分子鉴别

摘要： 目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier 5.0软件设计可扩增不同大小DNA片段且无交叉反应的物种特异性引物,特异性扩增后,将扩增条带克隆后测序,与GenBank数据库已登记序列比对。建立并优化多重PCR,评价其特异性和灵敏度,并采用该方法鉴别27份模拟混合掺假样品。结果:建立的猪、牛和熊胆粉DNA提取方法可于2 h之内完成操作,DNA纯度分别为2.04、1.69和1.70,浓度分别为158.63、189.34和148.55 mg·L^(-1)。设计可扩增出猪、牛和熊的物种特异性引物。测序结果与GenBank数据库已登记序列同源性达99%以上。PCR体系各物种引物特异性强,无非特异扩增。应用于三重PCR体系中的引物互不干扰,检测灵敏度高,3种靶标样品任意一种DNA浓度降至1 mg·L^(-1)时均可成功检测。27份人工模拟熊胆粉不同物种及不同比例掺假样品的检测结果与预设混合情况相符,盲法随机抽样重复检测5次,结果稳定。结论:成功建立可通过一次实验同时鉴别猪、牛和熊胆粉的方法,具有简便、灵敏及高效的特点,可应用于熊胆粉及其常见动物源性掺伪的鉴别。

摘要： 金花茶组是山茶属中罕有的花色金黄的品种,目前已经鉴别至少28种以上,种间鉴别困难,本研究拟通过已有的金花茶组品种的条形码序列建立其品种之间的分子鉴别方法.从GenBank核酸数据库下载到薄叶金花茶、金花茶、显脉金花茶、凹脉金花茶、柠檬金花茶、小花金花茶、小瓣金花茶、东兴金花茶与毛瓣金花茶等的trnl-trnF、rpl 16、psbA-tmH序列.序列聚类分析结果显示,trnl-trnF序列最多只能在这些金花茶样本中区分出显脉金花茶.rp116系列可准确的鉴别出毛瓣金花茶.psbA-tmH序列能准确鉴别毛瓣金花茶.

摘要： 目的 基于ITS序列建立北柴胡掺伪藏柴胡的分子鉴别方法.方法 收集北柴胡、藏柴胡样品,提取基因组DNA,用ITS通用引物进行测序,通过DNAMAN软件进行序列比对,根据藏柴胡特异性位点用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物,并优化特异性PCR反应条件.结果 在位点特异性PCR反应条件考查中,退火温度为65°C(20 s)、引物量为0.4 μL、循环次数为30时特异性最佳,该方法适用于不同DNA聚合酶且重现性较好,掺伪检出限为1％.结论 该研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,仅藏柴胡可以扩增出425 bp大小的条带,北柴胡则不能扩增出条带,能够鉴别北柴胡中掺伪藏柴胡.

摘要： [目的]针对杨树种间杂交子代苗期形态不易区分的问题,利用美洲黑杨和小叶杨物种特异性InDel位点开发标记对种间杂交子代进行快速鉴别,为黑杨派和青杨派种间杂交子代鉴定、分子标记辅助育种等研究提供重要的参考技术.[方法]以美洲黑杨、小叶杨及其杂交子代为试验材料,根据美洲黑杨和小叶杨重测序结果分析物种特异性InDel位点并设计引物,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对引物进行通用性和物种特异性检测,用筛选出的物种特异的引物,对种间杂交子代的真实性进行鉴别.[结果]分别将10个个体的美洲黑杨和小叶杨重测序序列比对到美洲黑杨基因组,共获得长度差异大于5 bp的InDel位点359733个,其中种内特异、种间存在差异的InDel位点18418个.采用Primer3在美洲黑杨基因组中的17956个位点成功设计引物.在不同染色体共选取10对引物,采用SeqHunter2将引物序列比对到小叶杨基因组,共有6对引物在小叶杨中是通用的.采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,发现引物Psi2-1和Psi13-14在美洲黑杨和小叶杨中存在差异.利用美洲黑杨和小叶杨自然群体各50个个体对上述2个引物进行检测,发现引物Psi2-1在美洲黑杨中扩增出128 bp的特异性产物,在小叶杨中扩增出139 bp的特异性产物,在真实的种间杂交子代中扩增出128 bp和139 bp 2条产物;引物Psi13-14在美洲黑杨中扩增出132 bp的特异性产物,在小叶杨中扩增出144 bp的特异性产物,在真实的种间杂交子代中扩增出132 bp和144 bp 2条产物.2对引物对美洲黑杨与小叶杨种间杂交子代鉴别准确率达100％.[结论]获得了美洲黑杨和小叶杨物种特异性InDel标记2对,上述标记可以有效地用于美洲黑杨与小叶杨种间杂交子代的真实性鉴别.

