磁珠法

摘要： 目的:探讨保存液类型及56°C灭活前处理30~60 min对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的影响。方法:将灭活的呼吸道病毒作为质控品,分别以非灭活型病毒保存液和含胍盐的灭活型病毒保存液为基质,制备成两种不同保存液类型的中、低、较低浓度的临床模拟样本。分别在常温与56°C下对样本进行30~60 min的灭活前处理,然后统一采用核酸提取试剂盒(磁珠法)和呼吸道病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)对样本进行检测,并采用SPSS18.0软件分别对三个稀释梯度样本的ORF1ab、N基因Ct值进行统计学分析。结果:两种病毒保存液经磁珠法提取核酸,呼吸道病毒核酸检测的Ct值相比有统计学差异(ORF1ab基因:P0.05)。结论:含胍盐的灭活型病毒保存液可提高经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的灵敏度,56°C灭活前处理30~60 min未对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果产生影响。

摘要： 罗氏Cobas E-411化学发光免疫分析仪是目前各大医院检验科进行免疫化验分析的一款常用仪器。其采用光生物学检测技术中的化学发光技术,较以往放射性免疫分析仪具有显著的优越性,彻底消除了具有放射性有害物对操作者和环境的危害;无半衰期限制,延长了试剂的稳定性和有效期;适用于利用复合标记系统进行多指标并行测定;灵敏度高,线性范围宽,缩短了检测时间[1]。

摘要： 目的评价磁珠法核酸提取的HBV-DNA定量试剂(以下简称“磁珠法”)性能是否符合ISO15189实验室认可及临床诊断要求。方法使用高敏乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量检测试剂盒(湖南圣湘生物科技有限公司),采用磁珠法提取核酸进行正确度、精密度、线性范围、可报告范围、抗干扰能力等的检测性能评价。结果磁珠法定量检测HBV-DNA项目重复性精密度<3/5TEa,中间精密度<4/5TEa(以室间质评评价界限靶值对数值±0.4作为允许总误差(TEa)),正确度与室间质评结果靶值偏倚的绝对值<7.5%;线性范围a值在1±0.05范围内,相关系数r^(2)≥0.95;可报告范围偏倚的绝对值≤20%,抗干扰实验结果与正常标本的检测结果在±0.4 Log内。结论高敏乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量检测符合临床的检测需求。

摘要： 目的通过对X-Pure 96 Plus微量DNA自动提取工作站用硅珠法及磁珠法(磁棒式)两种提取方法测试,探讨该工作站的提取灵敏度、纯化能力和对检材的适应性。方法以2800M标准DNA及新鲜人血制作样本,经X-Pure 96 Plus微量DNA自动提取工作站对所选两种方法的提取灵敏度及纯化能力进行测试。结果X-Pure 96 Plus工作站硅珠法及磁珠法两种提取方法的提取灵敏度和纯化能力都达到较高水平,硅珠法的纯化能力更强,而磁珠法的提取灵敏度稍优。结论该工作站具有较强的纯化能力和提取效率,可针对不同检材选择合适的提取模式,能极大提升DNA提取的质量和效率。

摘要： 本研究建立了一种基于磁珠法的肉类DNA快速提取技术。该技术以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为裂解液,70%乙醇为漂洗液,羟基磁性微球为DNA吸附介质,从裂解液浓度、裂解时间、漂洗次数3方面进行优化。研究发现裂解液为2%CTAB、裂解时间10 min,漂洗次数2次时,基因组DNA提取效果最优。本研究建立的磁珠法肉类DNA提取技术可作为基层实验室自建肉类DNA提取方案,用于肉类DNA的快速提取,为肉类食品安全检测提供技术保障。

