原位杂交技术

摘要： 目的 探讨环状核糖核酸92400 (circ-92400)在大肠腺癌组织中的表达及临床病理意义.方法 收集102例大肠腺癌组织标本及癌旁正常肠组织标本,应用RNA原位杂交技术检测circ-92400表达情况,并分析其与病理参数的关系.结果 circ-92400在大肠腺癌组织中呈阳性表达,阳性率为77.45％ (79/102).circ-92400阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度有相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).circ-92400在大肠腺癌组织中的阳性细胞百分比为(58.00±13.00)％,高于癌旁正常肠组织的(11.00±3.00)％,差异有统计学意义(t=5.84,P＜0.05).结论 大肠腺癌组织中circ-92400呈阳性表达,其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度密切相关,circ-92400或可作为大肠腺癌的新的肿瘤标志物.

摘要： 目的 探讨第二代杂交捕获技术 (HC2) 与原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变(CIN) 诊断中的应用价值.方法 采用第二代杂交捕获技术 (HC2) 与原位杂交技术对九江学院附属医院2015年-2017年1500例妇女进行筛查,应用HC2与原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变中检测的灵敏度和特异度进行评价.结果 根据对1500例被筛查者进行检测和分析,结果显示:HC2技术检测CIN的灵敏度和特异度分别为89.3%和76.2%,原位杂交技术检测的灵敏度和特异度分别为54.5%和86.4%.结论 第二代杂交捕获技术(HC2) 与原位杂交技术联合应用于宫颈上皮内瘤变的诊断,能显著提高宫颈上皮内瘤变早期诊断的敏感性和特异性,在宫颈上皮内瘤变的筛查中具有重要的临床应用价值.

摘要： 目的探讨第二代杂交捕获技术(HC2)与原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断中的应用价值。方法采用第二代杂交捕获技术(HC2)与原位杂交技术对九江学院附属医院2015年-2017年1 500例妇女进行筛查,应用HC2与原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变中检测的灵敏度和特异度进行评价。结果根据对1 500例被筛查者进行检测和分析,结果显示:HC2技术检测CIN的灵敏度和特异度分别为89.3%和76.2%,原位杂交技术检测的灵敏度和特异度分别为54.5%和86.4%。结论第二代杂交捕获技术(HC2)与原位杂交技术联合应用于宫颈上皮内瘤变的诊断,能显著提高宫颈上皮内瘤变早期诊断的敏感性和特异性,在宫颈上皮内瘤变的筛查中具有重要的临床应用价值。

摘要： 目的:对miR–23a和E–cadherin在大肠癌及癌旁正常组织中的表达和临床意义进行探究。方法:收集珠海市中西医结合医院2016年1月至2018年1月外科手术切除的,经过病理诊断的大肠癌标本165例,配对的距离大肠癌5 cm以上的癌旁组织标本129例,采用原位杂交技术检测miR–23a和E–cadherin在165例大肠癌和129例癌旁正常组织中的表达。结果:miR–23a和E–cadherin的表达在年龄、性别、病理分化程度中差异均无统计学意义(P>0.05);在浸润深度、淋巴结转移、TNM分期表达中差异均具有统计学意义(P0.05);E–cadherin的表在大肠浸润深度、淋巴结转移之间的差异具有统计学意义(P<0.05);伴随着病理分化程度的降低,阳性表达率越高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR–23a表达增加和E–cadherin表达减少在大肠癌的侵袭转移过程中发挥重要的作用。miR–23a和E–cadherin具有作为结直肠癌诊断标记的可能。

