琼胶酶

摘要： 琼胶酶是一种降解琼脂多糖的酶,其水解产生的琼脂寡糖具有多种功能活性,在食品、化妆品和医药行业具有广阔的应用前景.琼胶酶绝大部分来源于海洋环境,极少部分为河水等非海洋性来源.根据琼胶酶水解琼脂糖模式的不同可分为两类:αG琼胶酶(EC3.2.1.158)和βG琼胶酶(EC3.2.1.81),它们分别水解琼脂糖中的αG1,3键和βG1,4键.本文从琼胶酶的基因挖掘、异源表达、晶体结构、催化机制和分子改造等方面,综述了国内外海洋来源琼胶酶的最新研究进展,旨在为构建高表达量、高稳定性的优质琼胶酶提供思路,为琼胶酶的深入研究提供一定的参考.

摘要： 为丰富优质琼胶酶品类,充分利用海藻资源,实现功能性琼胶寡糖的高效制备,采用基因组挖矿技术挖掘得到一个来源于海洋细菌——淡黄色噬琼胶菌(Agarivorans gilvus)WH0801的β-琼胶酶(β-AGA酶),利用生物信息学分析对该酶的理化性质和结构特征进行预测,发现该酶为非分泌性蛋白。在此基础上,采用分子生物学手段引入信号肽,实现了该酶在大肠杆菌(Escherichia coli)中的胞外表达,并通过发酵调控策略优化提高其生产效率。结果表明,采用种龄5 h的种子培养液进行发酵,发酵出发培养基为TB(pH 7.0),碳源为6 g·L^(-1)的果糖,氮源为30 g·L^(-1)的酵母提取液Ⅱ,于25°C培养2 h后加入终浓度为0.025 mmol·L^(-1)的IPTG诱导48 h,此条件下发酵所得酶活为16.72 U·mL^(-1),相比初始酶活提高了约5倍,证明β-AGA酶具有良好的工业应用潜力。

摘要： 琼胶酶是一种糖苷水解酶,能够特异性降解琼胶为琼胶寡糖。本研究从一株琼胶降解菌FG5的培养液中分离纯化得到纯净的琼胶酶并研究其酶学特性。将FG5菌株的发酵液离心后得到粗酶液,再通过超滤浓缩、透析、葡聚糖凝胶柱层析进行酶的分离纯化。收集得到葡聚糖凝胶柱层析紫外检测主峰组份,经SDS-PAGE电泳检测为单一条带蛋白质,分子量约为54 kD。酶活检测证明该蛋白具有琼脂酶活性,命名为琼胶酶FG5-A。采用单因素试验和正交试验设计对FG5-A的酶解反应条件进行优化分析。FG5-A琼胶酶活性最适条件为:pH 7.3,反应温度51°C,反应底物含量0.351%。探索了FG5-A的纯化流程,经葡聚糖凝胶柱纯化后琼胶酶活性相比发酵液提高了6.95倍,并初步优化了FG5-A琼胶酶的最适酶解条件,为高纯度琼胶酶的工业化生产和应用奠定理论与实践基础。

摘要： 利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面法,对培养基组成、培养条件对Stenotroph-omonas sp.NTa发酵产琼胶酶的影响进行分析并优化,研究该菌株发酵产酶的动态规律,并利用薄层色谱和MALDI-TOF MS进行酶解产物的鉴定.结果显示,在琼脂、酵母浸膏、CaCl2、MgSO4·7H2 O、培养基的初始pH值、装液量、接种量几个因素中,酵母浸膏和培养基初始pH值对菌株NTa产琼胶酶具有显著影响,在含有1.03％酵母浸膏、初始pH=8.0的基础发酵培养基(NaCl、KNO3、MgSO4·7H2 O、CaCl2、K2 HPO4、FeSO4·7H2 O、琼脂的质量浓度分别为50,5.0,5.0,0.2,0.1,0.02,2.0 g/L)中可获得最高的琼脂酶活力.菌株在28°C、180 r/min条件下发酵时,对数生长中后期快速合成琼胶酶.发酵48 h,琼胶酶活力高达2.688 U/mL.酶解72 h的产物分析结果显示,菌株NTa琼胶酶水解琼脂主要产生四糖.