摘要： 榧树Torreya grandis品种的准确鉴别对于新品种的选育与知识产权保护具有重要意义.为了建立高效鉴别榧树品种的分子技术手段,以9个榧树品种(品系)作为研究材料,通过对前期'细榧'品种的转录组测序数据进行SSR标记筛选以获得可稳定扩增的品种(品系)间多态性SSR标记,从而揭示9个榧树品种(品系)间的基因型差异;进一步利用多重荧光SSR标记技术将多个多态性SSR标记整合,基于基因型组合的差异来高效鉴别榧树品种(品系).结果表明,9个榧树品种(品系)的基因组DNA在SSR位点Tg_U7和Tg_U734可扩增出4种不同的基因型组合,分别为289/295和192/222、277/295和192/222、277/289/295和192/216/222以及277/295和192/216,可一次性将榧树中的'玉山鱼榧'磐大榧'(品种)和大丁香(品系)鉴别出来.本研究结果表明基于多重荧光SSR标记技术的基因型组合差异可作为榧树品种(品系)特异性的SSR指纹,为榧树材料的鉴别提供了高效便捷的分子技术手段.

摘要： 目的 探讨肿节风SCAR分子标记克隆与验证.方法 从随机引物库中挑选出45条10碱基的随机引物,采用RAPD方法对4种不同产地肿节风基因组DNA进行扩增,从中筛选出S41号引物扩增的RAPD分子标记,克隆测序后,经比对确定其同源序列获得SCAR分子标记,设计引物,对9种不同产地的肿节风和3种同科混淆品鸡爪兰、及己与金粟兰进行特异PCR扩增,验证引物特异性.结果 RAPD扩增获得中药肿节风的SCAR分子鉴定标记,据此设计出鉴定肿节风的特异引物,PCR扩增显示肿节风在500 bp左右处均出现有条带,与预期扩增长度基本相符,而3种同科植物均未出现条带.结论 本研究获得肿节风SCAR分子标记,并设计出特异引物,可用于鉴别该药材与其混淆品.

摘要： 针对羊肚菌品种,特别是产业化培植品种,建立快速准确的品种鉴定方法.通过对来源确切的梯棱羊肚菌样品及同属5种其他羊肚菌进行ITS测序,并结合网络数据库中的梯棱羊肚菌ITS序列进行分析,获得梯棱羊肚菌的特异性鉴别引物.进一步对分子鉴别实验条件进行考察,以确定最终实验条件.通过对梯棱羊肚菌及羊肚菌近缘品种的分析,发现只有梯棱羊肚菌呈现特征电泳条带.表明该研究设计的特异性引物和优化的实验方法,可用于梯棱羊肚菌菌种的快速鉴定及产品的真伪鉴别.

摘要： 目的 针对目前细茎类石斛的植物分类较为困难,商品药材来源鉴别难度大,建立3种常用细茎类石斛的分子生物学鉴别方法.方法 采用PCR扩增的方法对3种细茎类石斛样品进行ITS序列的扩增并经单向测序,进行聚类、亲缘关系分析.结果 9个石斛样本明显分为三类,罗河石斛(1、2、3)聚为一类,铁皮石斛(4、5、6)聚为一类,细茎石斛(7、8、9)聚为一类.细茎石斛与铁皮石斛的亲缘关系较近,与罗河石斛的亲缘关系较远,罗河石斛与铁皮石斛的亲缘关系最远.结论 以ITS序列为DNA条形码可以快速准确地鉴别3种细茎类石斛来源,为解决细茎类石斛的分类异议提供参考,并保障石斛药材的来源准确.

摘要： 目的:分析中药菟丝子及其杂质的核基因组ITS2序列,对中药菟丝子正品基原进行分子鉴别.方法:采用DNA条形码技术,对中药材菟丝子及其常见混伪品的基原植物及药材共79份样品进行研究.通过菟丝子及其杂质的ITS2序列,MEGA6.0软件分析,寻找差异位点,构建系统发育树.结果:利用ITS2序列构建的邻接(NJ)树表明菟丝子、南方菟丝子及其混伪品可明显区分,并呈现出良好的单系性.结论:DNA条形码可对中药菟丝子及其混伪品准确鉴定,有助于菟丝子药材的监管及市场流通.

摘要： 综述了近年来针对泽泻的分子鉴别、成分提取和质量控制、特征图谱及基因组表达等方面的相关研究工作,简述了泽泻鉴定分析的发展方向和挑战.

