胞嘧啶脱氨酶

摘要： 随着对APOBEC3抗病毒功能的深入研究以及其在癌症中的表现,APOBEC3已成为当前的热点.小鼠只有一个APOBEC3基因,而人类有七个APOBEC3基因,人类APOBEC3G是其中研究最明确的抗病毒蛋白.利用生物信息学方法对两个蛋白进行序列比对、亲疏水性分析、亚细胞定位预测、二级结构及高级结构分析以及相互作用分析.结果显示小鼠APO-BEC3和人类APOBEC3G具有很多相似之处,二者均为碱性的不稳定亲水性蛋白质,二者含量最高的氨基酸也都是Leu.小鼠APOBEC3属于APOBEC超家族,具有两个保守的结构域.小鼠APOEC3的结构分析可能对进一步揭示哺乳动物APO-BEC3的功能具有重要意义.

摘要： Programmable nucleases are cutting edge genetic technology which edits targeted DNA sequences through generation of site-specific double-strand DNA breaks (DSBs).To improve the efficiency and precision of genetic modification,scientists have developed a single-base editing system (base editor) through combining of CRISPR/Cas9 system with cytosine deaminase.Compared with Cas9 system,this base editor can convert cytosine to thymine (C ＞ T) at specific site more efficiently without inducing DSBs to avoid generation of indels.However,the base editor can only generate transition of pyrimidine but could not modify purines.Recently,Nature published a novel base editing system to convert adenine to guanine (ABEs,adenine base editors) through fusion of Cas9 nickase to a modified deaminase which is evolved through screening of random library based on tRNA adenine deaminase from E.coli.Here,we summarize the development of single-base editing tools and the latest research progress,especially the optimization process of ABEs,as well as the potential directions of the base editors.%近年发展起来的人工核酸酶可通过引起特定位点的DNA双链断裂实现对目的片段的有效编辑.为进一步提高碱基修改的效率和精确度,2016年研究者们利用CRISPR/Cas9识别特定DNA序列的功能,结合胞嘧啶脱氨酶的生化活性发明了将胞嘧啶高效转换为胸腺嘧啶(C＞T)的嘧啶单碱基编辑系统(base editor).这一系统虽然能精准实现嘧啶直接转换,大大提高精确基因编辑效率,但美中不足的是无法对嘌呤进行修改.近期,Nature 报道了将细菌中的tRNA腺嘌呤脱氨酶定向进化形成具有催化DNA腺嘌呤底物的脱氨酶,将其与Cas9系统融合发明了具有高效催化腺嘌呤转换为鸟嘌呤的新工具—腺嘌呤单碱基编辑系统(ABEs,adenine base editors).本文总结了单碱基编辑工具的发展历程和最新研究进展,着重介绍ABEs的研发过程,并对单碱基编辑工具今后的应用方向和研发方向进行展望.

摘要： 据2017年3月1日《中国科学报》报道，中科院遗传与发育生物学所高彩霞研究组在前期工作基础上，借鉴哺乳动物单碱基编辑方法，利用Cas9变体（nCas9-D10A）融合大鼠胞嘧啶脱氨酶（rAPOBEC1）和尿嘧啶糖基化酶抑制剂（UGI），构成了高效的植物单碱基编辑系统nCas9-PBE，

摘要： 本研究证明了一种以季戊四醇衍生物为核的新型聚酰胺-胺型树状大分子(G5 PD dendrimer)可以有效介导融合胞嘧啶脱氨酶(cytosine deamniase,CD)自杀基因在多种肿瘤细胞内表达并诱导其发生凋亡.通过研究G5 PD dendrimer与融合基因形成复合物的性质,筛选出最优处方对肿瘤细胞进行转染,并观察自杀基因促肿瘤细胞凋亡的作用.结果显示,G5 PD dendrimer和质粒的最佳复合比为0.2∶1,复合物的粒径为(100±5) nm.实验中,以G5 PD dendrimer和质粒按质量比1∶1形成的复合物分别对3种肿瘤细胞进行转染,其效果均高于商用转染试剂.抑制肿瘤细胞增殖实验发现转染了CD基因的细胞可以在很短的时间内将少量5-氟胞嘧啶(5-FC)高效地转化为氟尿嘧啶(5-FU)并抑制癌细胞增殖,而且该结果也呈现出一定的细胞选择性.上述结果表明,该类新型的CD/5-FC自杀基因传递系统具有较好的应用前景.