摘要： 目的探讨长链醇类和油类物质作为洗涤液在磁珠法核酸提取中的应用价值。方法分别以5种长链醇类物质(十一醇、正癸醇、正辛醇、1-壬醇、2-十二烷醇)和3种油类物质(二甲基硅油、FC-40、石蜡油)作为洗涤液,采用磁珠法对102~105拷贝/μL的DNA和RNA混合物进行共提取,以传统的70%乙醇洗涤液作为对照。采用聚合酶链反应(PCR)或逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对提取的核酸进行扩增,采用循环阈值(Ct)评价不同洗涤液的核酸提取效率。以油类物质为洗涤液,比较不同试剂状态(干式试剂、湿式试剂)、不同混匀方式(涡旋混匀、移液枪混匀、颠倒混匀)的核酸提取性能,并分析其用于提取临床样本病原体基因组核酸的性能。结果8种洗涤液中,二甲基硅油和FC-40的核酸提取性能与传统的70%乙醇基本一致,可有效提取出102~105拷贝/μL DNA或RNA,对PCR和RT-PCR均无抑制作用。以70%乙醇洗涤液为对照,将二甲基硅油或FC-40作为核酸提取洗涤液时,无论是配合干式试剂还是湿式试剂,无论采用哪种混匀方式,提取103拷贝/μL DNA和RNA模板的Ct值差异均无统计学意义(P>0.05);提取肺炎支原体模拟临床样本DNA的Ct值差异无统计学意义(P>0.05),且与商品化核酸提取试剂盒基本一致。结论二甲基硅油和FC-40可作为磁珠法核酸共提取的洗涤液,并可用于微流控产品的开发。

摘要： 目的 观察评价分析高灵敏荧光定量检测丙型病毒性肝炎病毒核酸(HCV-RNA)在丙型病毒性肝炎诊疗中的应用效果.方法 选择2018年2月至2019年2月中山市第二人民医院肝病门诊及戒毒所体检可疑感染丙肝的患者临床血清样本126例,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 磁珠法试剂检测126例样本中有54例阳性,72例阴性;对照试剂检测126例临床样本中有44例阳性,82例阴性,磁珠法试剂定量检测血清中RNA水平阳性率42.86％高于对照试剂34.92％(χ2=1.670,P=0.196);磁珠法试剂和对照试剂的阳性样本具较好的一致性(P=0.0000),磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关(r=0.947,P<0.05).结论 磁珠法高灵敏荧光定量检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV-RNA定量检测试剂,值得临床大力推广应用.

摘要： 本试验旨在分析比较磁珠法和柱式法提取病毒核酸的灵敏度及重复性.试验选用实验室常用的磁珠法和柱式法试剂同时提取核酸检测新城疫阳性样品,荧光相对定量比较两种方法的灵敏度及重复性.结果表明,磁珠法提取核酸的检测灵敏度较高,重复性较好,检测成功率较高.表明磁珠法提取核酸在新城疫的荧光定量检测中优于柱式法.

摘要： 陈旧骨骼是高度腐败或白骨化尸检中重要的生物检材,涉及多数为重要案件,如火灾、爆炸、地震、海啸等重大群死群伤案件,迁坟、寻根访祖、考古等民事或历史事件.因陈旧骨骼长期受复杂环境因素的影响,DNA高度降解,核DNA模板含量低、质量差,且存在较多抑制物,对其进行检验较为困难.本文结合日常检案,对2例土埋陈旧股骨在亲权鉴定中的应用进行分析,希望借此为相关研究提供参考价值.

摘要： 目的:研究磁珠法与煮沸法用于检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的检出率,并探讨基因分型检出情况与HBV DNA定量间的关系.方法:2019年6月-2019年9月收治乙肝患者95例,随机分为两组,A组应用磁珠法,B组应用煮沸法对血浆进行处理,提取HBV DNA后通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)进行肝炎基因分型及DNA定量.比较两组患者检测结果并探讨基因分型结果检出率与HBV DNA定量水平的关联.结果:A组患者B型、D型、B/C混合型及总检出率均显著高于B组,C型检出率显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);两种方法检测HBV基因型检出率与HBV DNA水平呈正比,但应用磁珠法对低DNA水平样本的基因型检出明显优于煮沸法.结论:磁珠法提取核酸阳性率与灵敏度均较高,对于非C型及低病毒载量患者具有较高检出率.

