免疫电镜

摘要： 纹状体内的parvalbumin阳性(Parv^(+))神经元接受大量来自皮质和丘脑的谷氨酸能兴奋性突触输入,但这些突触的形态和功能尚不完全清楚。我们利用免疫电镜、脑内电刺激和免疫荧光技术探查大鼠纹状体内皮质和丘脑来源谷氨酸能轴突末梢与Parv^(+)神经元形成突触连接的形态和功能特征。结果表明:①Parv^(+)胞体和树突均接受大量非对称突触输入,Parv^(+)轴突末梢可与Parv^(-)神经元的胞体、树突和树突棘形成非对称突触;②电刺激皮质诱导纹状体内Parv^(+)神经元表达c-Jun的比例明显高于刺激丘脑;③纹状体内大部分谷氨酸能末梢与Parv^(-)结构形成突触连接,仅少部分与Parv+结构形成突触。

摘要： 目的 建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的提取方法 ,了解和掌握HAV的免疫学性质.方法利用人胚肺二倍体细胞培养并收获HAV,用层析纯化等方法提取HAV,然后通过抗原检测、免疫电镜检查以及小鼠免疫试验对HAV的免疫学性质进行检测和分析.结果 利用层析纯化等方法提取HAV,抗原回收率达84％以上,蛋白去除率达97％以上,电镜及免疫电镜检查可以观测到典型的HAV以及HAV+IgM抗原抗体免疫复合物和HAV+IgG抗原抗体免疫复合物,免疫小鼠抗体阳转率为100％.结论 利用层析纯化等方法可以对HAV进行有效提取,提取的HAV具有良好的免疫反应性和免疫原性.

摘要： Objective:To observe the effect of electro-acupuncture on the level of Aβ1-42 in hippocampus and blood brain barrier (BBB), and behavior of APP/PS1 transgenic mice to explore whether electro-acupuncture can improve the ability of Aβ clearance to treat Alzheimer's disease (AD). Methods:24 APP/PS1 transgenic mice (6 months, male) were randomly divided into the electro-acupuncture group and the model group, another 12 C57BL/6 mice were used as the blank control. The electro-acupuncture group was treated with electro-needling GV20 and KI1. After the treatment, Morris water maze was used for behavioral testing to observe the learning and memory abilities in the mice; the expression level of Aβ1-42 in hippocampus was determined by ELISA; the expression of Aβ1-42 in the micro-vascular wall of hippocampus was observed by colloidal gold immuno-electron microscopy. Results:Morris water maze test showed that the escape latency of the model group increased; the times of site crossings, percentage of swimming time and swimming distance were lowered in the model group than those in the blank control group(P ＜0. 01, P ＜0. 05); whereas, the escape latency in the electro-acupuncture group was obviously decreased (P ＜0. 01). The ELISA result showed that the expression of Aβ1-42 in hippocampus was decreased significantly in the electro-acupuncture group compared to that in the model group (P ＜0. 01). The immuno-electron microscopy result showed that the colloidal gold particles in the hippocampal microvascular wall were decreased in the electro-acupuncture group compared to those in the model group. Conclusion:Electro-acupuncture can improve the spatial cognitive ability and reduce Aβ1-42 level of hippocampus in APP/PS1 transgenic mice, which mechanism may be related to the improvement of Aβ clearance ability of BBB.%目的:通过观察电针对APP/PS1转基因小鼠海马、血脑屏障Aβ及行为学的影响,探讨电针能否通过改善血脑屏障Aβ清除能力来治疗阿尔茨海默病.方法:将24只6月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机均分为电针治疗组与模型组,正常对照组选取12只同性别的C57BL/6野生背景鼠.电针治疗组电针"百会""涌泉"穴,治疗后采用Morris水迷宫进行行为学检测,观察各组小鼠学习记忆能力;用ELISA测定Aβ1-42在海马的表达水平;使用胶体金免疫电镜观察Aβ1-42在海马脑微血管壁的表达.结果:Morris水迷宫试验显示模型组与正常组比较,逃避潜伏时上升,穿越平台位置次数及平台象限游泳时间、路程所占总时间和总路程百分比下降(P＜0. 01或P＜0. 05),电针治疗组逃避潜伏时较模型组下降(P＜0. 01);ELISA检测海马Aβ1-42结果显示电针治疗组较模型组明显降低(P＜0. 01);免疫电镜结果显示电针治疗组脑微血管壁胶体金颗粒较模型组减少.结论:电针治疗可改善APP/PS1转基因小鼠空间认知能力,降低海马Aβ1-42水平,其机制可能与改善血脑屏障Aβ清除能力有关.