摘要： [背景]琼胶寡糖已成为化妆品、食品、医药等领域的研究热点,而生物酶法被认为是制备琼胶寡糖的高效方法.[目的]从深海太平洋火色杆菌(Flammeovirga pacifica WPAGA1)筛选获得琼胶酶基因aga2660,对基因aga2660进行克隆转化,使其在大肠杆菌中进行表达,分析重组酶的性质以及酶解产物.[方法]采用克隆表达和镍柱纯化方法获得aga2660基因表达的纯化产物;采用薄层层析和离子色谱法分析酶解产物;5L发酵罐采用补料阶段指数流加、诱导阶段乳糖连续流加的策略进行产酶发酵条件的优化.[结果]基因aga2660是具有GH50家族典型特征的基因,酶解产物为单一的新琼二糖.最适温度为30°C,最适pH为7.0,Mn2+、Ca2+和Mg2+能促进琼胶酶Aga2660的酶活.采用发酵优化策略后的酶活达到11.81U/mL,比优化前提高了13.2倍.[结论]琼胶酶Aga2660具有良好的热、酸、碱稳定性,其酶解产物为单一的新琼二糖,这为特定聚合度琼胶寡糖的制备奠定了良好基础.

摘要： 目的:通过对琼胶降解菌FG1发酵液的分离纯化,拟获得较高纯度的琼胶酶,并探究其最适反应条件,为后续琼胶酶的工业化生产提供基础.方法:将FG1菌株的发酵液离心后得到粗酶液,再通过超滤浓缩、透析、葡聚糖凝胶柱层析进行酶的分离纯化.通过DNS法测定酶解反应产物还原糖含量从而计算得出酶活力单位,运用单因素实验和正交试验设计对单一琼胶酶组分的酶解反应条件进行优化.结果:经分离纯化紫外检测得到两个峰值产物且均具有琼胶酶活性,分别命名为FG1-A、FG1-B,酶组分A与酶组分B经PAGE电泳分别显示为两条亮带和一条亮带,酶组分A中两种蛋白质分子量分别为53.45 kD和46.85 kD,酶组分B蛋白质分子量为42.50 kD.对单一酶组分B进行反应条件优化得出其最适反应pH为6.4,最适反应温度为37°C,最适反应底物浓度为0.35％.结论:本研究利用葡聚糖凝胶柱对FG1粗酶液纯化了7.65倍,初步探讨了FG1琼胶酶的酶解条件,为最终得到高纯度的琼胶酶奠定理论与实践基础.

摘要： 根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化外切型琼胶酶AgaO的基因并人工全合成,克隆入表达载体质粒pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件即诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG终浓度,纯化重组蛋白rEAgaO,并分析其酶学性质变化.结果 表明,重组酶rEAgaO在16°C、IPTG终浓度0.1 mmol/L条件下诱导20 h时表达量最高;95％以上的重组蛋白质为水溶性表达,产量约为1432.7 mg/L,较优化前原始基因的产量提高了10.9倍;重组酶rEAgaO的最适反应温度为45°C,在低于40°C的温度下预处理2h后,仍然具有90％以上的残余活性,最适pH为7.0,在pH6.0～10.0不同缓冲体系4°C处理2h仍保留69.5％以上的活性;该酶降解琼脂糖后的最终产物经TLC分析鉴定为新琼二糖.基因密码子优化虽不改变蛋白质氨基酸序列,但可明显提高水溶性重组蛋白质的产率及酶活,对促进相关酶类的生产和应用具有借鉴意义.

摘要： The single factor test and response surface methodology were used to optimize the fermentation medium and fermentation conditions of agarase produced by marine Vibrio natriegens NTi, and the agarase activity was taken as main indicator. The results showed that α-lactose had a significant inhibitory effect on the agarase production, while ammonium ion was not conducive to cell growth and enzyme production. The optimal composition of culture medium for agarase-producing was: 3. 3 g/L agar as the sole carbon source, 6. 33 g/L yeast extract as the sole nitrogen source and 20 g/L NaCl. Meanwhile, the optimum conditions for agarase production were pH = 6. 5, inoculation amount 2％, liquid volume 32 m L, temperature 27 °C and fermentation time24 h, respectively. Under the optimum conditions, agarase activity reached 2. 81 U/m L after 24 h of fermentation and increased by 230％ compared with the activity under the initial medium and conditions.%以琼胶酶活力为主要指标,采用单因素与响应面相结合的方法,对降解琼胶的海洋弧菌NTi(Vibrio natriegens NTi)发酵产琼胶酶的摇瓶发酵培养基和发酵条件进行优化.结果表明,α-乳糖对菌株产酶具有较强的抑制作用,NH+4不利于菌株生长和产酶.培养基分别以3. 3 g/L琼脂、6. 33 g/L酵母膏为唯一碳源及氮源,添加20 g/L的Na Cl,发酵海洋弧菌V. natriegens NTi产琼胶酶的效果最佳.发酵过程中的p H值、接种量、装液量、温度、发酵时间最优值分别为6. 5、2％、32 m L、27°C和24 h.优化后,该菌产琼胶酶活力达到2. 81 U/m L,比优化前增加了230％.

