高通量测序技术

摘要： 为了研究赤水晒醋封醅暴晒过程细菌群落结构及理化指标的变化,进一步了解赤水晒醋的发酵规律及发酵机理。本研究检测了赤水晒醋封醅暴晒的11个月内醋醅的理化指标变化,采用高通量测序技术检测了其中细菌群落结构变化,并分析了细菌属与理化指标之间的相关性。结果表明,赤水晒醋封醅暴晒的11个月内含水量、还原糖含量和pH逐渐下降,而总酸、乳酸和氨基酸态氮含量逐渐上升。在属水平上,醋杆菌属(Acetobacter)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、农杆菌属(Agrobacterium)、未注释到的细菌属(Not_Assigned)、柠檬乳杆菌属(Limosilactobacillus)、黄单胞菌属(Xanthomonas)和其它菌属(Others)的相对丰度随着封醅暴晒过程的进行逐渐下降,醋酸乳杆菌属(Acetilactobacillus)的相对丰度逐渐上升,乳杆菌属(Lactobacillus)的相对丰度先上升后下降。主成分分析将1~5月和7~11月的醋醅样品分别归为2个大类。冗余分析表明醋酸乳杆菌属(Acetilactobacillus)与总酸、乳酸和氨基酸态氮含量呈正相关;而鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、未注释到的细菌属(Not_Assigned)、未分类的红螺菌属(Rhodospirillaceae_unclassified)、醋杆菌属(Acetobacter)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、农杆菌属(Agrobacterium)、未分类的链球菌属(Streptophyta_unclassified)、乳杆菌属(Lactobacillus)和柠檬乳杆菌属(Limosilactobacillus)等主要与pH、含水量和还原糖含量呈正相关,且与总酸、乳酸含量呈负相关;而其它菌属(Others)与这几个理化指标的相关性较弱。本研究进一步解析了赤水晒醋的发酵机理,为优化赤水晒醋生产工艺提供了参考。

摘要： 慢性牙周炎的发病率高,是失牙的主要原因之一。在长期慢性炎症环境中,受复杂的免疫调控而形成的反应性软组织,在患牙拔除后常残留于拔牙窝内,以往主张将其彻底清除。近期有研究者对反应性软组织的临床实践做出了新尝试,提示保留反应性软组织对于口腔中软组织和硬组织的再生有益。此外,研究表明间充质干细胞可成功地从反应性软组织中分离,说明反应性软组织在组织再生治疗中具有巨大潜力。尽管反应性软组织有望在口腔软、硬组织再生方面发挥积极作用,但目前尚无文献说明反应性软组织中的间充质干细胞的数量、成分、保留的具体标准。未来研究应着重于探究如何利用反应性软组织中间充质干细胞进行组织再生治疗,并形成保留反应性软组织的具体标准。

摘要： 为探讨生物有机肥稻田水稻不同生长时期根际土壤细菌群落动态变化及其和环境因子的相关性,利用高通量测序技术对生物有机肥稻田水稻分蘖期、拔节期、抽穗期和成熟期4个时期的根际土壤细菌进行高通量测序及分析。结果显示,测序共获得404 183个有效序列,可分为55个门,171个纲,385个目,603个科,1 010个属,2 139个种。α多样性分析显示,ACE多样性指数在生长时期呈现先下降后上升的趋势,分蘖期和拔节期的香农多样性指数均与成熟期差异显著。4个生长时期的优势菌门相似,优势菌门(相对丰度>10%)有放线菌门(Actinobacteriota)、绿弯菌门(Chloroflexi)、变形菌门(Proteobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteriota)。β多样性分析显示,4个生长时期的细菌群落结构具有一定的差异性,成熟期和其余3个时期的群落结构差异显著。冗余分析(RDA)表明,pH值是影响细菌群落的第1因子,主要菌门都与pH值呈正相关,其中绿弯菌门受pH值影响最大。相对丰度值最高的放线菌门则受含量影响最大。在生物有机肥稻田中,随着水稻的生长发育,根际土壤的细菌群落结构会随着土壤理化因子发生一定变化,说明土壤理化因子是影响细菌群落的主要因素。

