摘要:
目的 探讨海马内注射酪氨酸激酶受体结合蛋白B3 (Ephrin-B3)激动剂对癫痫模型大鼠自发性痫性发作及海马组织分泌型糖蛋白Reelin及磷酸化接头蛋白(p-Dab1)表达的影响.方法 将78只大鼠按照体质量匹配原则随机分成对照组和模型组,每组39只.对照组大鼠正常饲养,模型组大鼠采用氯化锂-匹罗卡品注射法建立大鼠癫痫模型,在癫痫持续状态诱导成功后的急性期(7 d),静止期(14 d)和慢性期(60 d)取海马组织,采用免疫组化及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测癫痫模型大鼠和正常大鼠海马组织Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化,每个时间点每组随机选取13只大鼠.另取48只大鼠,按照随机数字表法分为正常对照Fc-control组、正常对照EphB3-Fc组、癫痫Fc-control组和癫痫EphB3-Fc组,每组12只,前两组正常饲养,后两组进行癫痫造模,造模后7d,所有大鼠按照分组分别进行双侧海马内注射Ephrin-B3的激动剂(EphB3-Fc)和Ephrin-B3激动剂的对照剂Fc-control,1次/d,连续7d.给药结束后,观察两周内大鼠行为与脑电图的变化,采用免疫组化及Western blot检测Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化.采用SPSS 21.0进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用Tukey's检验.结果 免疫组化和Western blot结果均显示,模型组大鼠海马组织中Reelin和p-Dab1蛋白在致痫后7d、14d、60d表达均低于对照组(均P<0.01).免疫组化结果显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dabl蛋白的平均光密度值更高[(0.41±0.04),(0.58±0.06),P<0.05].Westemblot结果显示,癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dabl蛋白表达显著高于癫痫后Fc-control组[(1.34±0.04),(2.26±0.10),P<0.01].动物行为学监测显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组大鼠自发性痫性发作持续时间更短[(39.00± 1.79)s,(26.50±1.87)s;t=23.21,P<0.01],频率更低[(2.00±0.89)次,(0.50±0.55)次;t=2.32,P<0.01],潜伏期延长[(6.33±1.37)d,(12.50±1.87)d;t=2.52,P<0.01].脑电图结果显示,与癫痫后Fc-control组相比,癫痫后EphB3-Fc组的大鼠脑电图痫性放电幅度下降[(37.30±1.21) μV,(29.00±1.41) μV;t=25.14,P<0.01],发作持续时间缩短[(5.35±0.19)s,(2.35±0.19)s;t=3.13,P<0.01].结论 Ephrin-B3通过上调Reelin和p-Dab1减轻颞叶癫痫大鼠自发复发性癫痫发作.