嵌合基因

摘要： 结直肠腺癌(CRC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一,其发生主要由癌基因或抑癌基因突变引起。研究发现一小部分CRC涉及受体酪氨激酶(RTK)基因融合,通常以3区与5区伴侣基因融合形成酪氨酸激酶嵌合基因/癌基因而致癌,其与间变性淋巴瘤激酶(ALK)具有高度同源性。该实验以确定致癌基因ALK融合所致CRC的发生率及其临床病理和遗传学特征为目的,选取8150例CRC中12例(0.15%)免疫组化ALK(D5F3)阳性的CRC,经RNA二代测序(NGS)证实该组肿瘤含CAD-ALK(1例)、DIAPH2-ALK(2例)、EML4-ALK(2例)、LOC101929227-ALK(1例)、SLMAP-ALK(1例)、SPTBN1-ALK(4例)和STRN-ALK(1例)基因融合。

摘要： 为探究大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与其免疫佐剂活性的相关性,本研究通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)分别构建了出血性大肠杆菌EDL933(O157:H7)鞭毛蛋白FliCH7基因的全长(aa1 ～aa585)、N端保守区(aa1～aa174)、N端加中间的高变区(aa1～aa496)与产肠毒素大肠杆菌F4ac+国内标准株C83902(O8:K88:H19)主要亚单位FaeG串联表达的嵌合基因,即FliC-FaeG、FliCN-FaeG和FliCNV-FaeG,分别将其克隆至pET-28a(+)表达载体中经IPTG诱导表达;经SDS-PAGE和western blot分别对表达的融合蛋白进行鉴定.PCR结果显示3个嵌合基因分别约为2 600 bp、1 300 bp和2 300 bp;SDS-PAGE结果显示融合蛋白的大小分别约为:90ku、48 ku和80 ku,均与预期大小一致.Western blot结果表明3种融合蛋白均能被抗FaeG的单克隆抗体识别;表明融合蛋白中FaeG仍维持其独立的结构和生物学活性.抗FliCH7的抗体可识别FliC-FaeG和FliCNV-FaeG融合蛋白,而FliCN-FaeG融合蛋白不合鞭毛蛋白高变区,所以不能被识别;TLR5受体活性检测结果表明,仅FliC-FaeG融合蛋白能激活TLR5受体,引起IL-8、TNF-α炎性因子的分泌,以上结果表明TLR5受体活性的激活需要完整的鞭毛蛋白结构,本研究以FaeG为模型抗原,构建了大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与其相结合的融合蛋白,为进一步研究大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域免疫佐剂活性的差异性和深入研究鞭毛蛋白发挥其免疫佐剂活性的机理提供了参考依据.

摘要： The natural chimeric gene is a novel gene fused by two or more independent genes. Its discovery extends the classical gene concept that one gene resides in one chromosomal locus. During tumorigenesis, many chimeric genes lead to tumor-related diseases; therefore, it is one molecular marker for cancer diagnosis. In this review, we summarize the research progress of chimeric genes in terms of their feature, structure, transcription, regulation and function. We pinpoint the difficulties and challenges in the current research work, and discuss the application of chimeric gene in the new gene design.%天然嵌合基因(natural chimeric gene)是由两个或两个以上的独立基因天然融合而成的新基因,该类型基因的发现,突破了"一个基因对应一个染色体座位"的经典认知,扩展了基因的概念.在人类癌症研究过程中,诸多的嵌合基因可导致肿瘤相关疾病,并作为癌症分子的诊断标志而受到人们的广泛关注.本文基于嵌合基因生物信息学方面的相关研究,以癌基因为切入点,从天然嵌合基因的融合特点、转录、调控,以及融合蛋白的结构域组合形式和功能等方面,结合本研究组前期的相关工作,综述了嵌合基因融合结构和功能的研究进展,探讨了当前研究工作的困难与挑战,并对嵌合规律在新基因设计的应用作了展望.

摘要： 染色体结构变异,会扰乱机体的固有平衡系统,影响生殖和发育.在本科遗传学教学中,如何进一步诠释导致机体平衡系统紊乱的机理,是教师常面临的教学难题.一些嵌合基因(chimeric gene)是染色体结构变异的产物,具有特异的生物功能,可能是致使固有平衡系统紊乱的原因之一,但很少见到在课堂或教科书中讲述与嵌合基因相关的内容.本文结合近年本团队对嵌合基因的研究成果及遗传学教学实践,以一个司法案例创设情境,引入嵌合基因实例,以激发学生的学习兴趣;进而通过对嵌合基因通性的梳理,辅助学生总结知识点,发展思维融汇力,从而拓展染色体畸变的教学,以期使学生对基因的变异及其功能有更深入的理解,提高遗传学教学效果.