摘要： 采用投加悬浮填料方法和高通量测序技术研究新疆干旱寒冷地区污水处理厂的硝化、反硝化速率及生物膜菌群。结果表明,环境温度与水温具有良好的相关性;悬浮填料对氨氮和NO_(3)^(-)-N均有降解作用,平均去除率分别为75.72%和81.42%;悬浮填料填充率在20%~30%、曝气量在6.0 m^(3)/h~6.5 m^(3)/h时,总氮平均去除率为75%。变形菌门和拟杆菌门为生物膜的优势菌,绿弯菌门和黄杆菌门与污泥膨胀有关,装甲菌门是导致脱氮不佳的细菌。

摘要： 隐纹花松鼠(Tamiops swinhoei)广布于我国南方各省且十分常见,但对其食性与生态研究却罕有报道,为进一步开展其觅食生态学研究,通过高通量测序技术测定贵州荔波茂兰喀斯特地区的隐纹花松鼠个体样本的胃容物。结果表明:从茂兰喀斯特地区的隐纹花松鼠胃容物中鉴定出植物7门73科109属,动物8门82科120属。其中,植物主要包括壳斗科(Fagaceae)、樟科(Lauraceae)、平藓科(Neckeraceae)、山茱萸科(Cornaceae)、胡桃科(Juglandaceae)和毛茛科(Ranunculaceae)等物种,动物主要包括刺蛾科(Limacodidae)、蝽科(Pentatomidae)、匍蠊科(Blaberidae)和步行虫科(Carabidae)等物种。研究结果可为隐纹花松鼠及其同域分布物种的保护与管理提供依据。

摘要： 反刍动物肠道菌群多样性对动物肉品质有重要的影响。采用高通量测序技术分析饲粮中添加乳酸菌对苏尼特羊肠道菌群组成及肉品质的影响。选取3月龄健康苏尼特羊12只,分成2组,一组饲喂基础饲粮,另一组在基础饲粮中添加0.5%的乳酸菌,饲养90 d后屠宰。结果表明:在乳酸菌组肠道中拟杆菌门及疣微菌门丰度占比均显著高于对照组(P<0.05),毛螺菌科NK3A20类群及另枝菌属丰度占比均显著低于对照组(P<0.05);在乳酸菌组背最长肌中红度值a^(*)、亮度值L^(*)显著高于对照组(P<0.05),风味物质如烃类、酮类、酯类等显著高于对照组(P<0.05),氨基酸以及不饱和脂肪酸含量均显著高于对照组(P<0.05),剪切力值则显著低于对照组(P<0.05)。整体上,饲粮添加乳酸菌可以优化苏尼特羊的肠道菌群结构组成,促进机体营养代谢,进而改善肉品质。