摘要： 琼胶是存在于红藻细胞壁多糖间的粘性多糖,是目前世界上应用最广泛的三大海藻胶之一.琼胶酶(Agarase)是可催化水解琼胶的一类多糖降解酶的总称,在海水养殖业、食品、医药、分子生物学研究等方面中具有非常重要的应用价值.本课题从不同环境中筛选得到40株产琼胶酶微生物,从中获得16条琼胶酶基因片段,且克隆得到一条全长基因并在大肠杆菌中实现异源表达,随后对其酶学性质进行研究.具体实验结果如下：rn 从南日岛鲍鱼养殖场、广西红树林及舟山群岛等地采集的样品中筛选得到40株产琼胶酶微生物;通过形态观察和分子生物学鉴定，这些产酶菌株主要分布在Pseudoalteromonas sp.,Vibiro sp.以及Streptomyces sp.等种属中。rn 设计6对简并引物从25株产琼胶酶菌株中扩增得到16条不同的琼胶酶基因片段。其中包括9条GH50的琼胶酶基因片段，7条GH 16的琼胶酶基因片段;从中选取1条来源于Vibirosp.ZC-1的GH50琼胶酶基因片段序列用于扩增全长基因。利用TAIL-PCR的方法扩增得到Vibrio sp. ZC-1来源的琼胶酶基因，该基因全长2853bp，编码950个氨基酸，其中1-25位氨基酸为预测的信号肽。rn 成功构建了表达载体pET-agaZC-1，并在大肠杆菌BL21中实现了重组表达。利用亲和层析法纯化重组酶rAgaZC-1，并对其酶学性质进行研究，结果表明:其最适反应pH为7.0,在pH6.0-8.0的范围内稳定;最适反应温度为40°C,45°C时该酶不稳定，处理10min以上就完全失活，而低于35°C时则比较稳定;Ca2+、Mg2+,β-ME对该酶活力具有明显的促进作用。酶的动力学研究表明，rAgaZC-1对琼脂底物的Km、 Vmax和kcat,分别为2.428mg/mL,36.90μmol/(mg·min)和62.847s-1。底物特异性研究表明该酶对琼胶底物具有很强的专一性，其降解琼胶的主要产物是新琼二糖和新琼四糖。rn 本课题通过从不同环境中筛选产琼胶酶微生物，并进行基因克隆表达以及酶学特性的研究，旨在寻找新的琼胶酶基因和为琼胶酶的开发应用奠定基础。

