细胞骨架蛋白

摘要： 目的探讨经典型肝局灶性结节状增生(FNH)中央瘢痕的细胞组织学机制。方法从手术切除的具有中央瘢痕的FNH标本中分离出活化的肝星状细胞。采用细胞免疫荧光法及定量逆转录聚合酶链反应检测特定的细胞骨架标记物,如α-SMA、Collagen l和MMP-2。同时,收集有或无中央瘢痕的28例FNH样本,采用免疫组织化学染色和双免疫荧光标记法检测α-SMA、Collagen l的表达情况。结果FNH标本分离的肝星状细胞在培养期间具有肌成纤维细胞样的形态,同时高表达desmin,α-SMA,collagen I and MMP-2。同时,在FNH组织中可检测到中央瘢痕区域α-SMA,collagen I蛋白的共表达,且与组织大小显著相关。结论本研究首次基于细胞学-组织学水平上探讨FNH组织中央瘢痕形成的潜在机制,研究结果可为经典型FNH及中央瘢痕的形成提供实验资料。

摘要： 肿瘤转移是肿瘤恶化及死亡的主要原因,近年来研究发现,许多microRNA(miR)、蛋白分子、细胞信号转导通路等均可介导肿瘤迁移侵袭。Ezrin蛋白又称细胞绒毛蛋白,属埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(Ezrin/Radixin/Moesin,ERM)家族最早发现的一员,广泛分布于人体细胞内,是细胞骨架与细胞膜之间的连接蛋白,参与许多复杂的细胞生命活动。Ezrin作为近年来肿瘤转移相关研究的热点分子,可通过不同机制促进肌动蛋白的重新组装及肿瘤细胞间的起泡内吞影响肿瘤细胞运动,不仅影响肿瘤细胞转移的某一阶段,还可通过多种途径影响不同肿瘤及肿瘤转移的不同阶段。因此,Ezrin是肿瘤转移过程中的重要分子,也是肿瘤诊疗的创新靶点。本文对Ezrin的生物学结构及功能进行简要介绍,并对Ezrin影响多种肿瘤细胞转移途径做一概括和总结。

摘要： 目的 观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激小鼠足细胞后的氧化应激效应和信号通路的激活,探讨足细胞抗氧化能力变化的机制.方法 分别用50μg/ml ox-LDL、LDL刺激分化成熟的小鼠肾小球足细胞(ox-LDL刺激组、LDL刺激组),并设单纯以无血清培养基培养的足细胞为对照组,观察12、24 h足细胞的损伤情况及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.采用TUNEL法判断足细胞的凋亡情况,免疫荧光法及Western blot法观察足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达情况,间接免疫荧光法观察细胞骨架蛋白paxillin、F-actin的表达情况,Western blot法进一步检测两条信号通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的变化,分光光度法测定足细胞细胞质SOD的活性.结果 经LDL及ox-LDL刺激12、24 h的足细胞均未见凋亡,12 h 3组细胞nephrin的表达无明显差异,24 h ox-LDL刺激组nephrin表达明显下调、足突上的paxillin表达消失,F-actin重新分布.12 h ox-LDL刺激组及LDL刺激组的MAPK和GSK-3β活性无明显差异,24 h ox-LDL刺激组磷酸化的MAPK和GSK-3β比率显著增加.12 h ox-LDL刺激组足细胞SOD活性较对照组增加19.94%,ox-LDL刺激持续至24 h,SOD活性较对照组仅增加7.3%.结论 50 μg/ml ox-LDL刺激体外培养的分化成熟小鼠肾小球足细胞24 h,可导致nephrin显著下调,细胞骨架蛋白重构,磷酸化的MAPK、GSK-3β比率显著增加,提示MAPK、GSK-3β两条通路的激活可能导致nephrin表达下调和细胞骨架蛋白重构.氧化刺激早期可造成足细胞的SOD活性反应性升高并使足细胞免于氧化损伤.

摘要： 目的 观察肾上腺髓质肽(adrenomedullin,AM)对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)所诱导受损足细胞的作用以及Rac1/Cdc42表达变化,初步探讨其可能机制.方法 将小鼠肾足细胞株分为对照组、PAN处理组(100μg/mL)、PAN联合AM处理组(10-7 mol/L)及PAN联合AM和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89(10-6 mol/L)处理组.经一次性腹腔注射PAN(150 mg/kg)建立大鼠足细胞损伤模型,每天经尾静脉注射AM蛋白(66μg/kg)进行干预.SDS-PAGE法检测尿蛋白水平,电镜观察足细胞足突宽度变化,双重免疫荧光染色及/或Western blot观察足细胞特异性骨架蛋白(synaptopodin、nephrin)、Rac1及Cdc42的蛋白表达水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测synaptopodin、nephrin的mRNA表达,谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验(GST-pull down assay)法检测Rac1及Cdc42活性变化.结果 PAN在体内、外均显著降低synaptopodin、nephrin的蛋白或/及mRNA表达水平,且显著升高desmin表达;大鼠PAN肾病模型的尿蛋白水平显著升高,足突宽度显著增加;PAN显著降低Rac1、Cdc42总蛋白及活性水平.上述由PAN所介导的效应被AM显著抑制;H89显著阻断AM的体外作用.结论 AM主要通过PKA通路促进受损足细胞的修复,该保护机制与AM调控Rac1/Cdc42表达密切相关.

