谷氨酸脱氢酶

摘要： 药物性肝损伤(DILI)是常见的药物不良反应,可致急性肝衰竭或死亡等严重不良预后。早期、准确诊断DILI意义重大。传统生物标志物灵敏性与肝损伤特异性不足,寻找灵敏性更高、特异性更强的新型肝损伤生物标志物十分必要。谷氨酸脱氢酶(GLDH)是一种新型DILI生物标志物,比传统生物标志物的肝损伤特异性更强、灵敏性更高、稳定性更好。与其他新型生物标志物相比较,GLDH比miR-122的个体间和个体内差异小,比高迁移率族蛋白B1、骨桥蛋白和细胞角蛋白18的肝损伤特异性和灵敏性更好,且比这些新型生物标志物更易于检测,具有很好的临床应用前景。本文总结了传统生物标志物的不足,综述了GLDH作为DILI的潜在生物标志物的最新研究,以期全面了解GLDH作为DILI生物标志物的潜力。

摘要： 氮代谢是植物体内的基本生理代谢过程之一,包括氮素同化、积累和蛋白质合成等过程,与植物的生长发育、产量和品质的联系非常密切。氮代谢的生理过程在酶的催化下完成,与氮代谢的生理过程密切相关的酶有:硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、转氨酶(谷氨酸草酰乙酸转氨酶、谷氨酸丙酮酸转氨酶)、谷氨酸合酶、谷氨酸脱氢酶等关键酶。这5种酶在植物氮代谢过程中具有重要的作用,简要介绍这几种酶的基本结构与特性、对作物生长发育的调控等,为进一步探究氮代谢研究机制提供有益的参考。

摘要： 为解析谷氨酸代谢对产油丝状真菌高山被孢霉(Mortierella alpina)脂质合成的影响,该文考察了补加谷氨酸条件下高山被孢霉谷氨酸代谢相关酶的基因转录水平、酶活性水平和总脂产量等指标。结果显示,补加谷氨酸显著影响了高山被孢霉胞内谷氨酸代谢相关基因的转录水平,NADP+型谷氨酸脱氢酶和谷氨酸脱羧酶活性的增加为脂肪酸从头合成提供了充足的还原力,这使得细胞总脂含量提升了3 g/L(约占干重比例10%)。该研究为氨基酸介导的微生物脂质合成机制解析提供了参考。

摘要： 目的 探讨谷氨酸脱氢酶(GL DH)在肺癌靶向治疗中早期预测肝损伤的作用,为肝损伤患者的早期诊断及治疗提供指导.方法 选取2019年1月至2020年1月就诊于本院的80例肺癌靶向治疗患者作为研究对象,记录患者检测结果,记录患者谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及GLDH水平,并分析ALT、AST与GLDH间的相关性;分析GLDH预测肺癌靶向治疗患者肝损伤的价值.结果 80例肺癌患者中发生肝损伤30例,无肝损伤50例.肝损伤组ALT、AST及GLDH水平均高于无肝损伤组,差异有统计学意义(P0,P0.9,预测价值较高.结论 早期检测GLDH对肺癌靶向治疗患者肝损伤的病情评估具有重要价值.

摘要： 目的:探究胆碱酯酶与谷氨酸脱氢酶联合检测在肝脏疾病诊断中的意义.方法:选取我院于2018年1月～2020年10月收治的216例肝脏疾病患者为疾病组,另选取同时期的118例健康人为对照组,两组均接受CHE与GLDH检测,比较各组胆碱酯酶(CHE)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)检测水平与肝脏疾病检测阳性率.结果:对比对照组,疾病组CHE水平较低,GLDH水平高于对照组;联合检测慢性肝炎、肝硬化以及酒精性肝炎的阳性率要明显高于二者单一的检测阳性率,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:CHE与GLDH联合检测肝脏疾病的检出率较高,可以为后期临床诊疗工作提供借鉴.