摘要： 为了研究赤水晒醋醋酸发酵过程原核微生物群落结构的变化情况,采用高通量测序技术分析了醋醅中原核微生物群落的组成,检测了醋酸发酵过程基础理化指标(总酸、乙醇、还原糖和乳酸)的变化,并分析了理化因子与原核微生物属之间的相关性。结果表明,赤水晒醋醋酸发酵过程中醋酸乳杆菌属(Acetilactobacillus)和葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter)的相对丰度随着醋酸发酵的进行由0.11%和低于0.01%上升至36.779%和4.760%,乳杆菌属(Lactobacillus)和醋杆菌属(Acetobacter)的相对丰度随着醋酸发酵的进行先上升后下降;蓝藻细菌属(Acaryochloris)、未分类的红螺菌属(Rhodospirillaceae_nclassified)、农杆菌属(Agrobacterium)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)等原核微生物属的相对丰度随着醋酸发酵的进行呈下降趋势。总酸由0.61%(以乙酸计)上升至5.35%(以乙酸计),乙醇由5.78%下降至0.33%;还原糖和乳酸含量均呈先上升后下降的趋势。主坐标分析将醋醅样品按照发酵天数聚在一起,并随着发酵的进行在第一主坐标轴上移动;聚类分析将发酵过程分为前期(第0~3天)、中期(第6~12天)和末期(第15天)这3个阶段;相关性分析表明乳杆菌属(Lactobacillus)主要与乳酸和还原糖含量呈正相关,醋杆菌属(Acetobacter)、柠檬乳杆菌属(Limosilactobacillus)、葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter)和醋酸乳杆菌属(Acetilactobacillus)主要与酸度呈正相关,而农杆菌属(Agrobacterium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)和甲基杆菌属(Methylobacterium)等菌属主要与酸度呈负相关,且与乙醇含量呈正相关。该研究对揭示赤水晒醋的发酵规律和解析赤水晒醋的发酵机理具有重要意义。

摘要： 利用高通量测序技术对衡阳和韶关地区的自然发酵辣椒微生物多样性进行解析,并结合基于标记基因序列来预测功能丰度(phylogenetic investigation of communities by reconstruction of unobserved states 2,PICRUSt2)软件预测菌群功能差异。结果表明,相比韶关地区,衡阳地区自然发酵辣椒具有更多的OTUs数目和更高的多样性。在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)是衡阳和韶关地区自然发酵辣椒的优势菌门,其两者相对丰度之和大于94%。在属水平上,Rosenbergiella(42.59%~48.77%)、假单胞菌属(Pseudomonas,7.36%~10.24%)和泛菌属(Pantoea,4.94%~6.99%)是衡阳地区自然发酵辣椒的优势菌属;韶关地区自然发酵辣椒中葡萄球菌属的相对丰度最高,可达76.15%~81.67%。PICRUSt2预测结果表明,衡阳和韶关地区自然发酵辣椒在20条二级代谢通路上存在显著差异(P<0.05),包括碳水化合物代谢、脂质代谢、核苷酸代谢和氨基酸代谢等。本研究扩大了对自然发酵辣椒微生物多样性的了解,同时为适合辣椒发酵微生物的筛选提供理论基础。

摘要： 目的通过高通量测序分析食物蛋白诱导性直肠结肠炎(food protein-induced proctocolitis,FPIP)患儿肠道菌群特征。方法选取2018年10月至2021年2月遵义医科大学第三附属医院门诊就诊的小于6月龄纯母乳喂养发生FPIP患儿31例纳入FPIP组,正常健康婴儿31例纳入健康对照组;采集两组粪便样本提取DNA并通过PCR扩增,采用高通量测序分析粪便样品中的16S r DNA V3~V4片段并进行相关生物信息学分析。结果肠道菌群多样性分析示FPIP组菌群多样性Shannon指数低于健康对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);菌群丰富度Chao指数高于健康对照组(P<0.01)。在门水平上,两组菌群组成均主要由厚壁菌门、放线菌门、变形菌门、拟杆菌门4个菌门构成;与健康对照组相比,FPIP组中放线菌门构成比显著降低(P<0.001),变形菌门构成比明显增加(P<0.05)。在属水平上,FPIP组主要由大肠埃希氏菌属、梭状芽孢杆菌属、肠球菌属、克雷伯氏菌属和双歧杆菌属组成;健康对照组主要由双歧杆菌属、链球菌属组成;与健康对照组相比,FPIP组中双歧杆菌属和瘤胃球菌属构成比明显降低(P<0.05),梭状芽孢杆菌属和志贺氏菌属构成比明显增加(P<0.05)。结论FPIP组与健康对照组相比,肠道菌群多样性下降,丰富度升高;在菌群组成结构上某些细菌菌属存在差异。提示在FPIP的发生发展过程中,肠道微生物群在属水平上的构成改变可能起到了重要作用。