摘要： 樱花是世界著名的观赏植物,在园林上有极大的应用价值.晚樱品种大都引自日本,品种繁多,且表型具有很强的可塑性,用传统的形态学方法很难准确鉴别.本研究从全国范围内收集20个在园林中广泛栽培与应用的晚樱品种,基于SAPD和SRAP二种分子标记对20个樱花品种的基因组DNA扩增,分别筛选获得了33个nSAPD多态片段和13个SRAP多态性片段.通过对这些多态性片段的进一步克隆测序,成功将18个多态性片段转化为了稳定可靠的特异SCAR标记,可作为晚樱品种的特异DNA指纹,方便用于品种间的相互鉴别.本研究首次将SCAR分子标记用于樱花品种资源的研究上,不仅有助于樱花品种分类鉴定系统的建立,也为樱属植物资源的进一步研究提供了分子依据.

摘要： 目的:鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体.方法:基于对核糖体基因内转录间隔区ITS的分析,采用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性法(PCR-RFLP);同时聚合酶链式反应(PCR)扩增线粒体基因COI.结果:冬虫夏草ITS的PCR产物能够被XhoI切割成两个片段,全部扩增得到COI条带.5种人工发酵菌丝体,除百令胶囊外,余4种均不能够被XhoI切开;5种人工发酵菌丝体均未扩增出COI条带.结论:结合PCR-RFLP以及COI的PCR扩增,可鉴别冬虫夏草与人工发酵菌丝体.

摘要： 铁皮石斛是我国非常名贵的传统药材,本研究通过分析铁皮石斛及其常见混伪品的ITS2序列差异,建立铁皮石斛药材真伪的快速鉴别方法.运用CodonCode Aligner V3.0软件对测序峰图进行校对拼接,基于隐马尔可夫模型的(hidden Markov model,HMMer)注释方法获得ITS2序列,采用MEGA5.0软件进行序列比对,种内种间距离计算及UPGMA聚类树构建,应用Koetschan 等建立的ITS2数据库及网站预测ITS2二级结构.结果显示铁皮石斛极其混淆品ITS2之间存在明显差异,所有铁皮石斛样品在UPGMA树上单独聚为一类.研究表明ITS2序列可以作为DNA条形码用于铁皮石斛及其混伪品的快速分子鉴别.

摘要： 采用ISSR分子标记技术,对四川茶树资源的遗传多态性、亲缘关系和分子鉴别进行了研究.结果表明,14个引物在37份茶树资源中得到2441个ISSR位点,平均174个位点/引物,66个位点/资源.在所获得的154条可重现谱带中,146条是多态的,多态性程度达95.2％;引物的多态性信息指数(PIC)为0.82～0.95,平均为0.89;遗传相似系数在0.519～0.851之间,平均为0.689;UPGMA聚类结果将37份资源分为2个大类和1个独立类,其中第1、2类分别包含5个原产地的品种,说明我国各地之间基因交流较为频繁.应用ISSR12引物扩增的37种谱带类型或ISSR11、ISSR13和ISSR14三个引物带型的组合,都可以鉴别所有的37份茶树资源.

摘要： 本实验利用SSR和CAPS分子标记技术研究了24份番茄(Solanum lycopersicum L.)育种材料的遗传多样性。2009年8月播种，出苗后用CTAB小量法提取基因组DNA。利用1对SSR和10对CAPS引物进行分子标记。用NTSYS软件分析计算出材料间的相似系数和遗传距离并做出分子标记聚类图。生长表型以历年调查数据为准，分别调查植株生长类型、果形、果色、果实大小、苗期叶色、茎毛多少、长势、果实耐贮性等8个性状。试验结果表明，11对特异引物对24份番茄材料进行分析，均具有多态性。

摘要： 为了阐明水稻白叶枯病菌北方菌株的毒性组成，本研究对2008年和2009年从辽宁、吉林、河北、山东4省采集的103个菌株进行了DNA指纹图谱的PCR鉴定，并利用一套标准通用的水稻抗白叶枯病基因(Xa)近等基因系作为鉴别品种，进行了致病性测定。结果表明，用3种不同引物对测定菌株基因组进行PCR扩增，均可以鉴别出与Xoo代表菌株完全一致、而与水稻条斑病菌明显不同的DNA指纹图谱。本研究结果明确了北方稻区Xoo的田间流行菌株及其分布、揭示了其毒性组成，有利于指导北方稻区水稻品种的合理布局和有效使用。

