式等方面进行概述,并对编辑效率、脱靶效应进行总结,旨在为今后丝状真菌中CRISPR/Cas9系统的构建及改良提供思路。

摘要： 目的以生物梅里埃质谱仪(Vitek MS)为技术平台,探讨不同培养温度、培养基、培养时间下对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定丝状真菌能力的影响。方法将148株临床分离的丝状真菌分别接种于沙氏葡萄糖培养基(SDA)与马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),并分别放置于28°C与37°C两种不同温度条件下,培养至第2、3、4、5、6、7、8、9天进行MALDI-TOF MS鉴定,统计其鉴定情况,筛选适合质谱鉴定的最佳培养条件。结果4种培养条件下(SDA 28°C、SDA 37°C、PDA 28°C和PDA 37°C)的鉴定率分别为83.11%、81.76%、70.95%、69.60%,总体差异有统计学意义(P<0.05),4种培养条件两两比较,其中SDA 28°C组的鉴定率优于PDA 37°C组,差异有统计学意义(P<0.05),故SDA 28°C组合为最适培养条件。置SDA于28°C条件下,质谱对培养2~9 d丝状真菌的鉴定率分别为89.86%、87.83%、76.35%、66.89%、62.83%、63.51%、59.04%、50.05%,不同培养天数下的鉴定率差异有统计学意义(P<0.05),其中第2天与第3天鉴定率均较高;随着培养时间的延长,培养第4~9天得到的鉴定率明显下降。结论以Vitek MS为丝状真菌鉴定平台,使用SDA培养基在28°C培养2~3 d可获得较理想的鉴定率和较高质量的质谱图谱。

摘要： 近日,西北农林科技大学植物保护学院病原真菌功能基因组学研究团队在遗传学权威期刊《PLoS Genetics(自然指数期刊)》上发表了相关研究论文。生长抑制因子蛋白家族(ING)是一类重要的肿瘤抑制因子。在正常细胞中,ING蛋白能够抑制肿瘤的形成与生长,如果ING蛋白的的功能被打破,癌症就有可能发生。小麦赤霉菌等丝状真菌的基因组中同样发现了生长抑制因子蛋白的编码基因,然而其功能及调控机制尚不清楚。

摘要： 本研究从柠檬酸污泥中分离筛选可以提高污泥脱水性能的丝状真菌,并分析不同菌液浓度对柠檬酸污泥脱水性能的改善情况.结果表明,在柠檬酸污泥中存在着可以促进污泥脱水性能改善的丝状真菌,并从中分离筛选出3株分别为Mucor circinelloides M37、Aspergillus niger SS5、Penicillium oxalicum LY-1.它们对改善污泥脱水性能具有良好的效果,且其改善效果受菌液浓度的影响.其中Mucor circinelloides M37的最适菌液浓度为20mL/gDS,SRF和CST分别下降90.10％和82.00％,MSR为72.3％;spergillus nigerSS5的最适菌液浓度也为20mL/gDS,SRF和CST分别下降81.2％和86.74％,MSR为72.97％;Penicillium oxalicum LY-1的最适菌液浓度为10mL/gDS,SRF和CST分别下降80.19％和80.9％,MSR为75.0％.因此,采用Mucor circinelloides M37、Aspergillus niger SS5、Penicillium oxalicum LY-1处理柠檬酸污泥可以作为一种非常有潜力的新型污泥调理技术.

摘要： 本文从CRISPR/Cas系统发展历史、技术原理、应用现状、gRNA设计原则等方面进行了综述,分析了CRISPR/Cas9系统在丝状真菌上的应用策略并对其发展前景进行了展望.