摘要： 目的:观察窖蛋白-1(Caveolin-1)在小鼠不同发育时期成釉细胞中的超微结构定位.方法:取胚胎发育第16.5天、第18.5天和出生第2.0天的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙牙胚,HE染色、透射电镜观察不同发育时期成釉细胞的组织学形态及超微结构变化,免疫电镜技术观察Caveolin-1在成釉细胞中的超微结构定位.结果:在各个发育阶段的成釉细胞细胞膜上均可见形态类似于胞膜窖的凹陷状结构,随着成釉细胞逐渐发育成熟,细胞器数量逐渐增多;在不同发育阶段的成釉细胞中均可见Caveolin-1免疫阳性颗粒,在成熟成釉细胞的内质网腔中也可检测到Caveolin-1免疫阳性颗粒.结论:在小鼠下颌第一磨牙牙胚成釉细胞中,Caveolin-1定位于成釉细胞的细胞膜及成熟成釉细胞的内质网中.

摘要： 为了研究噬菌体Bp7蛋白gp38在噬菌体吸附宿主菌过程中的作用,PCR扩增gp38基因,对gp38蛋白氨基酸序列特征进行分析和同源性比对,构建重组表达质粒pColdTF-gp38,在E.coli BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot检测重组蛋白gp38的表达;亲和层析法纯化蛋白,制备gp38多克隆抗体.免疫电镜检测gp38在噬菌体Bp7表面的定位,蛋白竞争试验和抗体阻断试验测定gp38及其抗体对噬菌体Bp7吸附效率的影响.序列分析结果表明,gp38蛋白氨基酸序列与T4噬菌体无同源性,与噬菌体T2、T6有同源性,C端序列保守区与高变区间隔排列,呈现马赛克特征;构建的重组质粒pColdTF-gp38在E.coli BL21实现可溶性表达,制备的gp38多克隆抗体效价达1∶16;免疫电镜检测结果表明,gp38蛋白抗体能够与长尾丝结合,引起噬菌体Bp7的聚集;蛋白竞争试验和抗体阻断试验结果表明gp38蛋白及其抗体均能完全抑制噬菌体Bp7对宿主菌E.coliK12的吸附.以上研究结果表明,gp38是噬菌体Bp7的尾丝蛋白,位于长尾丝末端,作为受体识别蛋白在噬菌体Bp7吸附宿主菌过程中具有关键作用,这为进一步阐明宽宿主谱噬菌体Bp7识别受体的机制提供了理论基础.

摘要： 单克隆免疫球蛋白相关肾小管间质疾病主要指单克隆轻链(κ,λ)所导致的肾小管间质病变,包括轻链相关肾小管损伤及肾小管坏死、轻链相关肾小管间质性肾炎、轻链近端肾小管病及轻链管型肾病等四类疾病.临床上以肾功能不全为主要特征,可伴有小分子为主的蛋白尿;病理以单克隆轻链在肾小管上皮胞浆、肾小管基底膜及管型沉积为共同特征;电镜与免疫电镜证实单克隆轻链在上皮胞质溶酶体及其结晶等包涵体内的蓄积,具有重要的诊断价值.轻链导致不同的病理损伤类型,可能与轻链的负荷量、轻链的特定基因亚型及其不同的结构变异有关,详细的发病机制有待进一步研究.