摘要： 本文应用6条ISSR引物对石蒜和忽地笑11个种群共279个样本进行试验,欲从分子水平上研究其遗传差异,并对其遗传多样性和遗传结构等方面进行研究.6条引物共扩增出62个条带,其中多样性条带为60条,多态性可达96.8％.其中有5条引物可以扩增出鉴别石蒜和忽地笑的特异性扩增条带,共计11条,其中4条为石蒜种群特有,7条为忽地笑种群特有,从而将二者鉴别出来.另外石蒜和忽地笑种群多态位点百分率(PPB)分别为95.2％和58.1％,Nei's基因多样性(H)分别为0.297和0.157,Shannon多样性指数(I)分别为0.454和0.248.石蒜和忽地笑种群的基因分化系数Gst分别为0.374和0.457,说明其天然种群的大部分变异(62.6％和54.3％)存在于种群内.石蒜和忽地笑种群的基因流Nm分别为0.836和0.593,比较小.UPGMA聚类结果显示,8个石蒜种群聚为一类,然后与3个忽地笑种群最后聚在一起.

摘要： 目的：从分子水平实现对铁皮石斛及其混淆品快速准确的鉴别.rn 方法：通过对铁皮石斛及其混淆品的rDNA ITS区序列进行分析,计算遗传距离,并采用邻接法构建NJ系统树.rn 结果：表明8个来自不同产区的铁皮石斛rDNA ITS区序列全长636 bp,铁皮石斛及其6个常见混淆品药材ITS序列长度范围为636 bp～641 bp,其中ITS区(不包括5.8S)片段长度为483bp,信息位点60个(12.4％),变异位点185个(38.3％),各样品间遗传距离范围为1.108％～2.594％,NJ系统树也表明了铁皮石斛与其混淆品的亲缘关系及差异.rn 结论：ITS序列可对铁皮石斛及其混淆品进行快速简便的鉴别,通过ITS序列可以分析正品与混淆品间的亲缘关系.

摘要： 本发明公开了一组用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的分子标记，上游引物GLMI001‑F、GLMI002‑F及GLMI003‑F核苷酸序列分别如SEQ.ID No1、SEQ.ID No3、SEQ.ID No5所示，下游引物GLMI001‑R、GLMI002‑R及GLMI003‑R核苷酸序列分别如SEQ.ID No2、SEQ.ID No4及SEQ.ID No6所示。本特异性分子标记GLMI001、GLMI002和GLMI003用于紫灵芝和赤灵芝菌种的鉴定检测，规范灵芝菌种市场，检测掺假行为，保证灵芝药材安全；还可用于灵芝产品的检测，对于保证灵芝种质纯度，提高生产效率，具有很大的应用潜力和较好的经济价值。

摘要： 本发明公开了鉴别或辅助鉴别大豆油分含量的分子标记、其特异性引物对及其在大豆育种中的应用。实验证明，无论是针对HJ117×Hobbit的RIL群体、HJ17×中黄13的RIL群体、HJ117×齐黄34的RIL群体，还是针对HJ117×徐豆16的RIL群体，使用本发明的分子标记和引物对分型，和油分含量测定结果对应的可解释的遗传变异率在27.98％‑57.34％，说明Chr15_15_3281983_A_G是与大豆油分含量相关的SNP分子标记，可用于鉴定或辅助鉴定大豆油分含量，可用于大豆油分含量品种的筛选，可用于大豆分子标记辅助育种，可用于高油分大豆的选育和培育。

摘要： 本发明公开了鉴别或辅助鉴别大豆蛋白含量的分子标记、其特异性引物对及其在大豆育种中的应用。实验证明，无论是针对HJ117×Hobbit的RIL群体、HJ17×中黄13的RIL群体、HJ117×齐黄34的RIL群体，还是针对HJ117×徐豆16的RIL群体，使用本发明的分子标记和引物对分型，和蛋白含量测定结果对应的可解释的遗传变异率在41.87％‑66.31％，说明Chr20_25619957_A_G是与大豆蛋白含量相关的SNP分子标记，可用于鉴定或辅助鉴定大豆蛋白含量，可用于大豆蛋白含量品种的筛选，可用于大豆分子标记辅助育种，可用于高蛋白大豆的选育和培育。

摘要： 本发明涉及一种鉴别湿地松和火炬松的探针组、分子标记、试剂盒及其鉴别方法，属于生物分子育种技术领域。本发明提供了一种鉴别湿地松和火炬松的探针组，是由基于火炬松参考基因组、湿地松三代全长转录组及湿地松和火炬松SNPs数据集，开发得到的26个液相探针组成。利用本发明所述的液相探针组获得了55个SNPs标记，这些标记的最小等位基因频率大于0.05，检出率为100％，基于55个SNPs标记的PCA和系统进化分析可以成功的将湿地松和火炬松区分开，经试验证实，利用本发明所述液相探针组可以高效、快速的完成湿地松和火炬松物种的鉴别。