摘要： 琼胶酶是一类能够降解琼胶,生成琼胶寡糖的糖苷水解酶.它降解琼胶产生的琼胶寡糖,具有多种生理活性,在食品、药物、化妆品等领域具有广泛的应用前景.rn 本课题从实验室保藏的海洋来源菌株中筛选到产琼胶酶菌株BY、BN,并结合形态学鉴定和16S rRNA分析,确定菌株BY为弧菌(Vibrio sp.),菌株BN为产微球茎菌(Microbulbifer sp.).菌株BY、BN产琼胶酶活性分析表明:菌株BY的产酶最适温度和pH分别为50°C和6.0;菌株BN产琼胶酶的最适温度为40°C,最适pH为6.0.rn 利用Touch down PCR与染色体步移技术相结合的方法，从菌株BY的基因组中克隆得到新的琼胶酶基因Vibrio sp.BY，该基因全长2232bp，编码744个氨基酸，理论分子量为85.4kD，构建重组表达载体pET22a-Vibrio sp.BY，并成功在E.coli BL21(DE3)诱导表达，DNS法测得重组琼胶酶活力为71.73 U/mL。酶学性质研究表明该重组琼胶酶最适反应温度和pH分别为50°C和7.0，在温度30-50°C及pH5.0-7.0条件下较稳定。Na+、K+、Mg2+、Ca2+等金属离子对重组琼胶酶具有促进作用，Zn2+、Fe2+、Mn2+、SDS、EDTA等对重组琼胶酶具有抑制作用。rn PCR扩增获得菌株BN的琼胶酶基因N3，该基因全长924bp，编码308个氨基酸，理论分子量为34.3 kD。构建重组表达载体pET28a-N3，并在E.coli BL21(DE3)中实现了异源表达，DNS法测得重组琼胶酶活力为228.3U/mL，是原始菌株BN琼胶酶活力的3.04倍。对重组琼胶酶的诱导条件进行优化，优化后的诱导条件为:超声波破碎时间15min、诱导时间16h、诱导温度30°C,IPTG终浓度1mM，是优化前的1.35倍。通过镍离子亲和层析，对重组琼胶酶进行分离纯化，得到电泳纯的重组蛋白，比酶活为700.59 U/mg。该重组琼胶酶的酶学性质研究表明，最适温度及最适pH分别为50°C,pH6.0，具有较好的热稳定性和pH稳定性。Na+,K+,Mg2+金属离子对重组琼胶酶具有促进作用，Ca2+，Zn2+,Fe2+,Mn2+,SDS,EDTA等对重组琼胶酶具有抑制作用。动力学方程研究表明，重组酶的Vm值为10.82umoL/min/mL，Km值为13.41mg/mL。该重组琼胶酶的降解产物以二糖和四糖为主。

摘要： 通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱对AgarivoransalbusYKW-34产琼胶酶进行分离纯化,并对其酶学性质和降解产物进行研究.离子交换色谱表明,A.albusYKW-34能产生两种琼胶酶,AgaA34和AgaB34.AgaA34进一步通过凝胶过滤色谱得以纯化.SDS-PAGE和凝胶过滤色谱表明此酶由单一肽链组成,分子量为50kDa.纯化的回收率为30％,纯化倍数为10倍.AgaA34的酶学性质分析表明,此酶的最适pH为8.0,在pH6.0-11.0稳定;最适温度为40°C,在温度≤50°C时稳定.MALDI-TOF MS和13C NMR分析表明AgaA34的琼胶酶解产物为75mo1％新琼二糖和25mo1％新琼四糖.薄层层析色谱表明此酶能将新琼四糖降解为新琼二糖.

摘要： 本实验室通过对海洋细菌A.agarilytica ZC1菌株进行基因组精细图测序，研究β-琼胶酶(M672)的基因，将其克隆到表达载体pET-32a(+)中，并转入大肠杆菌Rossetta中进行表达，纯化与测定其酶活性质。结果表明:M672的基因长度为2067bp, Blastp相似性为41%，推测属于GH16水解家族。该酶的最适pH为7，且在pH5-8中具有较高的酶活性;最适反应温度为25°C，在20-40°C中酶活性较高;金属离子Na+,K+对该酶活性影响不大，而Cuz+,Znz+,Mgz+对其活性有较大的抑制作用;p-Me,SDS和Urea对该酶有不同程度的抑制作用;该酶的酶解产物主要是四糖、六糖与八糖。本文通过研究重组酶M672的酶学性质证明该酶在室温中就能获得较高的降解效率，可望用于制备琼胶寡糖。

摘要： 本实验室通过对海洋细菌A.agarilytica ZC1菌株进行基因组精细图测序，研究β-琼胶酶(M672)的基因，将其克隆到表达载体pET-32a(+)中，并转入大肠杆菌Rossetta中进行表达，纯化与测定其酶活性质。结果表明：M672的基因长度为2067bp，Blastp相似性为41%，推测属于GH16水解家族。本文通过研究重组酶M672的酶学性质证明该酶在室温中就能获得较高的降解效率，可望用于制备琼胶寡糖。