摘要： 基于结构信息及保守序列比对,通过半理性设计和高通量筛选,将来源于Pseudomonas putida的NADPH依赖型谷氨酸脱氢酶PpGDH改造为NADH依赖型.与原始PpGDH相比,突变体PpGDH-D264V对NADH的偏好性(Ratioof kcat/Km)增强了1607倍,并具有对多种酮酸底物的催化活力,可用于制备多种非蛋白质氨基酸.对PpG-DH-D264V进行酶学性质表征,其最适温度为45°C,最适pH值8.0,T110 min/2温度达到58.1°C,在中性及弱碱性环境下具备良好的稳定性,为后续应用奠定基础.

摘要： 高胰岛素血症-高氨血症综合征(hyperinsulinism-hyperammonemia syndrome,HI/HA syndrome)是先天性高胰岛素血症(HI)中第二大常见亚型.患有该综合征的儿童有空腹和高蛋白质饮食诱发的低血糖,并伴有持续高氨血症.编码谷氨酸脱氢酶的基因GLUD1致病变异是HI/HA综合征的病因.谷氨酸脱氢酶在肝、肾、脑和胰腺细胞中表达.即使在血糖正常的情况下,HI/HA综合征患者出现神经系统损害较常见.服用ATP敏感的钾离子通道开放剂二氮嗪可以很好地控制HI/HA综合征患者的低血糖,但高氨血症无法改善.

摘要： 目的:探讨肝细胞损伤时谷氨酸脱氢酶(GLDH)变化特点及其与总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)和胆碱酯酶(CHE)等指标联合检测在肝病诊断中的临床意义.方法:选取肝病患者240例(肝病组)作为研究对象,其中急性病毒性肝炎69例(急性肝炎组),慢性活动性肝炎52例(慢活肝组),慢性迁延性肝炎49例(慢迁肝组),肝硬化43例(肝硬化组),原发性肝癌27例(肝癌组).选取同期健康体检者100例作为对照组.检测血清中GLDH、TBA、ALT、AST、GGT和CHE水平并进行比较.结果:不同肝病组血清GLDH、TBA、ALT、AST、GGT水平均高于对照组,CHE水平均低于对照组(均P<0.05).GLDH异常率从高到低依次为急性肝炎组、肝硬化组、慢活肝组、肝癌组和慢迁肝组.ALT和AST异常率由高到低依次为急性肝炎组、慢活肝组、肝癌组、慢迁肝组和肝硬化组.TBA异常率由高到低依次为急性肝炎组、慢活肝组、肝硬化组、肝癌组和慢迁肝组.GGT异常率由高到低依次为肝癌组、急性肝炎组、肝硬化组、慢活肝组和慢迁肝组.CHE异常率由低到高依次为肝硬化组、慢活肝组、肝癌组、急性肝炎组和慢迁肝组.结论:GLDH可作为肝细胞损伤的特异性指标,与血清TBA、ALT、AST、GGT和CHE等肝功能指标联合检测对肝细胞损伤程度的综合评估及对肝病的鉴别诊断具有重要意义.

摘要： 经硫酸铵沉淀、离子交换色谱、凝胶色谱法和羟磷灰石(HA)亲和色谱法纯化纳豆枯草芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶(GDH),得到电泳纯,纯化倍数为34倍,酶回收为率41％,酶活为34.29U/mg.SDS-PAGE和HPLC测定GDH分子量分别为47kDa和264kDa.GDH脱氨反应的最适pH和温度分别是7.5和30°C.分别采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)、苯甲酰甲醛(PG)和苯甲基磺酰氟(PMSF)分别作为赖氨酸、精氨酸和丝氨酸活性位点残基的变性剂,利用化学改性实验测定了GDH的氨基酸活性位点.经浓度为1mM的TNBS、PG和PMSF处理后,GDH酶活分别降至10.7％、83.3％和12.8％.但加入底物保护剂后,三种试剂处理的GDH酶活均没有明显降低.未处理的GDH、分别经TNBS和PMSF处理且活性降低50％的GDH的Km值分别为0.037、0.104和0.017mM,Vmax值分别为0.048、0.022和0.031mM/s.这些结果表明在活性位点中有一个或多个赖氨酸残基,对底物结合至关重要;一个或多个丝氨酸残基对GDH构象稳定性非常重要;但精氨酸对GDH酶活的影响非常小.