摘要： 针对台州湾水平流人工湿地处理河水时脱氮能力低且不稳定的情况,采用高通量测序技术进行脱氮微生物群落的结构解析,以便从微生物的群落结构和空间分布中寻求影响脱氮能力的因素。研究结果表明,水平流湿地中存在硝化和反硝化菌群,且硝化菌属主要为Nitrospira,反硝化菌属主要为Bacillus和Paracoccus。与脱氮系统较好的微生物群落相比,各菌群比例较为偏低。水平流湿地中水生植物根系分布对固定生物膜起着至关重要的作用,且在水流方向上依次呈硝化和反硝化菌群的分布。水平流湿地中填料表层较中下层的微生物菌群种类更为丰富,当填料深度大于1.0 m时,填料中微生物种群丰度小于1%。

摘要： 本研究利用高通量测序技术，分析再生水补入的景观娱乐湖泊中微生物群落结构的变化，并识别、筛查潜在细菌病原菌多样性和分布特征，从而探讨再生水补入对微生物群落结构和细菌病原菌存在特性的影响，以及群落结构与病原菌变化的异同性，以期为保障再生水应用于景观娱乐水体的安全性提供理论支持，有效预防疾病传播。本研究选取北京某公园湖泊为研究对象，该湖除生态、景观作用外，主要有划船、喂鱼、喷泉等娱乐功能，每年春季补水。除冰冻期外，分别在补水期和非补水期每月连续采集表层湖水样品，监测常规理化指标并选取理化性质有代表性的样品进行微生物分析。采用高通量测序技术分析微生物群落结构，后对其潜在人类细菌病原菌进行数据筛选与分析。本研究比较了再生水与补水期湖水、补水期与非补水期湖水的理化性质和微生物群落结构差异，结果表明再生水补入对湖水水质产生显著影响，主要以硝酸盐氮的形式增加了湖水氮元素的浓度和负荷;再生水的微生物群落也直接影响了湖水中微生物群落结构。进一步分析湖水理化性质与微生物群落结构的关系发现，水中氮、碳营养元素浓度的改变与群落组成的改变有关，因此群落结构可能也受到湖水营养元素的间接影响而变化。对人类细菌病原菌的筛选分析发现，在该湖水中检出20种潜在病原菌属，其中8个在几乎所有样品中检出，包括不动杆菌属Acinetobacter,气单胞菌属Aeromonas,弓形杆菌属Arcobacter、军团杆菌属Legionella、分枝杆菌属Mycobacterium、假单胞菌属Pseudomonas、梭菌属CIostridium,希瓦氏菌属Shewanella。比较再生水与湖水、补水期与非补水期湖水中潜在人类细菌病原菌属水平的丰度变化，结果表明再生水对湖水中检出的几种潜在病原菌属不存在显著影响，但该景观娱乐水体中的病原菌风险仍然值得进一步研究。

摘要： 目的：利用高通量测序技术对心肌病和离子通道病患者进行基因筛查,以期对临床诊治高危遗传心脏病提供参考依据.方法：对48例门诊心肌病和离子通道病患者以及子女进行高通量测序,男34例,女14例,年龄11～74岁,平均(39.0±16.3)岁.其中28例临床诊断为肥厚性心肌病(HCM),7例为原发型扩张性心肌病(DCM),3例为LVNC,1例为ARVC;离子通道疾病4人,1例临床诊断BrS,1例为LQTS,2例为室性心动过速伴晕厥(VT);5例基因检测阳性的患者子女.收集临床资料包括性别、年龄、家族史、症状、心超和心电图等资料.结果：28例HCM患者中有12例检测出基因突变,HCM基因突变的总检出率为42.8％,基因突变分别涉及:TNNT2突变2例占16.7％;MYH7突变3例占25％;MYBPC3突变7例占58.3％;PRKAG2突变2例占16.7％;其中2例患者双基因突变,阳性率为7.1％.7例DCM患者中有1例检测出SCN5AR1193Q基因突变,致病基因检出的阳性率为14.3％.3例LVNC和1例ARVC都没有检出基因突变.1例BrS患者检出突变基因SCN5AR1193Q,在等待检验结果的时候发生猝死;1例LQTS和2例VT伴晕厥的患者没有检出基因的突变.5例基因检测阳性的子女中,4例检出与其父/母相同的基因突变,基因突变的阳性率达80％.结论：高通量测序技术准确、高效,对于心肌病和离子通道病致病基因的检测阳性率高,对于遗传性心脏病的发生、发展以及转归提供了有利的依据.