摘要： 许多研究证明碳信号和光信号能够调控丝状真菌合成纤维素酶和半纤维素酶，从分子机理部分揭示了丝状真菌合成纤维素酶和半纤维素酶的信号感应机制。研究证明了受光调控的Velvet蛋白家族参与了光调控纤维素酶基因的表达。实验数据说明veA可能参与到光信号调控里氏木霉表达纤维素酶基因，而ve1B和velC可能抑制光信号正调控里氏木霉表达纤维素酶基因。同时，研究发现相对于150rpm转速条件下，草酸青霉中cbh1,cbh2,egl,eg2和bgll在250rpm转速条件的表达量明显提高，但转录因子xlnR和acel的表达却下调。最后，利用以上基础研究成果，人工构建合成生物学元件并导入丝状真菌中，部分地消除了碳分解代谢物阻遏作用，有效地提高了纤维素酶的转录水平。

摘要： 唑类药物是一类抑制真菌麦角甾醇合成的抗真菌物质，广泛地用于临床真菌感染和作物真菌病害的防控。在唑类抗真菌物质胁迫时，真菌能通过增强唑类外排泵和麦角甾醇合成相关基因的表达以减弱唑类药物对细胞的伤害，这是真菌对唑类药物非常普遍的胁迫响应。本文以粗糙脉孢菌为模式材料，对粗糙脉孢菌转录因子突变体库进行了筛选，发现了一个转录因子ADS-1，该转录因子的敲除使粗糙脉孢菌对唑类药物的敏感性大幅度地提升。RNA-seq分析发现，ADS-1调控粗糙脉孢菌对酮康唑的转录响应，ADS-1的缺失，影响了86个基因对酮康唑的转录响应，其中一个基因编码唑类药物的外排泵CDR4oADS-1同源蛋白在丝状真菌中广泛存在，植物病原菌轮枝镰刀菌中ADS-1同源蛋白编码基因的缺失，也使该菌对唑类药物的敏感性大幅度地提升，说明该转录因子在不同真菌中功能保守。

摘要： 近年来,随着丝状真菌的分子生物学研究的快速发展,丝状真菌的遗传转化研究取得了长足的进步.本文对丝状真菌遗传转化系统的最新研究进展进行了综述,主要包括丝状真菌转化方法、选择标记、转化系统的应用等.作为分子生物学技术的一种基础手段，真菌的遗传转化包括两个方面:一是将遗传因子转到受体细胞之中;二是分离获得外源遗传因子的受体细胞。大部分的转化方法都能够使受体细胞接受目标片段，而有效的筛选目的转化子往往是遗传转化技术发展的限制因素。丝状真菌坚硬的细胞壁是遗传转化的主要障碍，所以丝状真菌的转化一般以原生质体作为受体细胞，制备原生质体的材料包括幼嫩菌丝、分生孢子和担孢子。真菌的转化载体一般都是以细菌来源的质粒为基础构建的载体。由于这些载体要在原核细胞和真核细胞中扩增乃至表达目的基因，为了检测转化后的瞬时表达情况，载体上一般要加入选择性标记。选择性标记还具有进一步确定遗传转化子及转化子遗传特性的作用。

摘要： 丝状真菌与工农业生产和人类健康水平密切相关。铜(Cu)既是生物生长的必需(痕量水平)又是一种毒性元素(高浓度)。真菌中除酵母以外，丝状真菌对Cu的抗性分子机制了解的十分有限。

摘要： 漆酶是一类广泛存在于各种生物中的含铜的多酚氧化酶，具有降解木质素以及氧化各种酚类和胺类化合物的功能，在生物能源、造纸、纺织、食品、环境保护等行业具有重要的应用价值。在产漆酶丝状真菌中，白腐真菌具有较高的漆酶分泌能力，成为该研究领域的热点。但是由于产量低、周期长、成本高等原因，漆酶的应用一直停留在实验室研究阶段。要解决漆酶的应用问题，必须充分了解漆酶的酶学性质、基因表达调控机制及异源表达的可行性等，进一步提高菌体漆酶产量。

摘要： 以采自江西农业大学的南方红豆杉为试验材料,对其根和茎通过组织块分离法和划线分离法分离红豆杉内生菌,共获得5株内生菌；再通过摇瓶培养和静止培养,用二氯甲烷萃取抽提,抽提产物以紫杉醇标准品为对照,先后利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分别对内生菌的抽提产物进行分析鉴定,结果表明有三株内生菌的抽提产物在层析带上的迁移率Rf值和色谱峰值出现时间与紫杉醇标准品十分接近,分别命名为红茎1、红茎3、红根4,表明这三株内生菌可能产紫杉醇类物质。可能产紫杉醇类物质。最后在察氏培养基上，利用点植培养法、载片培养法和插片法观察菌落、菌丝体和抱子的形态特征并进行初步鉴定，发现这3株内生菌均为丝状真菌。