摘要： 目的:研究高危人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA定量分析在宫颈病变筛查中的作用.方法:采用原位杂交技术对440例不同宫颈病变[炎症、低级别上皮内瘤变(CIN)、高级别CIN、浸润性鳞癌]患者行高危HPV E6/E7 mRNA拷贝数进行定量检测,建立数学模型对检测结果进行分析.结果:4组之间HPV E6/E7 mRNA阳性率不全相等,具有统计学差异(P＜0.005 0);炎症组与其他3组宫颈病变之间高危HPV E6/E7 mRNA阳性率均有统计学差异(P＜0.008 3).拷贝数大小与病变程度呈正相关,可知当mRNA小于500时,炎症的可能性比较高;500～10 000时,很可能是CIN(包括低级别和高级别);大于10 000时,很可能是高级别CIN和癌症.结论:高危HPV E6/E7 mRNA拷贝数大小与宫颈病变程度正相关,其定量检测可作为宫颈病变联合筛查的一种有效补充工具.

摘要： 目的 探究免疫组化技术、原位杂交技术用于结核病诊断中的应用价值,评价其效果.方法 结核病患者142例作为结核病组,另选取100例进行健康体检的志愿者作为健康组.结核病组患者随机分为A、B组,各71例,A组进行免疫组化技术诊断,B组进行原位杂交技术诊断,观察两种方法 在显微镜下的病变形态,比较两种诊断方法 的检测阳性率.结果 A组和健康组的阳性率分别为87.32%、6.00%,B组和健康组的阳性率分别为97.18%、2.00%.B组诊断结核病的阳性率高于A组,差异具有统计学意义(χ2=4.829,P<0.05).结论 免疫组化技术、原位杂交技术都是结核病诊断较好的手段,但原位杂交技术诊断结核病的阳性率高于免疫组化技术,具有临床推广价值.

摘要： 远缘杂交是观赏植物种质创新和品种改良的重要方法，但远缘杂交易出现假杂种，对远缘杂交后代进行杂种真实性鉴定、筛选出目的杂种在观赏植物远缘杂交育种中具有重要作用。该文简要介绍了观赏植物远缘杂交后代中假杂种的可能产生途径，详细阐述了形态特征、细胞遗传学、分子细胞遗传学、分子标记、生理生化指标等主要方法在观赏植物远缘杂种鉴定上的研究进展，重点总结了FISH、GISH等原位杂交技术和RAPD、AFLP、SSR等分子标记鉴定方法的应用情况；并提出观赏植物远缘杂交育种中杂种真实性鉴定方法的选择策略，

摘要： 为探究三倍体LA百合是否可作为育种亲本并筛选与亚洲百合远缘杂交育性较高的组合，该研究对26个LA品种与10个亚洲百合品种进行62个组合的远缘杂交，并利用基因组原位杂交技术（GISH）对部分杂种后代进行鉴定分析。

摘要： Objective:We evaluated fluorescence in situ hybridization( FISH)for assessing the response to thera-py in patients with non-invasive bladder cancer receiving Epirubicin therapies. Methods:We selected 50 non-inva-sive bladder cancer patients form June 2011 to December 2012. We excluded the upper urinary tract carcinoma from these 50 patients. All operation methods were transurethral resection of bladder tumor( TURBT),after TURBT they received Epirubicin therapies in following half year. Fluorescence in situ hybridization was performed before TURBT, and at 1 week,3 months and 6 months during Epirubicin therapy with maintenance. Results:The percentage of posi-tive cells decreased after operation and Epirubicin therapies in following half year. The percentage of positive cells by FISH between pre-operation and 1 week after TUBRT had significantly difference(P<0. 001),the percentage of positive cells by FISH between 1 week and 3 months also had significantly difference(P<0. 001). But compared with the percentage of positive cells between three months and six months after TURBT,there was no obvious differ-ence(P=0. 148). The higher percentage of positive cells leaded to higher tumor recurrence rate. There is a signifi-cant difference at the rate of tumor recurrence between≥25% and <25%. Conclusion:TURBT and continuous reg-ularly Epirubicin therapies for non-invasive bladder cancer may significantly decrease the percentage of positive cells following 3 months after operation. The recurrence rate of non-invasive bladder cancer with percentage of positive cells≥25% is higher than that of <25%.%目的:利用荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridazation,FISH)评估膀胱肿瘤术(TURBT)预后效果.方法:选取2011年6月到2012年12月50例膀胱肿瘤病人.患者均术前排除上尿路泌尿系肿瘤,手术方式为经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT),术后接受规律膀胱内灌注(灌注药物为表柔比星)治疗.FISH检测的时间为TURBT术前,术后一周,术后三月,术后半年.结果:FISH检测中阳性细胞百分率随手术及术后膀胱灌注表柔比星总体呈逐渐下降趋势.其中术前与术后一周,FISH阳性细胞百分率变化具有统计学意义(P<0.001).术后一周与术后三月FISH阳性细胞百分率比较,具有统计学意义(P<0.001).术后三月至术后半年的FISH检测阳性细胞百分率下降不明显(P=0.148).FISH阳性细胞百分率越高肿瘤复发机率越高,FISH阳性细胞百分率≥25%者与<25%者肿瘤复发率有统计学意义(P<0.001).结论:手术和术后定期膀胱灌注可以明显降低术后三月的尿阳性细胞百分率.术后FISH阳性细胞百分率≥25%者的肿瘤复发率明显高于<25%的患者.