摘要： 目的：发现骨肉瘤中突变的新基因,以及通过检测化疗药物相关基因指导骨肉瘤的个体化治疗.方法：采用第二代高通量测序技术对23例骨肉瘤手术样本进行化疗相关药物靶基因检测,并对其中10例样本的339个基因进行突变检测.系统分析后,发现骨肉瘤相关的特异性突变以及患者对化疗药物的敏感程度.结果：确定了85个未报道过的基因突变位点,其中发现ALK基因的第19个外显子和第29个外显子在骨肉瘤中存在共同突变位点;NOTCH基因与患者血清碱性磷酸酶水平相关.另外,药敏结果显示:23例骨肉瘤患者均对异环磷酰胺敏感,铂类敏感率为39.1％,阿霉素敏感率为21.7％.在术前化疗中使用患者敏感的化疗药物时,化疗有效率会显著提高.结论：ALK基因与NOTCH基因可能均为致癌基因,在不同方面参与骨肉瘤的病理过程.骨肉瘤个体化治疗可能成为提高化疗效果并最终提高骨肉瘤生存率的关键.

摘要： 海带属藻类是一类最重要的海洋藻类,主要分布于寒温带地区的沿海水域.厚叶解曼藻(Saccharina sculpera)作为棕色藻门、褐藻纲、海带目、海带属中的一个重要物种,因其丰富的褐藻多糖硫酸酯含量在工业领域吸引了大量的关注.为深入了解其遗传信息,本研究应用新一代高通量测序技术Illumina Solexa HiSeq2000 平台对厚叶解曼藻的转录组进行测序,获得超过2.5 Gb的原始数据.结合SOAP de novo 拼接聚类等分析软件,最终获得了86,846 条scaffolds,平均长度480 个碱基.其中包含23,591个独立基因(unigene).对转录本序列的GO(gene ontology)注释、COG(clusters of orthologous groups)分类以及代谢通路分析也显示厚叶解曼藻中的许多基因具有重要的蛋白功能.绝大部分的Unigenes(81.73％)显示出和长囊水云(Ectocarpus siliculosus)基因具直系同源.利用转录组数据中的线粒体序列进行系统进化分析确认了S.sculpera 在海带属中的分类地位.同时在转录组数据中还发现了大批参与重要代谢通路功能基因,如褐藻多糖硫酸酯生物合成,碘摄取,细胞通讯和碳固定途径.Solexa高通量测序技术作为藻类功能基因组研究的重要手段,为发掘厚叶解曼藻功能基因发挥了重要作用,也为在分子水平上研究厚叶解曼藻的生物学特性和经济价值提供了更翔实的基因信息.

摘要： 本研究以广西富含Fe、Mn元素的典型水稻田及甘蔗田中不同土壤深度的Fe-Mn结核为研究对象,以16S rRNA为目标分子,应用454高通量测序技术结合常规理化分析,结果表明:1.Fe-Mn结核对Fe元素的富集系数为周围土壤的3倍,而且主要是以游离态Fe形态存在的.2.对于Si02、A1203等与风化相关物质来说，铁锰结合的风化程度低于外围土壤。3.Fe-Mn结核中，游离态Fe作为可利用的部分，其含量与alpha微生物多样性成正相关，而高浓度Mn作为有毒物质与多样性成负相关。4.Fe-Mn结核内部与其周围土壤的微生物群落组成差异不大。