摘要： 中科院上海生命科学研究院／上海交通大学医学院健康科学研究所常兴研究组利用靶向性胞嘧啶脱氨酶在体内实现高效率和高通量的DNA碱基编辑，研究论文发表于《自然一方法》。当把核酸酶缺陷的Cas9蛋白和诱导抗体高频突变的胞嘧啶脱氨酶AID融合后。在sgRNA靶向的基因组DNA上．胞嘧啶和乌嘌呤可以随机地向其它三个碱基转变。

摘要： Objective To study the multidrug resistance gene 1 (MDR1) promoter regulated cytosine deaminase and uracil phosphoribosyltransferase fusion gene (CD:UPRT) killing of esophageal cancer cells in nude mice EC9706 cells.Methods 0.2 ml EC9706 cells were inoculated subcutaneously in nude mice and esophageal cancer xenograft model to build and build pAdTrack-MDR1-CD:UPRT plasmids,were randomly divided into three groups of treated and observed 30 d,tumor volume was measured using the V =x × y2/2 (x long diameter,y for short diameter).Routine pathological examination of tumor tissue,immunohistochemical detection of CD protein.Results Successfully constructed subcutaneous xenograft model of esophageal cancer,treatment for 30 days,group B,group C rapid tumor growth,surface necrosis,tumor volume was (3.21 ±0.23) cm3,(3.15 ±0.22) cm3;A group of tumor growth restrained,the first 30 days volume (cm3),compared to the difference of (0.98 ±0.15) was statistically significant (P ＜0.05).A group of tumor cells arranged in a sparse,large areas of necrosis red dye,partially visible condensation nuclei,nuclear fragmentation;group B,group C tumor cells tightly packed,rich in blood vessels,cell morphology and cell nuclei were pleomorphic,and a large stained mitotic common.After immunohistochemical staining,A,group B tumor tissues were positive,indicating that the protein expression of CD,group C immunohistochemical staining of tumor tissue was negative.Conclusion MDR1 promoter regulated CD:UPRT/5-fluorocytosine (5-FC) fusion suicide gene system for esophageal carcinoma in nude mice xenograft significant cytotoxicity,gene therapy for esophageal cancer provides a possible approach.%目的 观察多药耐药基因1(MDR1)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因(CD:UPRT)在裸鼠体内对食管癌细胞EC9706细胞的杀伤作用.方法 0.2 ml EC9706细胞悬液接种裸鼠,构建食管癌皮下移植瘤模型及pAdTrack-MDR1-CD:UPRT质粒,模型随机分成3组经处理并观察30 d,测量肿瘤体积使用V=x×y2/2(x为长径,y为短径).肿瘤组织常规病理检查,免疫组织化学检测CD蛋白的表达.结果 成功构建食管癌皮下移植瘤模型,处理30 d后,B、C组肿瘤生长迅速,表面出现坏死,肿瘤体积分别为(3.21±0.23)、(3.15 ±0.22) cm3;A组肿瘤生长受到抑制,第30天体积为(0.98±0.15) cm3,差异有统计学意义(P＜0.05).A组肿瘤细胞排列稀疏,大片坏死红染,部分可见胞核固缩、核碎裂;B、C组肿瘤细胞排列紧密,血管丰富,细胞形态及细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见.经免疫组织化学染色后,A、B组肿瘤组织呈阳性反应,表明有CD蛋白的表达,C组肿瘤组织免疫组织化学染色呈阴性.结论 MDR1启动子调控的CD:UPRT/5-氟胞嘧啶(5-FC)融合自杀基因系统对裸鼠食管癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用.