摘要： 在中枢神经发育过程,神经细胞的正确迁移是日后大脑发挥正常脑功能的基础,而细胞骨架蛋白在整个迁移过程中起着至关重要的作用.文章主要通过总结神经细胞骨架蛋白微管、微丝及中间丝的基本组成结构,了解蛋白在聚合和解聚过程中所受到的各种调控因素,同时阐述了微管、微丝蛋白在神经细胞迁移中的作用,并对其进一步研究提出了前瞻性思路.

摘要： 目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达变化对体外活化肝星状细胞(HSC)纽蛋白(vinculin)的影响.方法 分别将含有野生型PTEN基因及含有靶向PTEN的RNA干扰序列短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,构建体外活化大鼠肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型;应用免疫荧光法并结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测活化HSC的vinculin分布及表达.实验分组:(1)Control组:以无血清无抗生素的DMEM培养液代替腺病毒液转染体外活化HSC;(2)Ad-GFP组:以仅带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的载体空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC;(3)Ad-PTEN组:以带有GFP基因并携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad-PTEN转染体外活化HSC;(4)Ad-shRNA/PTEN组:以带有GFP基因并携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC.结果 外源性野生型PTEN基因及靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,并成功构建体外活化肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型.HSC的vinculin蛋白主要表达于胞浆,4组HSC的vinculin亚细胞分布未发生明显变化.Ad-PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(251.78±12.68)明显低于Control组(381.13±9.12)及Ad-GFP组(383.87±12.15),P0.05).结论 PTEN表达变化对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的亚细胞分布无明显影响,但PTEN过表达可下调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达,而PTEN低表达则可上调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达.

摘要： 目的:探讨治疗病态窦房结综合征的通阳活血方含药血清对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡和细胞骨架蛋白Vinculin的影响.rn 方法:取新生乳兔窦房结细胞,以缺氧缺糖模拟缺血,以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型.设正常对照组、模型组、空白血清组、含药血清高、中、低剂量组,运用酶标仪、流式细胞分析仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞活性、凋亡及细胞骨架蛋白Vinculin形态的变化.rn 结果:模型组活细胞量较正常组明显减少(p＜0.01);凋亡明显增多(p＜0.01);空白血清组与模型组无明显差异.细胞骨架蛋白Vinculin裂解明显.含药血清高、中、低剂量组活细胞量明显高于模型组(p＜0.05),凋亡明显减少(p＜0.01),Vinculin结构较模型组完整,荧光强度明显高于模型组.rn 结论:通阳活血方含药血清能抑制模拟缺血再灌注引起的窦房结细胞损伤;通阳活血方治疗病态窦房结综合征的机制可能与保护窦房结细胞活性、对抗细胞凋亡、保护细胞骨架蛋白Vinculin形态结构有关.

摘要： 细胞骨架是指存在于真核细胞中的蛋白纤维的聚合物和各种调控蛋白交错连接的动态网架体系,在细胞内外信号相互作用下发生着动态的变化.本文采用8标iTRAQ标记技术LC-MS/MS对比定量分析不同分期大肠癌及癌旁正常组织细胞骨架蛋白质组,筛选出大肠癌发生发展过程中的特异性差异细胞骨架蛋白,为今后进一步寻找大肠癌的发生发展过程中的特异性生物标志奠定基础,以期为大肠癌的早期诊断及预后预测发挥重要作用.

摘要： 目的:通过观察通心络超微粉(TXLU)与络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清作用内皮细胞后细胞内细胞骨架蛋白F-actin的变化,探讨通心络超微粉改善内皮功能,防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制.rn 方法:体外培养人脐静脉内皮(HUVEC)细胞株,实验分为空白对照组、20%正常血清组、20%模型血清组、20%模型血清+通心络超微粉组.采用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察血清作用6h后细胞骨架蛋白F-actin的形态及含量变化.rn 结果:模型血清作用6h后细胞骨架F-actin发生明显的破坏,其荧光强度减弱.通心络超微粉预处理后可减少F-actin损伤的发生及伴随含量的增加.rn 结论:通心络超微粉可以减弱细胞骨架蛋白F-actin的损伤,可能是其改善内皮功能,防治动脉粥样硬化的机制之一.