摘要： 目的：构建和鉴定流行性乙型脑炎（乙脑）／登革病毒1型（ DV1）／JEV prME嵌合基因。方法利用分子生物学技术构建登革病毒和乙脑病毒嵌合的prME嵌合基因，重叠PCR法鉴定；在质粒载体pcDNA3．1（＋）的基础上，构建表达pcDV1／JEV prME的重组质粒载体，利用LipofectamineTM2000将登革／乙脑prME嵌合质粒转染至BHK－21细胞，间接免疫荧光法检测prME蛋白在细胞中的表达。结果 DNA测序结果证实pcDV1／JEV prME重组质粒完全正确，成功构建的登革／乙脑嵌合质粒在BHK－21细胞中能够表达prME蛋白。结论通过一系列的鉴定手段，可以认定本实验中构建的登革／乙脑嵌合质粒能够在真核细胞中顺利表达。

摘要： 通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE,将其克隆到原核表达载体pET-32中,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒,构建pET32-mE质粒;用IPTG在不同条件下诱导表达,确定最佳表达条件,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,重组蛋白是分子质量为41ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5mmol/L,温度为37°C、诱导4h时目的蛋白的表达量最大,约占菌体的32%。Western-blotting试验表明,目的蛋白可被羊痘血清识别。

摘要： 基因嵌合现象普遍存在于各种癌症中，嵌合基因（chimeric gene）和蛋白在肿瘤发生中发挥重要作用。嵌合基因在人类多种疾病，特别是癌症中过度表达，但分子机制并不明确。近年来，有关嵌合基因的分子机制逐渐清晰，人们对发病较高的前列腺癌、肺癌以及白血病中过度表达的嵌合基因进行深入探索，也为未来肿瘤的诊断和治疗提供非常重要的理论依据。%The formation of chimeric genes is a common event in a variety of cancers .The chi-meric genes and proteins play significant roles in tumorigenesis .They over-express in a variety of dis-ease, especially in cancers.However, most of the biological functions of chimeric genes remain un -known.Recently, over-expressed chimeric genes have been recognized as biomarkers for cancers .In this review, we highlight some recent advances of chimeric genes in cancer metastasis .

摘要： 为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip-GAPDH在各个组织(包括肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏)中的表达情况.采用ELISA、Real-time PCR法和体外攻毒法分别分析各实验组不同时间血清抗体效价、免疫基因(IgM、IL-1β和CD8)表达变化规律和相对保护率,研究该嵌合性疫苗对吉富罗非鱼的保护效果.结果显示,实验组在免疫接种第7和第28天时,注射点周围的肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏均能检测到嵌合性质粒,实验组罗非鱼血清抗体效价均高于对照组并于21 d时达到峰值(1∶4 096);qPCR数据表明,实验组鱼体胸腺、头肾和脾脏的IgM、IL-1β和CD8基因的mRNA表达量均出现了上调,并且在胸腺、头肾和脾脏中的表达量分别在免疫后第12和第48 h达到峰值;免疫后42 d进行人工攻毒后计算免疫保护率为93.3％.以上研究结果表明,本研究构建的无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗在罗非鱼链球菌病防治中具有潜在的应用价值.

摘要： 为研究具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将鸡ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化.分别采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应活性,采用MTS法检测其体外促鸡外周血T和脾脏淋巴细胞的增殖活性.结果:成功构建了ChIL-6-1inker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒(rpQE-30/ChIL-6-1inker-ChIL-2),表达的重组融合蛋白分子量约40kD,纯化后的纯度在96％以上.重组融合蛋白可与抗ChIL-6、ChIL-2单抗发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞增殖活性和鸡脾脏淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一单重组蛋白对照.本研究初步证明了rChIL-6-1inker-ChIL-2蛋白在鸡体外具有rChIL-6和rChIL-2蛋白的双重生物学活性,为进一步研究rChIL-6-1inker-ChIL-2蛋白在鸡体内活性奠定了基础.