摘要： 目的 从海水中分离活性较高的琼胶酶产生菌，以制备琼胶酶用于琼胶寡糖的生产，琼胶寡糖具有多种生物活性，在食品、化妆、医药等行业有广阔的应用前景。方法以琼 胶为唯一碳源，用稀释涂布平板法进行分离，平板透明圈法进行初筛，摇瓶培养法进行复 筛，改进的DNS 比色法进行酶活力的测定。结果从海水中分离筛选到18株琼胶降解菌 株，经复筛得到一株产酶活力较高的海洋细菌HS0326-601，并对该菌株进行了初步鉴定，结果表明其为革兰氏阴性细菌，菌体呈短杆状。结论鉴于该菌株生长速度快，通过对其进 一步的诱变和发酵条件优化，有望成为高产琼胶酶产生菌，从而为琼胶酶、琼胶寡糖的深 入研究和开发应用奠定基础。

摘要： 本实验从海水中分离活性较高的琼胶酶产生菌,以制备琼胶酶用于琼胶寡糖的生产。在实验中,以琼胶为唯一碳源,用稀释涂布平板法进行分离,平板透明圈法进行初筛,摇瓶培养法进行复筛,改进的DNS比色法进行酶活力的测定。由此,从海水中分离筛选到18株琼胶降解菌株,经复筛得到一株产酶活力较高的海洋细菌HS0326-601,并对该菌株进行了初步鉴定,结果表明其为革兰氏阴性细菌,菌体呈短杆状。鉴于该菌株生长速度快,通过对其进一步的诱变和发酵条件优化,有望成为高产琼胶酶产生菌,从而为琼胶酶、琼胶寡糖的深入研究和开发应用奠定基础。

摘要： 本文从青岛近海红藻中筛选分离得到一株酶活力较高的琼胶酶产生菌,对该菌株的形态特征和生理特征进行了鉴定.结果表明,该菌株属于假单胞菌属,定名为Pseudomonassp.AT-22.在此基础上,对该菌株生长和发酵产酶特性进行了研究.

摘要： 从海洋Pseudoalteromonassp.CY24中克隆到一个新β-琼胶酶基因agaA,它的开放阅读框架为1359bp,编码的蛋白质理论分子量为48.4KD,等电点为535,蛋白质的N末端含有一段长度为23个氨基酸的信号肽.将agaA基因在大肠杆菌BL21(DE3)/pET24a系统中进行了重组表达,重组蛋白可分泌至发酵上清液,经镍离子柱纯化后达到了电泳纯.酶学性质研究发现其最适反应pH为6.5,最适反应温度为40°C.通过多序列比对发现AgaA中有两段保守区(EIDVLEVYG和VDWIRVYK),推测可能与催化功能有关.分别对第一段保守区的两个谷氨酸(E147和E152)进行定点突变,突变后酶活丧失,表明这两个位点对催化活性具有重要的作用.琼胶酶AgaA归属于糖水解酶的16家族,是一种内切酶,水解琼脂糖链的β-1,4糖苷键,生成新琼六糖和新琼四糖作为主要降解产物.

摘要： 本发明涉及琼胶寡糖水解酶及一种通过利用该琼胶寡糖水解酶从琼脂糖中生成3,6‑脱水‑L‑半乳糖和半乳糖的方法。更具体地，通过使用对琼脂三糖具有水解活性的β‑琼胶寡糖水解酶，提高来自琼脂糖中的3,6‑脱水‑L‑半乳糖和半乳糖的产率，即糖化率。

摘要： 本发明涉及琼胶寡糖水解酶及一种通过利用该琼胶寡糖水解酶从琼脂糖中生成3,6‑脱水‑L‑半乳糖和半乳糖的方法。更具体地，通过使用对琼脂三糖具有水解活性的β‑琼胶寡糖水解酶，提高来自琼脂糖中的3,6‑脱水‑L‑半乳糖和半乳糖的产率，即糖化率。

摘要： 本发明公开了一种α‑琼胶酶基因及其编码酶的应用，属于微生物工程技术领域。本发明提供了一种具有特定碱基序列的α‑琼胶酶，并且成功的采用食品安全菌株枯草芽孢杆菌对α‑琼胶酶进行异源表达，本发明的方法安全、高效，可应用于食品、药品的生产中，并且，采用本发明的方法，所表达的α‑琼胶酶粗酶液的催化活力可高达523.1U/mg。本发明提供的α‑琼胶酶具有较好的比酶活与热稳定性，且底物转化率也较高；本发明的α‑琼胶酶的琼胶转化率和产物纯度较高，经计算得到转化率可达约53％，有利于工业生产。