摘要： 目的 应用原位杂交技术观察当归补血汤对移植肌卫星细胞受体鼠造血功能重建的影响.方法 对4组受体鼠的骨组织石蜡切片进行原位杂交,探究Y染色体的存在及阳性细胞表达率.结果 除空白对照组,其余3组(移植肌卫星细胞+灌注生理盐水组、移植肌卫星细胞+灌注等倍当归补血汤组、移植肌卫星细胞+灌注5倍当归补血汤组)均呈阳性反应,且阳性细胞表达率差异具有统计学意义.结论 原位杂交技术可以证明雌性小鼠骨组织中的Y染色体来自于雄性供体肌卫星细胞,当归补血汤干预有助于受体鼠造血功能重建,为后续研究提供进一步的实验室依据.

摘要： 原位杂交(in situ hybridization)技术是80年代发展起来的一种把重组DNA技术与组织学定位技术结合起来的新技术。本文对从80年代至今原位杂交技术的发展历程以及各阶段不同技术的原理，在兽医微生物中的应用和存在的不足进行了综述，并对今后的进一步发展提出新的展望。

摘要： 原位杂交(in situ hybridization)技术是80年代发展起来的一种把重组DNA技术与组织学定位技术结合起来的新技术.本文对从80年代至今原位杂交技术的发展历程以及各阶段不同技术的原理,在兽医微生物中的应用和存在的不足进行了综述,并对今后的进一步发展提出新的展望.

摘要： 原位杂交技术(ISH)是核酸分子杂交的一部分，是将组织化学与分子生物学技术相结合来检测和定位核酸的一项新技术，它是用标记过的已知序列的核昔酸片段作为探针，通过杂交直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上检测和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。本文分析了HPV感染与宫颈癌和尖锐湿疣的关系，并通过应用生物分子标记过的DNA探针通过杂交在组织切片和细胞涂片上检测和定位，旨在应用原位杂交技术（ISH）对人类乳头状瘤病毒（HPV）感染者进行分子水平的病源体(病因)诊断。