摘要： 本文以土壤菌种为来源,研究2株木霉液体混合发酵对产纤维素酶活力的影响,旨在为液体混合发酵产纤维素酶的研究提供新的参考。本研究经初筛和复筛从土样中分离纯化出2株降解纤维素效果较好的丝状真菌。被确认为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)和木霉未定名种。对2株单菌和混合菌分别优化出产纤维素酶的最佳发酵条件,并对复配菌株优化出最佳接种量配比和最佳发酵时间,为2株木霉液体混合发酵产纤维素酶提供了新的研究依据。

摘要： 在发酵过程中,丝状真菌的形态和过程参数,包括:搅拌和物料传递等,相互之间有着紧密的联系,并且作用最终在产物产量上得到体现.本文研究了青霉素原始菌株在3.7L 小型发酵罐和摇瓶中,青霉素产量与菌丝形态,包括菌丝体直径、分支数以及异化率之间的关系.结果表明:发酵罐中菌丝体形态变化远小于摇瓶中的菌丝体,并且青霉素效价与菌丝异化程度之间存在一定的对应关系.当菌丝体异化率达到30%,平均直径4μm以上的临界条件时,青霉素效价最高,异化率超过60%,青霉素产量开始下降.在罐中由于菌丝体形态变化不明显,青霉素效价一直在较低水平.

摘要： 本发明公开了打结丝线在丝状真菌繁殖上用途，以及利用打结丝线作为载体繁殖丝状真菌的方法。本发明主要是利用打结丝线在水中能下沉，并且其细线丝在水中能伸展，从而有利于菌丝的附着；同时打结丝线的细线丝可在液体中伸展开来，具有柔性且能在机械搅拌条件下不变形，有利于附着菌丝的打断的特点，以打结丝线作为载体，利用机械搅拌的方法将附着在打结丝线上的菌丝进行周期性的打断，进而繁殖丝状真菌的方法。本发明打结丝线材料易取，效果好。本发明方法丝状真菌的繁殖和生长量大，可满足工业上的需要；此外，本发明方法简单、成本低，易于推广应用。

摘要： 本发明涉及丝状真菌培养基、其制备方法及对丝状真菌的培养方法，培养基包括碳源、氮源、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、九水硝酸亚铁、硝酸锌、氯化钾、氯化镁、pH调节剂和水，其中，碳源选自蔗糖、玉米淀粉水解糖或其组合；氮源为硝酸钠，碳源含量为20‑70g/L，氮源含量为2‑5g/L，磷酸氢二钾含量为1‑4g/L，七水硫酸镁含量为2‑5g/L，九水硝酸亚铁含量为4‑6g/L，硝酸锌含量为1‑3g/L，氯化钾含量为3‑8g/L，氯化镁含量为3‑8g/L，pH调节剂选自硫酸、碳酸、磷酸或其组合。本发明培养基可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌。

摘要： 本发明公开了一种高效改造丝状真菌的方法及改造的丝状真菌菌株，方法是向丝状真菌细胞中同时导入多基因干扰构建体和目的蛋白表达构建体，再通过筛选得到高效改造丝状真菌；其中多基因干扰构建体包含可以在丝状真菌细胞内起始转录的启动子、由内含子隔开的由2-30个靶基因的编码区序列嵌合连接在一起的反向重复序列、可以在丝状真菌细胞内终止转录的终止子；目的蛋白表达构建体包含可以在丝状真菌细胞内起始转录的启动子、目的蛋白的编码区序列、可以在丝状真菌细胞内终止转录的终止子。本发明提高了丝状真菌的改造效率，降低了目的蛋白的下游分离纯化成本。经过一次转化后改造的丝状真菌细胞能够用于生产食品安全级酶制剂。