摘要： 磁珠法是指利用包裹有壳聚糖的磁性微球来进行生物分离和纯化的实验方法,磁珠表面的壳聚糖能够与生物分子结合,如链霉素、亲和素等,标记有特殊物质的磁珠能够进行包括抗原抗体结合在类的多种生物和化学反应,从而能够利用磁珠进行蛋白质和核酸的吸附和固定.而磁珠法定量则是基于该原理,将5'端标记有生物素的特异寡核苷酸探针与标记有链霉素的磁珠相结合,在发生链霉素生物素亲和反应后,探针被牢固的固定在磁珠表面.借助磁珠为固相的分离系统,将特异的模板片段从混合CDNA中分离出来,再利用高灵敏度荧光检测手段对其进行荧光值测定,通过绘制的标准曲线对待测样本进行定量测定.

摘要： 目的:建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度的血液病毒核酸的提取方法。使之在充分保留了现有煮沸法便捷特性的情况下，增强其抗干扰性能力，为核酸定量检测的全自动化提供有效支撑。方法:以乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的提取为例，研制出一套快速的、适用于临床诊断的磁珠抽提方法。通过平行检测100例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本，从定量线性范围、灵敏度、特异性、精密度等方面与已在临床广泛应用的、成熟的煮沸法进行相关性分析;并用肝素钠、乳糜、EDTA对两种方法进行抑制物干扰实验和线性分析。结果:磁珠法在精密度、灵敏度、特异性等方面都优于煮沸法，但两种方法在常规标本的检测中无显著的差异;在抑制物方面，当肝素钠浓度达到62.5U／ml后，对煮沸法提取的高低浓度的HBV-DNA阳性样本有明显的抑制作用，而磁珠法并不显著;血脂对两种方法提取的HBV-DNA含量干扰不明显，EDTA对高浓度的阳性标本有很明显的抑制作用。结论:采用以磁珠法为基础的核酸提取方法，核酸得率高，具有较宽的检测范围和定量准确性，操作简单，可做为实验室首选的核酸提取方法，并可应用于临床诊断。

摘要： 痕量DNA的提取是法医DNA检验中的难题。本文利用实验室研制的磁珠提取了1ng 9947A (Promega公司)和1μL稀释30倍的血液,并成功进行了16个STR基因座的复合扩增。结果表明,与硅珠法相比,磁珠法在痕量DNA提取上具有特殊的优势。

摘要： 核酸提取和纯化是进行分子生物学研究的重要步骤,核酸提取方法逐步从手工操作向自动化操作发展.基于磁珠法的核酸自动提取仪在核酸提取中将发挥越来越重要的作用.针对自主设计的磁珠法核酸自动提取仪设计了温度系统,主要包含系统温度控制策略分析、硬件电路设计及相关软件设计.系统温度采用全加热和在固定频率及占空比PWM波控制下间歇性加热的分段控制,通过实验确定全加热时间及PWM波的占空比,并建立知识库,可以满足使用多种磁珠法核酸提取试剂盒进行核酸提取的温度要求.用该系统为河南惠尔纳米科技公司试剂盒中裂解液及洗脱液加热,实验发现,裂解时8个裂解孔的最大温度差异小于6°C,洗脱时8个洗脱孔的最大温度差异小于5°C,均满足核酸提取实验时对温度的要求.