摘要： 目的：利用改良的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒(定量比值法)检测斑马鱼不同组织、不同时相胚胎的G6PD酶活性.利用基因重组等技术构建g6pd-pCS2+、mutant g6pd-pCS2+、g6pd-EGFP-pCS2+、mutant g6pd-EGFP-pCS2+.同时利用原位杂交技术观察斑马鱼g6pd的表达情况,从而为构建G6PD缺乏症的斑马鱼疾病模型奠定基础.方法：1.运用改良的G6PD定量比值法检测成年斑马鱼各组织,以及不同时相的胚胎G6PD酶活性,并利用RT-PCR检测mRNA水平上表达情况;2.(1)提取斑马鱼Total RNA,制备斑马鱼cDNA,通过RT-PCR克隆得到斑马鱼g6pd基因片段全长;(2)g6pd-pCS2+重组质粒的构建,并且制各地高辛标记的反义mRNA探针,在野生型斑马鱼Tuebingen进行原位杂交,观察g6pd基因的表达情况;(3)g6pd-pCS2+重组质粒鉴定正确后,运用重叠延伸定点诱变原理设计出突变型mutant g6pd基因,将mutant g6pd基因与EGFP-pCS2+质粒重组构建突变型mutant g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒,然后利用显微注射技术将mutant g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒注入斑马鱼胚胎中,观察荧光表达.结果：1.野生型成年斑马鱼各组织G6PD酶活性结果为:脑1.7307±0.1673,眼睛1.7085±0.2230,鱼鳃1.7347±0.1901,肠1.7501±0.2241,肌肉1.7201±0.1573,皮肤1.7460±0.1756,血1.7012±0.1902.各时相的酶活性为:24小时1.7429±0.1701,48小时1.7495±0.1296,5天1.7118±0.2236,15天1.7621±0.1690.2.成功设计g6pd基因、突变体mutant g6pd基因;3.成功构建突变型mutant g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒;4.成功制备出斑马鱼g6pd基因反义mRNA探针;5.成功的将mutant g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒显微注射入斑马鱼胚胎内,在荧光显微镜下观察到荧光表达情况.结论：在野生型斑马鱼中各个组织及各个时相胚胎的g6pd恒定表达,差异无统计学意义;本研究首次采用新型模式生物斑马鱼通过原位杂交观察g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎不同发育时相中的表达情况,并人工设计mutant g6pd基因,运用基因重组原理成功构建出突变型的mutant g6pd-EGFP-pCS2+重组质粒,通过显微注射的方法注入斑马鱼胚胎内,为共注射GATA-1-mutantg6pd-EGFP-PBSK Isce l重组质粒和Iscel酶,然后利用显性负效应制备斑马鱼G6PD缺乏症模型奠定基础,为进一步的研究人类G6PD缺乏症提供了新的途径和方法.

摘要： 原位杂交技术是新近开展的一项新技术，其原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基对互补配对原理，与组织切片、细胞制片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。本文就HPV DNA检测技术在常规实验中的操作体会等问题进行了总结。

摘要： 原位杂交技术是近年来开展的一项新技术采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，利用碱基对互补配对的原理，与组织标本中的靶序列特异杂交，经信号放大显色后镜下观察结果。本文就HPV DNA检测技术在日常工作中的操作体会等问题进行了总结。

摘要： 目的：探讨在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤组织石蜡切片标本中检测EB病毒的更快速、更灵敏的方法。方法：用地高辛标记的寡核苷酸EBER探针和EBV一抗分别用原位杂交、免疫组化检测鼻咽癌组织切片中EBV的分别情况。结果：用地高辛标记的寡核苷酸EBER作探针原位杂交检测EB病毒的方法比免疫组化的方法更灵敏。结论：用地高辛标记的寡核苷酸EBER作探针原位杂交检测结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤组织切片中EB病毒的方法不失为一种简单、快速、灵敏的方法。

摘要： 目的：探讨COX-2mRNA及蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法：应用S-P免疫组织化学技术和原位杂交技术测30例乳腺单纯性增生、30例乳腺导管内癌和70例乳腺浸润性导管癌组织中COX-2蛋白及COX-2mRNA的表达。结果：①COX-2蛋白和COX-2mRNA在乳腺单纯性增生、乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率分别为10．0％、56．6％、74．3％和13．3％、63．3％、77．2％，差异有显著意义(P0．05)。②COX-2蛋白及COX-2mRNA表达均与淋巴结转移有关(P0．05)。结论：COX-2基因及蛋白在乳腺癌的发生、发展中起重要作用，与淋巴结转移密切相关，可作为判断乳腺癌预后、转移的生物学标志物。