摘要： 目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.

摘要： 目的：研究自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染的小鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）联合酶前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对小鼠肝癌细胞株H22的体外抗增殖作用。方法：分离普通小鼠骨髓源性EPCs，培养鉴定，Polybrene技术转染含CD基因的慢病毒载体重组体plenti6．3-EGFP-CD至EPCs，Western blotting检测目的蛋白的表达。利用Transwell小室共培养体系，用转染CD基因的EPCs处理H22细胞。 CCK-8法检测H22细胞增殖变化，流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：成功转染CD基因至EPCs；CCK-8法检测显示随着5-FC浓度增加，细胞增殖逐渐下降，5-FC浓度达100 mg· L-1时，肿瘤细胞增殖抑制率达到（54．74±5．38）％（P＜0．05），细胞平均凋亡率为（48．71±4．62）％（P＜0．05）。结论：CD基因修饰的EPCs 联合5-FC体外可明显抑制肝癌H22细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。%Objective:To investigate the suppression of the proliferation of hepatoma H 22 cells treated through mice marrow-derived endothelial progenitor cells(EPCs) modified by cytosine deaminase (CD) gene and enzyme prodrug 5-fluorocytosine (5-FC) in vitro.Methods: EPCs were isolated from mice bone marrow .After cultured and identified, EPCs were transfected by lentiviral vector carrying CD gene (plenti6.3-EGFP-CD ) using Polybrene technique .Expression of target protein was tested by Western blotting .H22 cells were treated by the EPCs carrying CD gene using Transwell cells co-culture system .CCK-8 method was used to detect the proliferation of H 22 cell. The tumor apoptosis was tested by flow cytometry .Results: The transfection of CD gene to EPCs was detected successfully .CCK-8 assay showed that cell proliferation gradually decreased along with increasing of 5-FC concentration .When 5-FC reached 100 mg· L-1 , the proliferation inhibition of tumor cells was about ( 54 .74 ± 5.38)%(P<0.05) and the average apoptosis rate was (48.71 ±4.62)%(P <0.05).Conclusion: EPCs modified by CD gene with 5-FC can effectively inhibit hepatoma H 22 cells proliferation and induce cells apoptosis in vitro.