摘要： 目的：探讨血浆谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GLDH)活性测定在肝脏疾病中的临床意义. 方法：采用速率法检测229例肝功能异常者(急性肝损伤25例、慢性乙型肝炎60例、肝硬化47例、肝衰竭31例,胆道梗阻性疾病29例、肝癌37例)及120例健康体检者的血浆GLDH活性,并与AST、ALT、ALT、GGT等常用肝胆疾病指标进行比较分析. 结果：本室采用速率法测定GLDH活性的参考区间为4.4～13.3U/L.胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH较对照组明显升高(P＜0.05),胆道梗阻性疾病患者的GLDH/AST比值也明显高于对照组(P＜0.05).血浆GLDH浓度与AST浓度呈显著的正相关(r=0.230;P＜0.001).血浆GLDH浓度与肝损伤程度相关,随病情好转而降低. 结论：胆道梗阻性疾病和肝癌患者血浆GLDH升高最为明显,GLDH可作为判断肝细胞损伤程度和疗效观察的指标.

摘要： 目的：原核表达、纯化猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH)，并检测其免疫原性和免疫保护性。方法：应用PCR方法扩增gdh的完整ORF，按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pET-30a，构建pET-30a-gdh表达质粒，转化E.coli BL21(DE3)，筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达，表达的rGDH经亲和层析纯化后免疫家兔，ELISA法检测家兔血清中抗rGDH抗体效价，Western blot检测rGDH免疫原性，并用活菌攻毒，计算家兔的保护率。结果：构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达，Ni+NTA柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;纯化的rGDH免疫家兔后获得高效价的抗GDH抗体，被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带，5份实验感染猪血清均能与rGDH产生反应条带，且免疫家兔可获得50％的保护率。结论：成功原核表达并纯化了猪链球菌谷氨酸脱氢酶，重组蛋白免疫原性良好，并能够为家兔提供一定的免疫保护。

摘要： 对猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)进行克隆和序列分析，为进一步研究其功能打下基础。以zKHY的基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增出谷氨酸脱氢酶基因片段，克隆于pMD-18T载体，构建成载体pMD-18T-gdh，转化宿主菌DH5a中进行筛选鉴定和序列测定。测序结果与GenBank已登录序列进行核苷酸和氨基酸的同源性分析。成功地克隆了猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因，序列分析显示ZKHY与已报道的猪链球菌gdh基因有紧密的亲缘关系，核酸序列与2、7、9几个主要致病血清型的同源性在97.2％～98.4％，其中与2型菌株同源性在97.2％-97.3％;与7型菌株在98.4％;与9型在97.6％。其编码的氨基酸序列同源性则更高，与GenBank中已收录的序列同源性在98.9％以上。该分离株可能是属于2，7，9型之外的其它致病的血清型;所克隆的基因在猪链球菌之中非常保守，可以进行表达，进行免疫学方面的相关研究。

摘要： @@ L-谷氨酸(L-glutalnic acid)既是蛋白质的结构氨基酸之一，又是游离氨基酸。在医药、食品、人造制革、化妆品工业及农业上具有广泛的用途。谷氨酸脱氢酶是谷氨酸产生菌合成谷氨酸代谢过程中的关键酶，它能可逆性地催化α-酮戊二酸和谷氨酸之间的还原性胺化和氧化性脱氨反应。为了进一步提高谷氨酸产量，本实验室在原有工作基础上，利用PCR技术从目前谷氨酸发酵工业上应用的主要生产菌黄色短杆菌GDK-9中克隆了谷氨酸脱氢酶gdh基因，构建了穿梭载体pXMJ19.Gdh，它的成功构建，为进一步提高谷氨酸产量奠定理论和实践基础。

摘要： 以天津棒杆菌1.581 作为谷氨酸脱氢酶的产酶菌株酶源，对其培养基组成和发酵产酶工艺进行了优化研究。最优培养基配比为：尿素0.8﹪，玉米浆0.6﹪，葡萄糖10﹪；选择了恒定pH 自动控制尿素流加策略，最佳发酵条件为pH7.2、温度35°C、通气量1.5vvm 和搅拌转速350rpm，获得了酶活为33.4U/g的谷氨酸脱氢酶。