摘要： 随着公安机关DNA数据库应用系统的发展建设,DNA检验技术也发生了不断的变化和进步.文章就美国AB公司(后简称AB)生产的Identifiler-Direct免提取试剂直接扩增法的效果与传统的磁珠法提取DNAAB-Identifiler试剂扩增方法的效果进行比较,结果显示，同一检材得到的DNA分型一致，免提取法检验峰值均匀，虽也有检验不完全现象，但所占比例仅2.67%，而磁珠法也有2%的检验不完全现象，说明免提取法仍准确可靠，同时省去了DNA提取的步骤，既节约了时间，又可减少污染环节，且分型图谱稳定、分型数据正确，平衡性良好，成功率达到97%以上，可以在DNA数据库建设中直接应用。

摘要： 目的：利用定量PCR(QPCR)技术，建立CHO宿主细胞DNA残留量检测方法。方法：通过磁珠法提取样品的残留DNA，然后对样品和标准DNA进行QPCR，根据标准曲线方程计算样品的DNA残留量。结果：该方法检测CHO细胞DNA的最低检测限为200fg，而且方法特异性地针对CHO细胞，对其它种属的DNA无检测反应。此外，磁殊法提取DNA的回收率可近似为100%。最后通过该方法对三个样品进行DNA残留理检测，检测结果均<100 pg/剂量，符合SFDA标准。

摘要： 本发明公开了一种免疫磁珠的保存体系以及免疫磁珠体系，免疫磁珠的保存体系包括保存液和凝胶产生剂，保存液包括稳定剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。这种免疫磁珠的保存体系在使用时，将免疫磁珠与保存液混合，接着加入凝胶产生剂后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系，接着将凝胶体系转移至2°C～6°C的环境下保存，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的长期保存。结合实施例部分的数据，这种免疫磁珠的保存体系在长时间保存免疫磁珠后，免疫磁珠上的免疫配基依然具有足够的活性。

摘要： 本发明涉及甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法、偶联磁珠及试剂盒，是在甲胎蛋白抗体中加入预处理液进行预处理，之后将经过预处理的甲胎蛋白抗体与羧基磁珠偶联，得到甲胎蛋白抗体偶联磁珠，其中预处理液包括十二烷基硫酸钠溶液。在甲胎蛋白抗体与羧基磁珠进行偶联前，通过十二烷基硫酸钠对甲胎蛋白抗体进行预处理，可以明显提高甲胎蛋白抗体与磁珠的偶联效率，提高现有技术中利用化学发光磁微粒免疫分析法检测人血清中甲胎蛋白的灵敏度和信噪比。

摘要： 本发明公开了一种免疫磁珠的保存液，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。增稠剂为蛋白胨，蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL。现有技术中，蛋白胨虽然也用于免疫磁珠的保存液，但是通常是作为稳定剂存在，且现有技术中保存液内的蛋白胨浓度一般不超过15g/L。本申请中创造性的采用蛋白胨作为增稠剂，利用蛋白胨在2°C～6°C的低温环境凝固的特点，将蛋白胨的浓度设置成不低于0.2g/mL，使得免疫磁珠的保存液可以在2°C～6°C的低温环境下呈半固体状态，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的较长期保存。

摘要： 本实用新型“灵敏快速的肝硬化和肝癌磁珠酶免法诊断试剂盒与磁珠”，属于医学诊断领域，包括盒体及与盒体内壁贴合的试剂管支架，所述试剂管支架上表面设有若干试剂管槽，所述其中一个试剂管槽中放置有盛有磁珠的磁珠管，另一个试剂管槽中放置酶标板，其特征在于，所述磁珠表面包被有一层抗体，所述酶标板为磁珠与待测血清在其板孔中进行反应的空白微孔板，所述抗体指肝硬化患者血清中标志性抗原蛋白HCCR-2特异结合的抗体，或指肝癌患者血清中标志性抗原HCCR-1特异结合的抗体。

摘要： 本申请实施例提供了一种磁珠法检测方法和磁珠检测装置，用于提高磁珠法测试的性能。本申请实施例方法包括：获取反应样本的测试项目；根据所述测试项目确定样本占比，所述样本占比用于表示所述反应样本中纤维蛋白原占所述反应样本总体积的百分比；根据所述样本占比确定驱动参数；根据所述驱动参数驱动磁珠，并检测所述反应样本的反应终点。