摘要： 目的 研究脂多糖(LPS)或溶血性链球菌(HS)刺激IgA肾病和非肾脏疾病慢性扁桃体炎患者腭扁桃体单个核细胞Iα-Cα胚系转录本、激活诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)mRNA和蛋白的表达,以探讨IgA肾病腭扁桃体单个核细胞IgA及IgA1产生异常的分子机制.方法 入组2009年1月到2010年2月在我院住院的IgA肾病患者27例,非肾脏疾病慢性扁桃体炎患者27例作为对照.通过单个核细胞分离液和密度梯度离心法分离出腭扁桃体单个核细胞.IgA肾病组及非肾脏疾病慢性扁桃体炎组腭扁桃体单个核细胞分别分为3组:LPS刺激组,HS刺激组和未刺激组.ELISA法检测培养上清中IgA和IgA1的浓度.实时PCR检测Iα-Cα胚系转录本和AID mRNA的表达；Western印迹检测AID蛋白的表达.结果 IgA肾病组腭扁桃体单个核细胞IgA和IgA1的分泌,特别是IgA1/IgA较慢性扁桃体炎组显著增加(P＜0.05),Iα-Cα和AID mRNA和AID蛋白的表达较慢性扁桃体炎组显著增加(均P＜0.05).IgA肾病组腭扁桃体单个核细胞IgA和IgA1的水平在刺激后明显增加(P＜0.05)；Iα-Cα和AID mRNA的表达明显上调(均P＜0.05)；AID蛋白表达明显增加(LPS刺激组P＜0.05,HS刺激组P＜0.01).结论 LPS和HS均能够诱导IgA肾病患者腭扁桃体单个核细胞IgA和IgA1的分泌、AID和Iα-Cα的表达增加,提示IgA肾病患者腭扁桃体IgA和IgA1的分泌增加可能与IgA类别转换相关基因AID和Iα-Cα高表达有关.%Objec0tive To investigate the molecular mechanism of the mal-production of IgA and IgA1 by tonsillar mononuclear cells (TMCs) in IgA nephropathy (IgAN) patients by measuring the mRNA expression of Iα-Cα germline transcript and the mRNA and protein expression of activated induced cytidine deaminase (AID) in cultured TMCs stimulated with lipopolysaccharide (LPS) or hemolytic streptococcus (HS) in IgAN patients as well as the chronic tonsilitis patients. Methods Twent-seven IgAN patients admitted into our hospital from Jan.2009 to Feb.2010 were enrolled.Twent-seven patients with chronic tonsillitis without renal disease were selected as control.Tonsillar mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation in lymphocyte separation medium.The amount of IgA or IgA1 secreted in the culture supernatants was determined by specific enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Expressions of Iα-Cα germline transcript and AID mRNA were examined by real-time PCR.The AID protein was determined by Western blot. Results The production of IgA and IgA1 protein,especially the ratio of IgA1/IgA and the expression of AID protein in TMCs were significantly increased in IgAN group compared with chronic tonsillitis group (all P＜0.05).The IgA and IgA1 level of stimulated TMCs were obviously increased in patients with IgAN compared with control group (P＜0.05).And the expressions of Iα-Cα mRNA,AID mRNA and AID protein were up-regulated significantly in stimulated TMCs (all P＜0.05). Conclusions Both LPS and HS can induce the production of IgA and IgA1 and up-regulate the expressions of AID and Iα-Cα in TMCs of IgAN patients.Our results indicate that the TMCs are capable of producing high level of IgA and IgA1 stimulated by LPS or HS,whuch may be due to the　 incression of AID and Iα-Cα.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响.方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养.每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率.按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞存活率.结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％;于培养72h时,实验组1、3细胞存活率较对照组有显著性差异(P＜0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P＞0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P＜0.01).结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应.

摘要： 本发明提供了一种单链DNA，以及一种用于检测核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B的试剂盒及其应用。本发明的试剂盒结合荧光检测能够灵敏且稳定地检测出不同浓度APOBEC3B的活性，更重要的是应用在筛选抑制剂上，可以避免检出假阳性抑制剂，且方便快捷、价格较低、原材料用量小，可以高通量筛选APOBEC3B抑制剂。并且能检测出不同组织、细胞中APOBEC3B的表达水平。

摘要： 本发明公开了一组来源于植物的胞嘧啶脱氨酶和其在碱基编辑系统的方法及应用。实验证明，植物来源的胞嘧啶脱氨酶可以成功的对受体基因进行碱基编辑，对于基因编辑在植物中的应用具有重要的价值。

摘要： 本发明公开了一种脱氨酶辅助的DNA中5‑羧基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法。本发明使用胞嘧啶脱氨酶APOBEC3A蛋白对DNA中正常的胞嘧啶、5‑甲基胞嘧啶、5‑羟甲基胞嘧啶和5‑醛基胞嘧啶有效的脱氨基，对5‑羧基基胞嘧啶不脱氨基的策略，随后进行聚合酶链式反应扩增进而测序获得5‑羧基胞嘧啶的位点信息。该方法灵敏度高、选择性高、操作简便，且无需对DNA样品进行亚硫酸氢盐的处理，就可以直接获得DNA中5‑羧基胞嘧啶的单碱基分辨率定位。