摘要： 通过计算机软件分析并结合文献报道筛选出lBV结构蛋白基因s1、S2、N基因的T、B细胞的优势抗原表位区共7段，采用人工合成及PcR方法将各抗原表位串联成一条新的嵌合基因F，并成功构建了真核表达质粒pcDNA3．1-F。质粒用脂质体包裹后，经腿部肌肉多点注射7日龄雏鸡，二免后5周用IBV肾型强毒进行攻毒保护性实验。结果显示，质粒pcDNA3．1-F二免后1周，雏鸡外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+T淋巴细胞)含量均有显著上升，血清中特异性ELISA抗体达较高水平;经同型强毒的攻击后，pcDNA3．1-F组保护率为80．0％(16，20)。表明构建的IBV优势表位嵌合基因质粒pcDNA3．1-F能够为接种鸡提供较好的免疫保护力，为IBV新型候选DNA疫苗的设计和应用提供了新的思路。

摘要： 为研究高效猪基因工程免疫增强剂，本研究采用SOE-PCR方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2 (PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-POIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达；通过专利蛋白纯化复性方法对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-POIL-6)进行纯化。分别采用MTS法检测rPOIL-2-Iinker-POIL-6促猪外周血T淋巴细胞和猪脾脏淋巴细胞的增殖活性；分别采用POIL-2和PoIL-6 ELISA 试验方法检测rPoIL-2-linke-POIL-6蛋白特异性免疫反应的活性。结果：成功构建了POIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因。原核表达的rPoIL-2-Iinker-PoIL-6蛋白分子量大小约28 ku，蛋白纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别与单rPoIL-2、rPoIL-6对照具有相近的生物学活性，可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖，并可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应。研究结果初步证明了rPoIL-2-linker-POIL-6在体外具有单rPOIL-2和rPOIL-6蛋白的双重生物学活性，为下一步进行动物体内活性研究奠定了基础。

摘要： 为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力，运用重叠延伸PcR技术，在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)基因的23 1位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点，构建HBcAg修饰基因(Modified HBc，mHBc)表达质粒pET-mHBc。然后，将5epis基因定向插入到该表达质粒mHBc基因中，获得嵌合基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis，并在大肠杆菌中表达。用sDS-PAGE分析，重组嵌合蛋白的分子量约为29kDa，表达量约占菌体总蛋白的47.6%;在westem-blotting试验中，重组嵌合蛋白与mDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后，用电镜观察，可见重组嵌合蛋白呈病毒样颗粒(VLP)，直径约60 nm～80 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测，抗原效价达到2.0×102。本研究成功构建了5epis与HBcAg嵌合基因，在大肠杆菌中高效表达了具有IBDV抗原反应性的重组嵌合蛋白并形成了VLP，具有成为颗粒化表位型IBD基因工程疫苗的应用前景。

摘要： 为了研究高效猪基因工程免疫增强剂，探讨IL-2，IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果，本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达;通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)进行纯化。分别采用MTS法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活，胜;分别采用PoIL-2和PoIL-6 ELISA试验方法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2和PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性。结果表明：成功构建了PoIL-2-liner-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分子量大小约28 ku，蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别具有与单一重组PoIL-2，PoIL-6蛋白(rPoIL-2、rPoIL-6)对照相近的生物学活性，可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖，并可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应。本研究初步证明了rPoIL-2-linker-PiIL-6蛋白在体外具有单rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性，为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。

摘要： 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞，分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性；提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫BALB/c小鼠并检测其免疫效果。结果表明：成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达，表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应，表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2抗体，且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2。

摘要： 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞，分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性；提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫BALB/c小鼠并检测其免疫效果。结果表明：成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达，表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应，表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2抗体，且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2。

摘要： 为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，本研究采用重叠延伸PCR方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素与鸡白细胞介素2的成熟肽基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆)入pGEM-T Easy载体，将ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白中的ChIFN-α在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2 ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)乖禽流感H9N2病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChlFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。结果表明，成功构建并克隆了rChlFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChlFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kDa，蛋白经纯化后纯度在96％以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV和IBDV(1.08×10(8)IU/mg，1.61×10(5)IU/mg)活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性(4.09×10(5)IU/mg，1.99×104 IU/mg); rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。干扰素活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡、减轻NDV和AIV H9N2毒株所引起的胚体出血，并能显著延长鸡胚存活时间，但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。rChlFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV灭活疫苗具有显著的免疫增强作用，但对NDV活疫苗具有免疫抑制作用。以上结果表明rChlFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性，这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。