摘要： 本发明涉及丝状真菌培养基，其制备方法及培养丝状真菌的方法，培养基包括碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂和水，其中：碳源为蔗糖或葡萄糖的一种或两种的组合，氮源为铵盐或五氯硝基或酵母膏的一种或多种的组合；丝状真菌培养基中各组分在500ml水中的含量分别为：碳源8~12g，氮源2~4g,七水硫酸镁0.2~0.4g，琼脂8.5~12.5g。本发明培养基可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌。

摘要： 本发明涉及制备具有性周期丝状真菌菌株的方法，其中对不具有或具有一种类型MAT基因座位的受体丝状真菌菌株进行重组，其中来自不是受体丝状真菌菌株的其他种的一种或者多种交配型基因座位基因和可选的性相关基因被引入到所述受体丝状真菌菌株以产生具有性周期的丝状真菌菌株。

摘要： 本发明涉及丝状真菌培养基，其制备方法及培养丝状真菌的方法，培养基由碳源、氮源、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、九水硝酸亚铁、硝酸锌、氯化钾、氯化镁、pH调节剂以及水组成，其pH值为3~5，其中：碳源为蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的组合；氮源为硝酸钠，丝状真菌培养基中碳源的含量为20~70g/L，氮源的含量为2～5g/L，磷酸氢二钾的含量为1～4g/L，七水硫酸镁的含量为2～5g/L，九水硝酸亚铁的含量为4～6g/L，硝酸锌的含量为1～3g/L，氯化钾的含量为3～8g/L，氯化镁的含量为3～8g/L，pH调节剂为选自硫酸、碳酸或磷酸中的一种或多种的组合。本发明培养基可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌。

摘要： 本发明提供一种功能性丝状真菌检测方法，其采用选自具有序列号1、序列号2、序列号3或序列号4所示的碱基序列的多核苷酸和具有与其互补的碱基序列的多核苷酸和具有与它们实质相同的碱基序列的多核苷酸中的至少1个多核苷酸，检测试样中的功能性丝状真菌短矮鬼伞(Coprinus curtus)，还提供了一种含有功能性丝状真菌制品的评价方法，其评价含有功能性丝状真菌制品中的功能性丝状真菌短矮鬼伞的存在或浓度。

摘要： 本发明公开了打结丝线在丝状真菌繁殖上用途，以及利用打结丝线作为载体繁殖丝状真菌的方法。本发明主要是利用打结丝线在水中能下沉，并且其细线丝在水中能伸展，从而有利于菌丝的附着；同时打结丝线的细线丝可在液体中伸展开来，具有柔性且能在机械搅拌条件下不变形，有利于附着菌丝的打断的特点，以打结丝线作为载体，利用机械搅拌的方法将附着在打结丝线上的菌丝进行周期性的打断，进而繁殖丝状真菌的方法。本发明打结丝线材料易取，效果好。本发明方法丝状真菌的繁殖和生长量大，可满足工业上的需要；此外，本发明方法简单、成本低，易于推广应用。

摘要： 本实用新型涉及一种丝状真菌纯化器皿及丝状真菌培养皿。所涉及的丝状真菌纯化器皿包括一中空管状器皿；所涉及的丝状真菌培养皿包括皿盖和皿体，所述皿盖内的顶壁上固接有中空管状器皿，且该中空管状器皿向皿体底部延伸但不接触皿体底部，所述中空管状器皿的侧壁上开设有通孔。本实用新型的中空管状器皿将培养皿内部空间分成两个部分，细菌生长在中空管状器皿内、接种点附近的培养基表面，真菌可以生长到中空管状器皿外侧培养基表面，将生长在中空管状器皿外侧培养基表面的真菌再进行一次分离，即可得到纯化的真菌。这种器皿能有效分离真菌与细菌，简化试验步骤，缩短纯化时间。

摘要： 本申请涉及真菌发酵技术领域，尤其涉及一种便于丝状真菌收集的高通量发酵装置，其包括多个发酵罐、加热装置和联通装置，多个所述发酵罐位于同一加热装置上,多个所述发酵罐通过联通装置相互连通，所述发酵罐内设置有搅拌装置，多个所述搅拌装置之间设置有搅拌控制单元，多个所述搅拌装置通过同一搅拌控制单元进行控制。本申请改善了产品的批次稳定性较差的问题。