摘要： 随着科学技术的发展，新技术、新方法层出不穷，许多新的技术和方法已广泛应用于医学各学科。本文主要简述了新的原位杂交技术(显色原位杂交技术、荧光原位杂交技术、多重荧光原位杂交技术)、聚合酶链式反应(定量聚合酶链式反应)、生物芯片(基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片)、基因重排技术在病理诊断中的应用以及存在的问题和发展前景。

摘要： 本文应用原位杂交技术和实时荧光定量PCR的方法确定Cdc42基因在麦长管蚜中的组织定位及相对表达量，对麦长管蚜的翅型分化研究奠定基础。研究结果表明，Cdc42基因在有翅蚜中特异表达，且有翅蚜和无翅蚜的胸部表达量差异明显，说明该基因可能与麦长管蚜的翅型分化有关。

摘要： 本发明涉及一种促进荧光原位杂交的组合物及杂交液，荧光原位杂交探针工作液、荧光原位杂交方法，属于分子病理诊断技术领域。本发明中的促进荧光原位杂交的组合物，添加了异硫氰酸胍，异硫氰酸胍能够促进探针中的DNA与样本中的DNA进行结合，提高杂交效率；因此探针工作液能够实现快速杂交、短时杂交。由该组合物制成杂交液，并调整了传统组分氯化钠、柠檬酸钠、甲酰胺、硫酸葡聚糖的浓度；得到的杂交液在3h内即可完成杂交，并且杂交后仍然具有信号亮度强并且特异性好的特点。

摘要： 本发明公开了一种DNA探针‑菌落原位杂交技术筛选麻痹性贝毒产生菌株的方法，包括：预处理、杂交、筛选，通过特定的正向引物与反向引物，经经聚合酶链式反应扩增合成了以地高辛标记的单链DNA探针，将待测试菌株的DNA与DNA探针进行杂交作用，通过显色测试杂交匹配结果筛选出产毒菌株。有益效果为：本发明方法可在8‑10小时内完成90个样品筛选，方法快速高效，特异性强，而且准确性高；本发明方法操作步骤简单，工作量小，周期较短，所用试剂与材料均为生化试验常用试剂，对人体无害，对环境友好，分析成本低廉，具有较高的市场前景与经济价值。

摘要： 本发明公开了一种雌根结线虫食道腺基因原位杂交技术及其应用，属于雌根结线虫基因表达检测技术领域。本发明针对雌根结线虫虫体易破裂的特点，在原位杂交的过程中采用针灸针在雌根结线虫成虫的前体部轻轻地扎1‑2个小孔，提供了避免虫体破裂的方法；本发明还提供了雌根结线虫的固定技术；本发明改用96孔板实验可以减少虫体挪动，避免了离心管中因大量虫子聚集挤压造成的变形，而且雌虫体积较大，较重，不需要离心即能沉到底部，省去离心的步骤，能更好的维持虫体不变形。通过技术创新，在南方根结线虫雌成虫食道腺中实现了基因的原位杂交。

摘要： 本发明涉及一种荧光原位杂交技术检测半滑舌鳎的性染色体组成的方法。其特征在于，用于原位杂交的探针为含有半滑舌鳎雌性特异DNA片段的fosmid或BAC克隆，在雌性半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有一个荧光信号，而在超雌半滑舌鳎的一个细胞或一个染色体分裂相中有两个荧光信号。本发明对半滑舌鳎的细胞或染色体分裂相进行荧光原位杂交分析，通过观察杂交信号分辨半滑舌鳎的性染色体组成，是一种有效的鉴定半滑舌鳎雌性个体和尤其是超雌个体的技术，为利用染色体操作技术进行半滑舌鳎全雌育种的研究提供技术手段。