摘要： 为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha，ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2，ChIL-2)的成熟肽基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-TEasy载体，将ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白中的ChIFN-α在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rGhIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2病毒(AIVH9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。结果表明：成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kDa，蛋白经纯化后纯度在96％以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV和IBDV(1.08×108IU/mg，1.61×105IU/mg)活性明显高于单-rChIFN-α的抗病毒活性(4.09×105IU/mg，1.99×104IU/mg);rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。干扰素活性单位为200IU的rChIFN-α-tinker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡、减轻NDV和AIV H9N2毒株所引起的胚体出血，并能显著延长鸡胚存活时间，但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。iChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV灭活疫苗具有显著的免疫增强作用，但对NDV活疫苗具有免疫抑制作用。以上结果表明rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性，这为进一步研究以rChIFN-α-tinker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。

摘要： 将10头28日龄普通健康仔猪随机平均分成2组,一组免疫106.05TCID50嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)作为免疫组,另一组不予免疫作为对照.在免疫后28天,所有仔猪均予以106.95TCID50 PCV2野毒攻击,以测定PCV1-2免疫对仔猪的免疫保护效力.结果显示,免疫组仔猪血清中PCV2 ORF2蛋白抗体在免疫后28天全部转化为阳性,表明PCV1-2免疫诱发仔猪快速产生了特异性体液免疫应答.在PCV2玫毒后,对照组出现了典型症状与重度的组织病变,而免疫组仅有轻度的组织病变；免疫组血清和淋巴组织中PCV2 DNA载量显著或极显著低于对照组:表明PCV1-2免疫显著降低了PCV2感染后的病毒血症水平和淋巴组织中病毒载量、组织病变程度,并有效阻止了临床疾病发生.研究数据表明,PCV1-2免疫有效诱发了仔猪对高剂量PCV2感染的保护免疫,提示PCV1-2有望成为候选PCV2弱毒疫苗.

摘要： 本发明涉及一种嵌合抗原受体及其表达基因、双抗原调节的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。该嵌合抗原受体表达基因包括第一融合蛋白表达基因和第二融合蛋白表达基因。第一融合蛋白表达基因包括依次连接的粘蛋白‑1抗体表达基因、notch受体表达基因及Gal4‑VP64转录激活蛋白表达基因。第二融合蛋白表达基因包括依次连接的Gal4‑UAS启动子表达基因和间皮素抗体表达基因。这种创新设计的嵌合抗原受体表达基因能够成功导入T细胞中形成嵌合抗原受体修饰的T细胞，在粘蛋白‑1和间皮素双抗原信号同时存在的条件下才产生免疫反应，实现嵌合抗原受体免疫反应可控，治疗副作用少，特异性高。

摘要： 本发明涉及一种嵌合抗原受体及其表达基因、光控调节的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。该嵌合抗原受体表达基因包括第一融合蛋白表达基因和第二融合蛋白表达基因。第一融合蛋白表达基因包括依次连接的抗原结合区域表达基因、铰链蛋白表达基因、第一跨膜蛋白表达基因和拟南芥隐花色素蛋白‑2表达基因。第二融合蛋白表达基因包括依次连接的第二跨膜蛋白表达基因、碱性螺旋环螺旋蛋白‑1表达基因和胞内信号传导蛋白表达基因。这种创新设计的嵌合抗原受体表达基因能够成功导入T细胞中形成嵌合抗原受体修饰的T细胞，在特定的蓝光条件和特定抗原条件下才产生免疫反应，实现嵌合抗原受体免疫反应可控，治疗副作用少，特异性高。

摘要： 本发明公开了抗EpCAM嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用，其中，至少包含了EpCAM结合区和CTLA4结合区，且同时包含了位于两者之间的T2A核酸人工序列，所述抗EpCAM嵌合抗原受体编码基因中，还包含有跨膜‑刺激结构域，所述跨膜‑刺激结构域选自CD8、CD27、CD28、CD226、4‑1BB、OX40、ICOS分子的全部或部分片段。本发明提供的抗EpCAM嵌合抗原受体的编码基因增强了T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。

摘要： 本发明公开了抗B7‑H3嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用，其中，抗B7‑H3嵌合抗原受体编码基因，其特征在于，至少包含了表达IL15和CCL21的人工核苷酸序列。本发明提供的抗B7‑H3嵌合抗原受体的编码基因增强了CIK细胞对实体瘤细胞的杀伤效应。