摘要： 本发明公开了一种核酸提取用磁珠及其制备方法、用于磁珠法核酸提取的试剂盒。用于磁珠法核酸提取的试剂盒，其包括细胞裂解液、磁珠、洗涤液和洗脱液，磁珠表面修饰有金属配合物，金属配合物为螯合有铸币金属的配合物；洗脱液中含有具有巯基的含硫化合物。本发明磁珠表面修饰的金属配合物螯合有铸币金属，在核酸提取时，能够与巯基发生高度亲和反应，通过特异性的硫‑铸币金属之间的强作用力，从而使得DNA与金属离子的相互作用被打破，从而洗脱时能够快速将DNA从磁珠上脱离，这种脱离方法简单有效，现有常规金属离子是不具备此种效果。加入含硫化合物后还可以打开蛋白内部的双硫键，使得其变性，失去结构特点和活性，可以更好地从DNA上脱落。

摘要： 本申请公开了一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法。本申请的磁珠法核酸提取试剂盒包括细胞裂解液、磁珠和洗涤液，其中，细胞裂解液中含有异硫氰酸胍、Triton X‑100、3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基]‑1‑丙磺酸和N‑月桂酰肌氨酸钠。本申请的磁珠法核酸提取试剂盒，通过对裂解缓冲液的组分进行优化，可以快速、充分的裂解细胞、变性蛋白质、使蛋白质与核酸有效分离，释放出核酸；提高了细胞裂解液的工作效率，缩短了核酸提取的时间。

摘要： 本发明涉及一种基于磁珠法提取核酸检测盒的磁开关装置及反应机构，磁开关装置包括支架、减速电机、摆臂以及永磁体，减速电机固定安装在所述支架上，摆臂的顶端与所述减速电机的输出轴相连接，且摆臂的底端沿自前至后的方向构成摆动方向，永磁体安设于摆臂的底端，反应机构包括反应仓、磁开关装置以及核酸检测盒，核酸检测盒放置在反应仓内，磁开关装置的支架固接在反应仓的侧仓壁上，且永磁体朝向核酸检测盒。本发明通过控制减速电机驱动摆臂执行动作，带动永磁体靠近或远离核酸检测盒，以执行吸附或关闭功能，其体积小，转动灵活，反应速度快，可靠性高且成本低。

摘要： 本发明涉及一种基于磁珠法的一步法核酸提取工艺，一种基于磁珠法的一步法核酸提取工艺，步骤如下：1)将1个试剂盒内含有的6个深孔板分别进行预分装处理，将经过预分装处理后的深孔板颠倒混匀、离心后，撕开深孔板的封膜，并在预分装裂解结合液LB的深孔板孔中依次加入待测样本和蛋白酶K；2)通过核酸提取仪进行核酸的提取；3)核酸提取程序完毕后，取出6个深孔板，第6板深孔板中的溶液即为核酸溶液；本发明将裂解液和结合液真正意义上统一，裂解和结合同时进行，大大提高了工作效率，提高了核酸提取的浓度，且保证了核酸纯化的纯度。整个试剂盒中不含任何有毒物质，保证了操作人员的安全。

摘要： 本实用新型涉及一种基于磁珠法的核酸提取设备及其用的磁吸装置，属于核酸提取技术领域。该设备包括支架、混匀装置与磁吸装置；混匀装置用于对混匀管施加振动；磁吸装置包括磁吸模块及摆动驱动模块；摆动驱动模块用于驱使磁吸模块摆动至位于混匀管的外壁面处的磁吸位置，及用于驱使磁吸模块摆动至远离混匀管的磁吸释放位置；摆动驱动模块包括第一安装支架，可摆动地安装在第一安装支架上的摆臂，用于驱使摆臂摆动的摆动驱动器，及布设在第一安装支架上的到位监测传感器；到位监测传感器用于对磁吸模块摆至前述两位置处的动作进行到位监测，并输出到位监测信号。该设备便于核酸磁吸提取操作，可广泛用于新冠状病毒的检测等疫情防控领域中。