摘要： 目的：新一代测序技术又称高通量测序技术是2005年刚刚兴起并在迅速发展的一项技术,它具有成本低、速度快、通量高等特点,是对传统测序一次革命性变革.新一代测序技术仅用了短短的10年的时间里就成功地从科学研究转化为临床应用,在无创产前诊断、单基因遗传病诊断、器官移植排斥筛查以及肿瘤相关基因的检测方面发挥出巨大的应用价值.rn 方法：本文对近期新一代测序技术在肿瘤临床中的应用和研究进行了综述。rn 结果：主要包括检测胚系突变和单核甘酸多态性用于肿瘤预测预防、检测血浆中循环肿瘤DNA用于肿瘤的早诊、基于NGS的单细胞测序技术用于揭示肿瘤细胞的异质性、检测体细胞突变用于指导个体化、靶向治疗及疗效预测，同时还简要介绍了新一代测序技术在临床应用中面临的挑战。rn 结论：为新一代测序技术更好地服务于临床提供一个思路。

摘要： 获得一个物种的全基因组序列是加快对此物种了解的重要捷径.随着新一代的测序技术发展,基因组测序的成本和时间较传统技术都大大地降低,基因组学的研究也迎来了新的发展机遇.相比于传统的Sanger测序,新一代测序技术无需构建各类复杂的物理图谱和遗传图谱, 可根据基因组重复序列的的特点,构建不同插入片段的文库进行测序,整体测序深度在60x以上,保证了单碱基的准确性和基因组的完整性.基于高通量测序技术的鸟类基因组学研究有助于在分子层面上揭示许多鸟类学研究领域的关键问题,例如涉及到鸟类起源、系统分类、行为与适应性、驯化、及病毒传播等;在家禽及宠物鸟育种方面,基因组选择进一步推动了良种选育工作.迄今为止,红原鸡、火鸡、绿头鸭、鸽子、斑胸草雀、白领姬鹟、游隼、猎隼、地山雀等鸟类基因组地相继破译,为鸟类基因组学的蓬勃发展奠定了坚实基础,但相比于整个鸟纲而言,破译的鸟类仍然只是极少数,同时还有一些棘手的科学问题,需要鸟类学专家借助于一个更大的研究平台,同心协力共同解决.华大基因始终坚持以大科学项目带学科的发展战略,以探索基因组科学的新型发展道路为使命,先后启动了"千人基因组计划"、"万种微生物基因组计划"、 "千种动植物基因组计划"、"千种昆虫转录组项目"等重大科研项目,对于提升中国在基因组学、遗传资源保护、物种进化、生物多样性等领域的研究水平具有重大的意义,并将带动相关学科及产业的发展.

摘要： 21世纪以来,DNA测序技术取得革命性突破,新一代高通量测序技术将成为一种常规手段研究土壤微生物多样性,类似于目前土壤氮磷钾等营养元素的化学分析,成为土壤质量评价的常规方法.而稳定同位素核酸探针技术简称DNA/RNA-SIP(Stable Isotope Probing),通过稳定同位素示踪微生物核酸DNA/RNA,在分子水平揭示复杂环境中重要元素生态过程的微生物调控机制.本研究围绕稻田红壤甲烷的好氧氧化过程,利用新一代高通量测序技术研究土壤微生物群落整体变化规律,在DNA和RNA水平研究甲烷好氧氧化菌占土壤微生物的相对丰度变化;进一步利用稳定性同位素示踪稻田红壤甲烷好氧氧化菌的核酸DNA/RNA,揭示稻田红壤甲烷好氧氧化过程的微生物调控机制,为新一代高通量测序与稳定性同位素示踪DNA/RNA技术研究复杂环境中微生物生理生态过程的分子机制提供一定的技术参考.