摘要： 本发明属于酶保存技术领域，具体涉及一种琼胶酶冻干保护剂及琼胶酶的保存方法。所述琼胶酶冻干保护剂含有琼胶寡糖1～10w/v％、缓冲溶液0.1～0.5mol/L、非还原性二糖1～5w/v％、可溶性淀粉1～10w/v％、糊精1～10w/v％、甘油5～20w/v％、甘露醇0.5～5w/v％且余量为水。本发明提供的琼胶酶冻干保护剂将琼胶寡糖作为主要组分并配以特定含量的缓冲溶液、非还原性二糖、可溶性淀粉、糊精、甘油和甘露醇一起使用，由此所得酶冻干保护剂可以使得琼胶酶的蛋白结构免遭破坏，能够最大限定地保持琼胶酶的理化组成和生物活性，从而实现对琼胶酶的良好保护。

摘要： 本发明公开了一种高效固定β‑琼胶酶的方法及其应用于琼胶低聚糖的制备，属于酶工程领域。本发明提供的方法为将β‑琼胶酶与一步法制备的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒混合孵育得到固定化β‑琼胶酶。本发明提供的高效固定化β‑琼胶酶不仅能提高β‑琼胶酶的催化活性及热稳定性，而且容易从酶解体系中分离出来，实现了β‑琼胶酶的重复利用，降低了生产成本。将所述固定化β‑琼胶酶应用于琼胶低聚糖的制备中，大大降低了酶制剂的原料成本，具有较高的工业化应用价值。

摘要： 本发明公开了一种固定化琼胶酶制备琼胶寡糖的方法，步骤如下：首先利用共沉淀法制备出油酸包埋的磁性Fe

摘要： 本发明公开了一种α‑琼胶酶基因及其编码酶的应用，属于微生物工程技术领域。本发明提供了一种具有特定碱基序列的α‑琼胶酶，并且成功的采用食品安全菌株枯草芽孢杆菌对α‑琼胶酶进行异源表达，本发明的方法安全、高效，可应用于食品、药品的生产中，并且，采用本发明的方法，所表达的α‑琼胶酶粗酶液的催化活力可高达523.1U/mg。本发明提供的α‑琼胶酶具有较好的比酶活与热稳定性，且底物转化率也较高；本发明的α‑琼胶酶的琼胶转化率和产物纯度较高，经计算得到转化率可达约53％，有利于工业生产。

摘要： 本发明公开了一种产琼胶酶、淀粉酶和木聚糖酶的纤维弧菌，该菌为革兰氏阴性菌，菌体呈弧形，极生鞭毛，好氧，G+C含量（mol%）为49.98%；最适生长温度为30~37°C，最适生长pH为6.0~9.0；具有氧化酶、过氧化氢酶、淀粉酶、琼胶酶、纤维素酶、木聚糖酶活性，无明胶酶、脲酶和酯酶活性；经菌种鉴定，该菌属于纤维弧菌（

摘要： 本发明属于酶工程技术领域，公开了一种琼胶酶、编码基因、重组载体和宿主细胞及其应用以及新琼寡糖及其制备方法。该琼胶酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；用于编码上述琼胶酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明的琼胶酶催化琼胶酶解产物为新琼寡糖，在50°C下保温24h，酶活力仍保持在95％以上，在pH为5.0‑10.0范围内保温24h，残余酶活力仍在85％以上，具有优越的稳定特性；以凝胶强度为1300g/cm2的琼胶为底物时，琼胶酶粗酶液的酶活力为446U/mL，具有高酶活力。本发明提供的琼胶酶具有良好的实用性，为新琼寡糖的工业化生产提供了优异的酶资源，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种琼胶酶突变体及其编码基因，含有该编码基因的重组载体和细胞，以及该琼胶酶突变体的制备方法与应用。通过理性设计对野生琼胶酶点突变获得一种琼胶酶突变体E122W，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该琼胶酶突变体的酶活力和热稳定均有明显提高，可以高效催化降解琼胶制备琼胶寡糖，且琼胶寡糖收率较高，满足工业化生产需要，为琼胶酶在生物化工、食品、医药等领域的研究应用和琼胶寡糖的工业化生产奠定基础。