摘要： 3岁的林林腹泻已经2天了，每天稀便4～5次，并伴有呕吐、发烧。外婆变着花样给她煮粥，她也没胃口。爸妈带他去医院，化验了好几次大便常规，仅检验出有少数白细胞。后来，医生给林林做了大便免疫电镜和聚合酶链检测，才确定林林是诺如病毒感染性腹泻。医生追问林林父母家庭成员的发病史，原来林林的爸爸出差时可能没吃好，出现轻微腹泻，回家没两天，林林就病了……

摘要： 目的：观察大鼠心肌细胞超微结构中色素上皮衍生因子受体（PEDF‐R）的分布。方法健康SD大鼠10只随机均分为实验组和对照组。取大鼠心脏，采用包埋后免疫金标记电镜技术制作心肌切片。实验组切片分别加入一抗（PEDF‐R抗体）和胶体金颗粒标记的二抗；对照组切片分别加入未加一抗的抗体孵育液和胶体金颗粒标记的二抗。透射电子显微镜下观察切片中胶体金颗粒的分布。结果实验组胶体金颗粒在大鼠心肌细胞的细胞质、细胞核中散在分布，线粒体中较多，细胞膜处呈间隔分布。对照组大鼠心肌细胞均未见胶体金颗粒。结论 PEDF‐R在大鼠心肌细胞广泛分布。%Objective To observe the distribution of pigment epithelium‐derived factor receptor (PEDF‐R) on ultrastructural level in rat myocardial cells .Methods Ten healthy SD rat were equally randomized into two groups .The rat hearts were taken out for making sample sections by post‐embedding colloidal gold‐labeled immunoelectron microscopy method .The PEDF‐R antibodies and colloidal gold‐labeled secondary antibodies were added into antibody incubation fluid in group A ,which were not in group B .The distribution of colloidal gold particles in myocardial sections were observed by transmission electron microscope .Results The colloidal gold particles were scatteredly distributed in cytoplasm and nucleus ,more distributed in mitochondria ,and interruptedly distributed in cytomembrane of myocardial cells in group A ,which were not found in those of myocardial cells in group B .Conclusion PEDF‐R is widely distributed in rat myocardial cells .

摘要： 自从1941年Coons等创建荧光免疫细胞化学技术以来,免疫细胞化学在此基础上不断创新,发展迅速。1968年中根一穗(Nakane)创建了酶标记抗体技术；1974年,Sternberger创建了过氧化物酶一抗过氧化物酶(PAP)技术；1975年Koehler和Milsteln发明单克隆抗体,为免疫细胞化学提供了大批不同的特异性抗体。1981年,许世明等建立了亲和免疫细胞化学,即亲和素和生物素(ABC)法。免疫金银细胞化学和免疫电镜、原位PCR技术的建立和应用,使免疫细胞化学检测技术向基因及其表达产物的系统检测技术方面有了新的发展,已经形成分子免疫细胞(组织)化学。本文介绍了免疫组化抗体的发展以及非生物素检测系统多聚鳌合物酶法的问世，探讨了免疫组化方法的标准化和自动化。

摘要： 免疫电镜技术是利用抗原抗体特异结合的原理,在超微结构水平定位细胞表面及细胞内部抗原位置的技术。随着生物医学和分子生物学的迅猛发展,免疫电镜技术作为定位大分子蛋白的重要手段,应用前景日趋广泛,已成为大分子蛋白质研究领域不可或缺的重要手段之一。包埋后免疫胶体金电镜样本制备技术是将组织包埋后在超薄切片上进行免疫标记定位,是目前免疫电镜技术中应用较普遍的方法，本文总结了12例包埋后免疫胶体金电镜样本制备技术应用实例,比较了环氧树脂618、EPON812和LRWhite低温包埋剂的标记效果,以及实验中的一些体会。