摘要： 本文选取4只60日龄体重相近的健康朗德鹅公鹅，分为对照组和实验组，通过高通量测序技术，进行进行鹅肝中miRNA表达分析及靶基因预测研究，为后期研究鹅肝脏脂肪miRNA调控机制奠定了基础。

摘要： 本研究工作利用野生菌、重组大肠杆菌以及活性污泥体系对微生物转化AEI噪合成靛蓝类色素进行了解析，不仅为微生物合成靛蓝的扩大化应用奠定了理论基础，也为探索AEI噪废水的资源化研究提供了重要的信息。

摘要： 本发明提出了用于高通量测序的文库构建方法，该方法包括：(1)将至少两种DNA样品进行步骤(1‑1)至(1‑4)的操作：(1‑1)将DNA片段进行末端修复，以便获得经过末端修复的DNA片段；(1‑2)在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A，以便获得具有粘性末端A的DNA片段；(1‑3)将具有粘性末端A的DNA片段与接头相连，以便获得连接产物；(1‑4)将连接产物进行预扩增及纯化，以便得到预扩增产物；(2)将至少两种预扩增产物进行混合，并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获，以便得到目的预扩增产物；(3)将目的预扩增产物进行扩增及纯化，以便得到混合文库。本发明的文库构建方法可以有效地提高建库效率，降低建库成本，适于规模化应用。

摘要： 本发明提供了一种微量起始DNA的高通量测序文库构建方法及其所构建的高通量测序文库。该构建方法包括：对样本DNA进行物理打断，得到片段化DNA；对片段化DNA进行末端修复及加A，得到修复DNA；利用连接增强剂对修复DNA进行接头连接，得到带接头片段；以及对带接头片段进行扩增，得到高通量测序文库；连接增强剂为DMSO、乙醇、乙二醇或甘油。通过在接头连接的步骤中添加具有连接增强作用的DMSO、乙醇、乙二醇或甘油等小分子物质，利用这些小分子物质刺激连接酶的活性中心区域来增强连接活性，提高接头连接效率，使更多修复DNA片段连上接头序列，从而提高了微量起始量样本的测序成功率。

摘要： 本发明提出了用于高通量测序的文库构建方法，该方法包括：(1)将至少两种DNA样品进行步骤(1‑1)至(1‑4)的操作：(1‑1)将DNA片段进行末端修复，以便获得经过末端修复的DNA片段；(1‑2)在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A，以便获得具有粘性末端A的DNA片段；(1‑3)将具有粘性末端A的DNA片段与接头相连，以便获得连接产物；(1‑4)将连接产物进行预扩增及纯化，以便得到预扩增产物；(2)将至少两种预扩增产物进行混合，并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获，以便得到目的预扩增产物；(3)将目的预扩增产物进行扩增及纯化，以便得到混合文库。本发明的文库构建方法可以有效地提高建库效率，降低建库成本，适于规模化应用。

摘要： 本发明提供了一种微量起始DNA的高通量测序文库构建方法及其所构建的高通量测序文库。该构建方法包括：对样本DNA进行物理打断，得到片段化DNA；对片段化DNA进行末端修复及加A，得到修复DNA；利用连接增强剂对修复DNA进行接头连接，得到带接头片段；以及对带接头片段进行扩增，得到高通量测序文库；连接增强剂为DMSO、乙醇、乙二醇或甘油。通过在接头连接的步骤中添加具有连接增强作用的DMSO、乙醇、乙二醇或甘油等小分子物质，利用这些小分子物质刺激连接酶的活性中心区域来增强连接活性，提高接头连接效率，使更多修复DNA片段连上接头序列，从而提高了微量起始量样本的测序成功率。