摘要： 本发明涉及一种嵌合抗原受体及其表达基因、光控调节的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。该嵌合抗原受体表达基因包括第一融合蛋白表达基因和第二融合蛋白表达基因。第一融合蛋白表达基因包括依次连接的抗原结合区域表达基因、铰链蛋白表达基因、第一跨膜蛋白表达基因和拟南芥隐花色素蛋白‑2表达基因。第二融合蛋白表达基因包括依次连接的第二跨膜蛋白表达基因、碱性螺旋环螺旋蛋白‑1表达基因和胞内信号传导蛋白表达基因。这种创新设计的嵌合抗原受体表达基因能够成功导入T细胞中形成嵌合抗原受体修饰的T细胞，在特定的蓝光条件和特定抗原条件下才产生免疫反应，实现嵌合抗原受体免疫反应可控，治疗副作用少，特异性高。

摘要： 本发明涉及一种嵌合抗原受体及其表达基因、四环素调节的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。该嵌合抗原受体表达基因包括Tet‑on 3G蛋白表达基因和融合蛋白表达基因。融合蛋白表达基因包括依次连接的抗原结合区域表达基因、铰链蛋白表达基因、跨膜蛋白表达基因和胞内信号传导蛋白表达基因。这种创新设计的嵌合抗原受体表达基因能够成功导入T细胞中形成嵌合抗原受体修饰的T细胞，在四环素存在和特定抗原条件下才产生免疫反应，实现嵌合抗原受体免疫反应可控，治疗副作用少，特异性高。

摘要： 本发明涉及一种嵌合抗原受体及其表达基因、双抗原调节的嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。该嵌合抗原受体表达基因包括第一融合蛋白表达基因和第二融合蛋白表达基因。第一融合蛋白表达基因包括依次连接的粘蛋白‑1抗体表达基因、notch受体表达基因及Gal4‑VP64转录激活蛋白表达基因。第二融合蛋白表达基因包括依次连接的Gal4‑UAS启动子表达基因和间皮素抗体表达基因。这种创新设计的嵌合抗原受体表达基因能够成功导入T细胞中形成嵌合抗原受体修饰的T细胞，在粘蛋白‑1和间皮素双抗原信号同时存在的条件下才产生免疫反应，实现嵌合抗原受体免疫反应可控，治疗副作用少，特异性高。

摘要： 本发明公开了一种基于STR基因标志鉴定供者DNA嵌合比率的PCR引物、试剂盒及其应用以及嵌合体的检测方法，其检测方法包括以下步骤：a)从样品中提取DNA作为模板；b)设定根据权利要求1中所述的PCR引物的退火温度，并对所述PCR引物进行标记；c)将标记的PCR引物进行PCR扩增，得到扩增产物；d)对所述扩增产物的片段大小进行分析，确定具有差异的基因标志。根据本发明实施例的嵌合体的检测方法，将PCR引物与荧光标记DNA片段分析技术有机结合，创出供受者区分率高、操作简捷快速、结果分析准确的整套嵌合率检测分析系统，该方法克服了传统方法中主观影响，分辨率高结果精确，且操作简单快捷，干净无毒。

摘要： 本发明公开了一种藻蓝蛋白/嵌合降钙素融合基因、融合蛋白、重组质粒、转基因酿酒酵母及应用。本发明将构建得到的线性rDNA2‑leu2‑Ppgk‑cpcB/5hsCT‑rDNA1片段以rDNA为同源重组位点介导整合到亮氨酸缺陷型酿酒酵母中获得转基因酵母BY4742‑LPB5，实现了外源基因在酿酒酵母细胞内的高效稳定表达，大大提高了降钙素的表达稳定性，且消除了抗生素等选择标记给后期工业化生产带来的环境污染不良影响或食品安全性问题。酿酒酵母生产周期短，发酵技术成熟，安全性好，且转基因酿酒酵母不需要蛋白提取、切割加工和纯化等繁琐工艺就可以直接口服，极大地降低了工业化生产成本。

摘要： 本发明提供用于更有效的急性髓性白血病免疫疗法的基因修饰NK细胞系及其用途，所述基因修饰NK细胞系转化宿主免疫细胞以表达包含FLT3特异性单克隆抗体或其功能片段、跨膜结构域和T细胞受体的CD3ζ结构域的癌抗原特异性嵌合抗原受体(CAR)蛋白。