摘要： 本文采用碳化二亚胺法合成了苦皮藤素V的人工抗原KPTV-BSA、KPTV-KLH和KPTV-OVA。文章以KPTV-KLH为免疫抗原,采用杂交瘤技术获得3株KPTV的单克隆抗体细胞株。胶体金免疫电镜观察结果表明苦皮藤素V在粘虫中肠细胞的线粒体和内质网膜系统有结合,初步推测在粘虫中肠可能存在KPTV的特异性靶标。

摘要： 本文研究神经再生过程中雪旺氏细胞的功能和作用,观察间充质干细胞在体内的存活和功能情况.

摘要： 本发明提供一种用于冷冻电镜的免疫金标记蛋白质方法，包括如下步骤：1）利用多聚‑L‑赖氨酸溶液和PBS分别对冷冻电镜的格栅进行预处理；2）将格栅正面朝上放置在培养皿中，滴取样品到格栅上，静置孵育后用PBS洗脱；3）在培养皿中加入封闭剂，静置孵育后用PBS洗脱；4）在培养皿中加入一抗，即目标蛋白质的特异性抗体，静置孵育后用PBS洗脱；5）在培养皿中加入二抗，即根据一抗种属选取的免疫金抗体，静置孵育后用PBS洗脱；6）取出格栅并用冷冻电镜成像，分析图像数据得到目标蛋白质结构。本发明结合免疫标记蛋白质技术和冷冻电镜断层扫描技术的优点，实现在冷冻电镜成像中观察到目标蛋白质的同时进行结构解析。

摘要： 本发明公开了一种免疫电镜免疫反应盒，涉及免疫电镜实验器材技术领域，包括固定底座、水浴盆和反应盒本体，水浴盆固定设置在固定底座顶部，水浴盆底部的中心位置处固定设置有驱动电机，反应盒本体安装在驱动电机的输出轴上，反应盒本体内固定设置有分隔板，反应盒本体顶部安装有密封盖，水浴盆内开设有注水槽，注水槽底部固定设置有电加热棒，注水槽一侧固定设置有温度计，固定底座一侧通过电源线设置有电源插头，固定底座一侧外壁上固定设置有开关板，开关板分别与驱动电机和电加热棒电性连接，本发明结构合理且新颖好，能够为反应盒本体提供离心、水浴环境，同时恒温控制时能够保持内部密封，实用性较强。

摘要： 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。

摘要： 本发明涉及一种高灵敏的磁珠分选联合胶体金标记的外泌体免疫电镜方法，具体包括以下步骤：(1)制备生物素化的抗体；(2)纯化目标亚型外泌体；(3)免疫标记。与现有技术相比，本发明克服了目前免疫电镜技术检测外泌体时纯度低、效率低的弊端，保留了其分辨率高的优势，适合检测位于生物医学标本来源外泌体的微量抗原的检测，阳性信号得率高，便于判断。

摘要： 本发明公开了一种超敏的免疫电镜标记方法，包括以下步骤：把生物样品待测抗原用体积百分比为0.1-2.5%的戊二醛溶液和质量百分比为1.5-5%多聚甲醛溶液固定后，经过脱水程序后，经过亲水性树脂包埋，切成超薄切片后，分别用特定的第一抗体标记生物样品待测抗原，再以吸附超微金颗粒的第二抗体标记第一抗体，然后利用银加强放大试剂在超微金颗粒周围形成直径较大的银颗粒，然后在电镜下即可敏感地检测待测抗原在生物样品中的表位。本发明具有灵敏高的优势，兼有阳性信号颗粒相对均匀，便于研判的优势，也同时具有可以检测生物样品内部抗原的优势。本发明适合检测位于生物医学标本内部的微量抗原的检测。