摘要： 本文基于谷氨酸脱氢酶(GLDH)对以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)作为辅酶的α-酮戊二酸(α-KG)还原性胺化反应的生物催化作用,用电化学分析技术研究了烟草特有亚硝胺之一4-(N-亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)对GLDH催化活性的影响,测定了NNK存在与否时GLDH酶促反应的最大反应速率及米氏常数或表观米氏常数.实验结果表明NNK对GLDH的催化活性有明显的抑制作用,而且属于可逆竞争性抑制机理,测得在25°C,pH8.0时抑制常数K为176μmol 1.

摘要： 铝的有机配合物形态是研究环境和生物体系中铝的毒性、生物有效性和传输机理的关键.本文分析了铝对环境生物体中谷氨酸脱氢酶的酶促反应影响.

摘要： 花生籽仁蛋白质含量较高,研究不同品种花生各器官中氮代谢酶活性的差异及与籽仁蛋白质含量间的关系,可为花生优质高产提供依据。在大田高产条件下研究了氮素水平对小粒型花生各器官中可溶性蛋白质、游离氨基酸含量及氮代谢相关酶活性的影响,结果表明,适当提高氮素水平既能增加花生各器官中可溶性蛋白质和游离氨基酸的含量,又能提高硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶等氮素同化酶的活性,使其达到同步增加;氮素水平过高虽能提高硝酸还原酶和籽仁蛋白质含量,但谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶的活性下降;N素施肥水平不改变花生植株各器官中硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的变化趋势,但适量施N(B2、B3处理)使花生各营养器官中NR、GS活性提高;氮素水平对花生各叶片和籽仁中GDH活性的高低影响较大,但对茎和根中活性大小的影响则较小。

摘要： 猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原，严重威胁着公共健康。但由链球菌属成员引起的人和动物的感染很多，为快速分辨不同类型的链球菌感染，本试验针对链球菌属属特异性引物16SrDNA以及猪链球菌gdh和海豚链球菌lctO等多种特异性引物，建立了快速区分猪链球菌的PCR检测方法。结果显示：属特异性引物能在猪链球菌、海豚链球菌、马链球菌兽疫亚种、无乳链球菌等链球菌中扩增出573 bp的目的片段，在测试的其他常见致病菌，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水汽单胞菌等菌种中未有扩增。gdh种特异性引物仅在猪链球菌中扩增出1 003 bp的目的片段，在非猪链球菌中未有扩增。此外，属特异性PCR敏感性为2.6 pg；gdh种特异性PCR的敏感性可达到1.5 pg。结果表明：本研究建立的属特异性PCR反应和猪链球菌种特异性PCR反应特异性好、敏感性高，可以用于猪链球菌PCR分子分型方法的研究和猪链球菌病病原的快速鉴定。

摘要： 本发明公开了一种多肽——谷氨酸/亮氨酸/苯丙氨酸/缬氨酸脱氢酶－11.55,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如糖尿病、甲亢、心律失常、肿瘤、各种感染等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的谷氨酸/亮氨酸/苯丙氨酸/缬氨酸脱氢酶－11.55的多核苷酸的用途。

摘要： 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，公开了地衣芽胞杆菌谷氨酸脱氢酶突变体S277W在聚γ‑谷氨酸合成中的应用。本发明通过基因组上定点突变的方式，将来源于地衣芽胞杆菌WX‑02(Baclicus lincheniformis WX‑02，中谷氨酸脱氢酶RocG的第277位丝氨酸突变为色氨酸，显著提高了谷氨酸脱氢酶催化活力，解决了目前聚γ‑谷氨酸合成过程中谷氨酸供给不足的问题，突变菌株聚γ‑谷氨酸产量相较于对照菌株至少提高了12%以上。本发明为聚γ‑谷氨酸的高效生产提供了一种新策略。