摘要： 本发明公开了一种荧光原位杂交技术检测沉积物中微生物种群的方法，包括沉积物样品的预处理、样品的涂布与脱水、杂交与洗净、用荧光显微镜观察，根据不同的探针所引起的荧光反应鉴别沉积物中所包含的微生物群落。本发明通过对荧光原位杂交技术的分析条件进行优化，削弱了样品的自发荧光，消除了非特异性杂交，确定了合适的杂交时间与洗脱液浓度，使得FISH技术很好的应用于沉积物样品中微生物种群的检测。

摘要： 本发明公开了用于荧光原位杂交技术检测基因数量变化的计数分析装置，包括外壳，外壳上分别设有按键B、按键R、按键G、按键R/G和按键R/B，按键B、按键R、按键G、按键R/G和按键R/B的一侧均设有显示屏，外壳的内部设有第一种类型输入—输出模块和第二种类型输入—输出模块，所述按键B、按键R和按键G分别对应一条第一种类型输入—输出模块，按键R/G和按键R/B分别对应一条第二种类型输入—输出模块，外壳的侧壁设有按键off。本发明通过设计一种针对镜下观察的荧光信号同步进行手动计数的装置，适用于FISH检测荧光信号结果辨别分析时使用。

摘要： 本发明属于肿瘤分子诊断领域，具体涉及一种骨髓涂片荧光原位杂交技术在多发性骨髓瘤中的应用，具体包括：将骨髓液制备成骨髓涂片进行瑞氏染色，选择骨髓瘤细胞多且分散良好区域作为FISH杂交区域；采用新鲜固定液覆盖FISH杂交区域使之褪色并固定细胞，将骨髓涂片置于56°C的2×SSC溶液中洗涤10min，快速放入去离子水中浸洗一遍，随后放入到梯度乙醇脱水、风干；在FISH杂交区域上加入FISH探针进行杂交，用DAPI复染剂染色、镜检荧光杂交信号。本发明所述骨髓涂片FISH检测方法特别适用于在流式免疫分型中单克隆异常浆细胞比例低于20％、在骨髓涂片瑞氏染色形态学中骨髓瘤细胞占比高于20％的情况。

摘要： 本发明公开了一种DNA探针‑菌落原位杂交技术筛选麻痹性贝毒产生菌株的方法，包括：预处理、杂交、筛选，通过特定的正向引物与反向引物，经经聚合酶链式反应扩增合成了以地高辛标记的单链DNA探针，将待测试菌株的DNA与DNA探针进行杂交作用，通过显色测试杂交匹配结果筛选出产毒菌株。有益效果为：本发明方法可在8‑10小时内完成90个样品筛选，方法快速高效，特异性强，而且准确性高；本发明方法操作步骤简单，工作量小，周期较短，所用试剂与材料均为生化试验常用试剂，对人体无害，对环境友好，分析成本低廉，具有较高的市场前景与经济价值。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用整体原位杂交技术检测环境污染物发育毒性的方法。所述方法，包括：采用整体原位杂交技术检测环境污染物对斑马鱼胚胎的发育毒性。采用本发明所述方法能够预测环境污染物对斑马鱼器官、组织的潜在毒性作用，进一步揭示环境污染物的作用模式，缩短检测周期，真正实现早期预警的目的。

摘要： 本发明公开了一种雌根结线虫食道腺基因原位杂交技术及其应用，属于雌根结线虫基因表达检测技术领域。本发明针对雌根结线虫虫体易破裂的特点，在原位杂交的过程中采用针灸针在雌根结线虫成虫的前体部轻轻地扎1-2个小孔，提供了避免虫体破裂的方法；本发明还提供了雌根结线虫的固定技术；本发明改用96孔板实验可以减少虫体挪动，避免了离心管中因大量虫子聚集挤压造成的变形，而且雌虫体积较大，较重，不需要离心即能沉到底部，省去离心的步骤，能更好的维持虫体不变形。通过技术创新，在南方根结线虫雌成虫食道腺中实现了基因的原位杂交。