摘要： 本实用新型涉及免疫反应检测技术领域，且公开了一种免疫电镜免疫反应盒，包括盒体，所述盒体的顶部设置有上盖，所述上盖的中心处固定安装有观察窗，所述上盖的上表面固定有两个把手，两个所述把手对称分布在观察窗的两侧，所述盒体下表面固定有漏液斗，所述漏液斗的底端固定有出液管，所述盒体的下表面固定有四个支撑柱，且每个所述支撑柱的底端均固定有底板；所述盒体的内底壁上固定有石蜡层，所述石蜡层的中心处固定有安装壳，所述安装壳的内部固定安装有电机。该免疫电镜免疫反应盒，通过在盒体的内部设置有电机、第一转轴、分隔梗和转动机构等结构，能够对放置槽进行灵活分组，且操作方便，便于使用。

摘要： 本实用新型涉及一种免疫电镜免疫反应盒，包括盒体和反应座，所述盒体内底部安装有储水室，所述盒体内表面靠近顶部安装有支撑座，所述支撑座内表面通过连接板活动的安装有反应座，所述反应座顶部靠近外表面设有反应槽，所述反应槽内表面靠近顶部套接有橡胶塞，所述储水室顶部中间通过轴承安装有旋转管，所述旋转管两侧均安装有支撑架，所述支撑架顶部连接于反应座两侧。本实用新型通过储水室、加热器、进水管和回水管，对反应座的反应温度进行精确控制，解决了现有的免疫反应盒，多依靠外部环境温度进行反应温度控制，无法精确控制免疫反应温度，影响检测精度的问题，提高了反应温度控制精度，从而提高了免疫电镜的检测精度。

摘要： 本实用新型公开了一种免疫电镜免疫反应盒，属于智能手表设备领域，包括上下两端面敞口的透明筒体，所述透明筒体的内部通过分隔板分隔成上腔体和下腔体，所述透明筒体的下端外侧壁上固定有对称设置的支撑脚，所述分隔板的顶端覆盖有白石蜡层，且白石蜡层的表面等间距开设有呈环形分布的用于盛放溶液的凹槽，所述分隔板的底端开设有与凹槽一一对应且对齐的凹口，所述白石蜡层、分隔板的内部分别开设有相互连通的连通槽。本实用新型通过气缸的工作对活塞板的位置进行升降移动，通过活塞板与透明筒体之间围成容腔的大小，对该容腔内部的压强进行实时的调节，以此来完成对凹槽内部废液的排出工作。

摘要： 本实用新型公开了一种免疫电镜免疫反应盒，包括顶部设置开口的下盒体和卡装在下盒体顶部的上盒体，所述下盒体的底部内壁上设有石蜡层，且下盒体的底部内壁上还呈环状焊接有多个第一卡座，所述第一卡座的顶部延伸至石蜡层的上方，且第一卡座的顶部开设有第一卡槽，所述石蜡层的顶部中央位置竖直固定有固定柱，且固定柱的四周开设有多个矩形槽，多个矩形槽和多个第一卡座一一对应设置，且矩形槽远离下盒体侧壁的一侧内壁上设有转动杆，所述矩形槽的一侧内壁通过转动杆转动连接有设置为矩形结构的分隔梗。本实用新型经济实用，免疫电镜免疫反应盒可以对石蜡层上的放置容器可以进行灵活分组，极大的满足了实验人员的实际需要。

摘要： 本实用新型公开了一种免疫电镜免疫反应盒，盒体(2)的顶端敞口，所述的盒体(2)的内底部平铺有一层白石蜡(3)，在所述的白石蜡(3)上设有至少一个凹槽和一个水槽，每一个所述的凹槽对应设有一个标签纸(5)，所述的盒体(2)上端设有一个与所述的盒体(2)严密吻合的盒盖(1)。本实用新型是一种在进行组织超薄切片的免疫反应时操作简便、所有反应过程集成在一个封闭盒中、易于避免外界污染且一次可批量进行的免疫电镜免疫反应盒。