摘要： 本发明提供一种用于鉴别梅花鹿四川亚种的分子标记、鉴别方法及应用。针对现有技术尚无可用于鉴别梅花鹿四川亚种的分子标记及鉴别方法，本发明对梅花鹿分子标记进行了深入研究，得到了可用于鉴别梅花鹿四川亚种的SNP分子标记，所述分子标记包括5个SNP标记位点。该5个SNP标记位于ATP6基因片段上，具有特异性强、稳定性好的特点。本发明还提供1对可用于鉴别梅花鹿四川亚种SNP标记引物，并建立了准确可靠的检测方法。本发明弥补了本领域目前尚无鉴别梅花鹿四川亚种的分子标记检测技术的不足，实现了梅花鹿亚种的精准鉴别，对梅花鹿资源的保护和管理方面具有重要理论和应用价值。

摘要： 本发明提供一种用于鉴别梅花鹿台湾亚种的分子标记、鉴别方法及应用。所述分子标记包括2个SNP标记位点，该2个SNP标记位点均位于梅花鹿mtDNA基因组COX2基因572bp片段上；标记S‑1在第101bp，台湾亚种中为碱基A，非台湾亚种为碱基G；标记S‑2位于第点。本发明提供了准确可靠的检测方法，弥补了本领域目前尚无鉴别梅花鹿台湾亚种的分子标记检测技术的不足，实现了梅花鹿亚种的精准鉴别，对梅花鹿资源的保护和管理方面具有重要理论和应用价值。

摘要： 本发明提供一种用于鉴别梅花鹿华南亚种的分子标记、鉴别方法及应用，属于分子生物学领域。本发明用于鉴别梅花鹿华南亚种的分子标记，包括2个SNP标记位点，位于COX1基因371bp片段上，所述2个SNP位点在梅花鹿华南亚种中均为C；在非梅花鹿华南亚种中分别为A、T。本发明还提供用于鉴别梅花鹿华南亚种的分子标记引物及鉴定方法，鉴定准确率100％。本发明弥补了本领域目前尚无鉴别梅花鹿华南亚种的分子标记检测技术的不足，实现了梅花鹿亚种的精准鉴别，对梅花鹿资源的保护和管理方面具有重要理论和应用价值。

摘要： 本发明提供一种用于鉴别梅花鹿北海道亚种的分子标记、鉴别方法及应用，可对梅花鹿北海道亚种的进行精准鉴别。本发明的4个SNP位点S‑1～S‑4在梅花鹿北海道亚种中分别为G、G、A、C；在非梅花鹿北海道亚种中分别为A、A、G、T。本发明还提供了用于鉴别梅花鹿北海道亚种的方法：用引物对1‑4中的任意一对或多对进行PCR扩增、测序，根据SNP标记位点碱基即可鉴别待测样品是否为梅花鹿北海道亚种。本发明的这4个SNP位点，位于4个基因片段上，具有特异性强、稳定性好的特点。鉴定检测准确率100％。本发明为梅花鹿资源的亚种鉴别提供了稳定、可靠的分子检测方法。对梅花鹿的DNA指纹图谱绘制和野生亚种保护管理等方面具有重要理论与应用价值。

摘要： 本发明提供了一种鉴别哈氏本尼登虫和鰤本尼登虫的分子标记引物对、试剂盒及鉴别方法，涉及分子生物技术领域。本发明所述引物对基于哈氏本尼登虫和鰤本尼登虫的mtDNA COI基因201bp序列差异设计，包括CSF和CSR，其中CSF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，CSR的核苷酸序列如SEQ I D NO.2所示，其结果稳定，可重复性强。利用本发明所述引物对、试剂盒和鉴别方法，有助于解决海洋鱼类寄生虫种类混杂等问题，为重要经济鱼类养殖、病害防控和资源保护、合理利用以及生物多样性研究提供技术支撑。

摘要： 本发明公开了鉴别或辅助鉴别小麦SDS‑沉降值的分子标记、其专用引物组合及其在小麦育种中的应用。实验证明，利用该分子标记鉴别或辅助鉴别出的高SDS‑沉降值单倍型其SDS‑沉降值极显著高于低SDS‑沉降值单倍型，以此辅助在小麦育种早代、不同群体中快速筛选SDS‑沉降值较高的小麦株系，可提高育种选择效率，加速小麦品质育种进程。