摘要： 本发明公开了一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶及其构建方法，所述的突变体酶具有SEQ ID NO：1，所示的氨基酸序列。该突变基因在异源宿主大肠杆菌中获得了良好表达，表达蛋白是一类能催化多种氨基酸的脱氢酶。本发明过程主要包括以下步骤：(1)获得谷氨酸脱氢酶基因gdh并构建重组质粒；(2)突变菌株的构建：3)表达菌株构建：(4)表达和纯化：本发明与现有技术相比，所生成的工程菌不仅能催化谷氨酸，而且还能催化甲硫氨酸和正亮氨酸。

摘要： 本发明涉及一种利用酶比色法技术的谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定谷氨酸脱氢酶活性浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、还原型辅酶、2－酮戊二酸酯、氯化氨及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主波长340nm处吸光度下降的速度，从而测算出谷氨酸脱氢酶的活性浓度大小。采用本发明完全可以通过紫外/可见光分析仪器得出所需的测定结果。

摘要： 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，公开了消化链球菌谷氨酸脱氢酶GdhA在提高地衣芽胞杆菌聚γ‑谷氨酸产量中的应用。本发明通过同源重组的方式，将来源于消化链球菌(

摘要： 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，公开了地衣芽胞杆菌谷氨酸脱氢酶突变体S277W在聚γ‑谷氨酸合成中的应用。本发明通过基因组上定点突变的方式，将来源于地衣芽胞杆菌WX‑02(

摘要： 本发明涉及生物技术和分析技术领域，具体的说是一种利用表面展示有谷氨酸脱氢酶的全细胞测定L-谷氨酸含量的方法。通过构建谷氨酸脱氢酶细菌表面展示系统，并利用紫外分光光度计检测信号得到L-谷氨酸的含量。本发明方法灵敏度高、特异性好、稳定性高、方法简单，适用于鲜味剂、食品调味剂等食品行业，营养药物、表面活性剂等日用品和医药行业，以及发酵、生物转化、生物能源等生物过程领域中L-谷氨酸的检测。

摘要： 本发明公开了一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶及其构建方法，所述的突变体酶具有SEQ ID NO：1，所示的氨基酸序列。该突变基因在异源宿主大肠杆菌中获得了良好表达，表达蛋白是一类能催化多种氨基酸的脱氢酶。本发明过程主要包括以下步骤：(1)获得谷氨酸脱氢酶基因gdh并构建重组质粒；(2)突变菌株的构建；3)表达菌株构建；(4)表达和纯化。本发明与现有技术相比，所生成的工程菌不仅能催化谷氨酸，而且还能催化甲硫氨酸和正亮氨酸。

摘要： 本发明涉及谷氨酸脱氢酶,β－乙酰氨基己糖苷酶和γ－肌动蛋白基因的启动子以及它们在丝状真菌的表达,分泌和反义系统中的应用。本发明也涉及编码;(Ⅰ)Penicilliumchrysogenum的NADP依赖性谷氨酸脱氢酶(EC.1.4.1.4),(Ⅱ)Penicillium chrysogenum的γ－N－乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)和(Ⅲ)Penicillium chrysogenum和Acrimonium chrysogenum的γ－肌动蛋白,的基因的启动子,它们可用于构建用于Penicillium chrysogenum和Acrimoniumchrysogenum及相关的种类的表达和分泌的强载体。所说的启动子也可通过反义构建体用于阻断基因的表达。在上述启动子的控制下,也可在丝状真菌中表达其他的基因,从而提高其中固有的抗生素和/或蛋白质的产生。

摘要： 本发明公开了一种谷氨酸脱氢酶变体及其在制备L‑氨基酸中的应用，该谷氨酸脱氢酶变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第71位，第92位，第143位，第144位，第145位，第146位，第175位，第187位，第352位，第355位进行单点突变或多点组合突变获得。本发明以来源于Clostridium difficile的谷氨酸脱氢酶为基础，通过理性设计的分子改造方法，来解决其对非天然底物没有酶活或酶活较低的问题，获得可以催化制备除天然产物L‑谷氨酸以外的多种L‑氨基酸的突变体，原料转化率和产品ee值均大于99％。