摘要： 本发明公开一种在cfDNA中检测胞嘧啶脱氨酶及相关分子基因修饰差异的引物对组及试剂盒。本发明首先公开了一组在外周血游离DNA中检测胞嘧啶脱氨酶及相关分子基因表观遗传学修饰差异的引物对组，该引物对组由序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.15所示的核苷酸序列组成。本发明进一步公开了包含上述引物组的试剂盒。本发明在外周血游离DNA中检测胞嘧啶脱氨酶及相关分子基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒，该检测具有高敏感性和特异性，对肿瘤风险预测以及疗效评估具有重要的价值。

摘要： 本申请公开一种由胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B的C端结构域构成的胞嘧啶脱氨酶，以及包含该胞嘧啶脱氨酶、具有DNA单链切割活性的CRISPR/Cas系统相关蛋白、以及任选的尿嘧啶糖基化酶抑制剂的胞嘧啶编辑器融合蛋白。

摘要： 本发明提供了一种单链DNA，以及一种用于检测核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B的试剂盒及其应用。本发明的试剂盒结合荧光检测能够灵敏且稳定地检测出不同浓度APOBEC3B的活性，更重要的是应用在筛选抑制剂上，可以避免检出假阳性抑制剂，且方便快捷、价格较低、原材料用量小，可以高通量筛选APOBEC3B抑制剂。并且能检测出不同组织、细胞中APOBEC3B的表达水平。

摘要： 本发明公开了一种脱氨酶介导的DNA中N4‑甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位分析方法，属于生物技术领域。本发明方法利用胞嘧啶脱氨酶A3A蛋白对DNA中正常的胞嘧啶和5‑甲基胞嘧啶进行脱氨基，随后在后续聚合酶链式反应扩增形成胸腺嘧啶，而目标分析物N4‑甲基胞嘧啶能够抵抗胞嘧啶脱氨酶A3A的脱氨作用，因此在随后的聚合酶链式反应中扩增为胞嘧啶。这样，只有N4‑甲基胞嘧啶修饰才能在最终的测序中被读为胞嘧啶。本发明方法选择性高，准确性好，无需对DNA样品进行亚硫酸氢盐的处理，可直接获得DNA中N4‑甲基胞嘧啶的单碱基分辨率图谱。

摘要： 本发明提供了淫羊藿次苷Ⅰ或根皮素在制备核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B抑制剂中的应用。本发明将一种用于筛选核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B抑制剂的试剂盒应用在筛选核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B抑制剂上，结果发现淫羊藿次苷Ⅰ和根皮素均可以有效抑制核酸胞嘧啶脱氨酶APOBEC3B活性。

摘要： 本发明公开了一种人工改造脱氨酶辅助的DNA中5‑甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法。本发明利用人工改造的胞嘧啶脱氨酶eA3C‑1蛋白对DNA中不同序列特征的胞嘧啶可以实现有效的脱氨基，而其对不同序列特征的5‑甲基胞嘧啶不脱氨基的策略，随后进行聚合酶链式反应扩增进而测序获得5‑甲基胞嘧啶的位点信息。该方法灵敏度高、选择性高、操作简便，不涉及亚硫酸氢盐处理且无需其他生物酶介导，可以直接获得DNA中5‑甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位。

摘要： 本发明公开了人工改造脱氨酶辅助的DNA中5‑羟甲基胞嘧啶修饰单碱基分辨率定位分析方法，属于生物技术领域。本发明利用人工改造的胞嘧啶脱氨酶eA3A‑1及eA3A‑2蛋白分别对DNA中不同序列特征的胞嘧啶和5‑甲基胞嘧啶有效的脱氨基，而其对不同序列特征的5‑羟甲基胞嘧啶不脱氨基的策略，随后进行聚合酶链式反应扩增进而测序获得5‑羟甲基胞嘧啶的位点信息。该方法灵敏度高、选择性高、操作简便，无需亚硫酸氢盐的处理，亦无须对5‑羟甲基胞嘧啶进行糖基化保护，就可以直接获得DNA中5‑羟甲基胞嘧啶的单碱基分辨率定位。