摘要： 测定基因组序列的一种方法，其包含下述步骤：使用至少一个第一限制性核酸内切酶消化基因组，把至少一个接头连接到第一亚集的限制性片段上，使用第一引物组合选择性扩增接头连接的限制性片段的第一集合，其中第一引物在引物序列的3′末端含有具有1－10个选择性核苷酸的第一选择的序列，使用至少第二引物组合重复这些步骤，其中第二引物组合的引物含有不同的第二选择性序列，片段化扩增的接头连接的限制性片段的每一个亚集以产生测序库并确定片段的核苷酸序列，比对每个库中的片段序列以产生连接片段，对于第二和/或进一步的限制性核酸内切酶重复这些步骤，比对从每个第二和/或进一步的限制性核酸内切酶所获得的重叠群以提供基因组的序列。

摘要： 本发明涉及一种用于高通量生物测序的高通量染色平台，包括壳体和工作室，所述壳体的顶部设有进风窗，所述进风窗底部设有静电除尘室，所述静电除尘室的内侧设有静电除尘器，所述静电除尘室的底部固定连接有第一换气泵，所述第一换气泵的底部固定连接有进风管道，所述壳体的一侧设有工作室，所述工作室的两侧均设有出风窗，所述出风窗与进风管道进行固定连接，所述工作室的底部两侧均设有抽气窗。该用于高通量生物测序的高通量染色平台，通过玻璃板封闭工作室，并通过静电除尘器对工作室的进风进行除尘处理，并在第一换气泵和第二换气泵的带动下进行快速的换气工作，并通过活性炭板对排气进行充分的净化处理。

摘要： 本实用新型涉及一种用于高通量生物测序的高通量染色平台，包括壳体和工作室，所述壳体的顶部设有进风窗，所述进风窗底部设有静电除尘室，所述静电除尘室的内侧设有静电除尘器，所述静电除尘室的底部固定连接有第一换气泵，所述第一换气泵的底部固定连接有进风管道，所述壳体的一侧设有工作室，所述工作室的两侧均设有出风窗，所述出风窗与进风管道进行固定连接，所述工作室的底部两侧均设有抽气窗。该用于高通量生物测序的高通量染色平台，通过玻璃板封闭工作室，并通过静电除尘器对工作室的进风进行除尘处理，并在第一换气泵和第二换气泵的带动下进行快速的换气工作，并通过活性炭板对排气进行充分的净化处理。

摘要： 本发明提供了一种基于高通量测序技术用于线粒体高变区复合扩增的引物组合、测序方法及其应用，涉及高通量测序技术领域。所述引物组合包括5对引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10所示。本发明还提供了用于线粒体高变区的高通量基因测序的方法，所述方法包括利用SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10所示引物组合构建测序文库；采用高通量测序的方法对所述测序文库进行检测。本发明提供的用于线粒体高变区复合扩增的引物组合以及测序方法能够同时检测多个样本的线粒体高变区基因，有效提高检测效率、准确率、灵敏度，同时降低了成本、简化了操作步骤，通过单管反应即可获得检测结果。

摘要： 本发明实施例公开了一种基于高通量测序技术的基因定量测序方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在待测的至少两个靶标基因的序列中分别增加、修改或删除至少一个碱基制备标准模板；再将所述标准模板克隆至载体中合成载体，然后将所述合成载体扩增并纯化；再将所述合成载体的纯化产物等摩尔量混合，形成混合标准品。本发明的基于高通量测序技术的基因定量测序方法实现了在同时对多个靶标基因的定量检测，提高了检测效率，并保证了准确率，耗时短，节约了检测测序成本。

摘要： 本发明涉及一种鉴别和检测分子标记的高通量方法，其中限制性片段被生成，合适的包含(样品特异性)鉴别子的接头被连接。与接头相连的限制性片段可通过在3’端携带选择性核苷酸的、接头兼容性引物进行选择性扩增。经扩增的与接头相连的限制性片段经高通量测序方法(至少部分)测序，限制性片段的序列部分和样品特异性鉴别子作为分子标记。该高通量方法将AFLP(扩增片段长度多态性)方法和高通量测序技术结合起来。