摘要： 目的：探讨新生隐球菌对鼠小胶质细胞(N9)蛋白质组的影响。rn 方法：分别提取正常N9细胞以及其与新生隐球菌(ATCC32609)作用后的N9细胞的蛋白样品,采用双向电泳技术分离,对部分差异的蛋白点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析,测定其肽质量指纹图谱,在网上蛋白质数据库检索鉴定差异蛋白。rn 结果：获得较好的双向电泳图像,图像分析显示:在与新生隐球菌作用前后检测到N9细胞的蛋白点分别是701±29个,980±20个,对表达差异的18个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,经数据库检索后,鉴定出3个涉及小胶质细胞细胞骨架的蛋白质:Anillin, Pericentrin 2, Nucleosidediphosphate kinase A (NDP kinase A, NDPKA)。rn 结论：新生隐球菌对小胶质细胞的细胞骨架蛋白造成影响,这有助于我们在分子水平理解隐球菌脑膜炎的发病机制。

摘要： 本研究采用免疫荧光间接法对在心肌细胞骨架蛋白进行研究,同时应用RT-PCR技术检测心肌内肠道病毒的感染情况,探讨二者在扩张型心肌病发病和演进中的意义.

摘要： 目的：从子鼠海马中细胞骨架蛋白Arc的变化,来探讨丰富环境方式对孕期慢性应激所产子鼠学习能力影响的干预机制. 方法：建立孕期慢性应激大鼠模型,并采用丰富环境干预子鼠,利用水迷宫和Y-迷宫测定子鼠学习记忆能力、RT-PCR和Western Blotting测定海马中Arc表达情况. 结果：模型组母鼠皮质酮增高,提示模型组母鼠处于应激状态.丰富环境后,子鼠血浆皮质酮降低(P<0.05);水迷宫中逃避潜伏期和跨平台次数、Y-迷宫中所需的训练次数和正确反应率情况均转好(P均<0.05);经丰富环境后,模型子鼠组海马组织Arc mRNA和蛋白表达增高(P均<0.05). 结论：丰富环境可以作为孕期受到应激因素影响学习能力提高的手段,与血浆皮质酮降低及海马突触相关蛋白Arc升高有关.

摘要： 目的：研究按摩对兔股四头肌损伤的肌组织病理修复、细胞骨架蛋白结蛋白(Desmin)和α-肌动蛋白(α-Actin)表达的效应差异,探讨按摩促进肌肉损伤修复的作用机制. 方法：健康成年雄性新西兰大白兔27只,体重(2.0±0.5)kg,随机分为3组,正常对照组(A组,n=3)、自然恢复组(B组,n=12)和按摩组(C组,n=12).A组实验动物不作任何处理,B、C组实验动物用自制打击器制备兔右后肢股四头肌损伤模型.C组于造模后第8天开始按摩,按摩转速3000～3100r/min,按摩时间15min,每天1次至处死取材为止;B组不予按摩.B、C组于伤后14d及21d各取6只实验动物股四头肌样本,HE染色观察组织病理变化,免疫组织化学染色及Western blot检测Desmin、α-Actin表达,并与A组正常股四头肌标本进行比较. 结果：B、C组实验动物均存活至实验完成.A组肌纤维形态规整,排列整齐,无结缔样组织;B组股四头肌标本见明显组织坏死,多数肌纤维断裂、萎缩、排列紊乱;C组骨骼肌组织形态、肌萎缩较B组改善,受损部位可见新生肌纤维.免疫组织化学染色显示各时间点B、C组Desmin、α-Actin表达均低于A组(P＜0.05);但C组Desmin、α-Actin表达均较B组增强(P＜0.05),且21d时明显高于14d(P＜0.05).Western blot检测示A组Desmin、α-Actin高于B、C组(P＜0.05),B组两种蛋白表达最低. 结论：按摩可促进兔损伤股四头肌的组织形态,及细胞骨架恢复,可能通过上调Desmin、α-Actin表达促进骨骼肌组织损伤修复.

摘要： 目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪是否可通过稳定纤维状肌动蛋白(F-actin)发挥对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后的保护作用,为临床上开发mitoKATP通道开放剂治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供理论依据.方法:取孕21天SD大鼠麻醉后剖腹,结扎其子宫动静脉建立宫内窒息诱发新生大鼠HIBD模型.剖宫产取出的新生大鼠分为假手术组、窒息组(HI组)、二氮嗪组(Dia组)、二氮嗪+格列苯脲组(Dia+Gli组)及溶剂组(DMSO组),其中假手术组仅行剖宫产术而不予结扎子宫动静脉.剖宫产后0h、12h、24h分别腹腔注射相应药物.采用光学显微镜和电镜观察神经细胞组织学改变,TTC染色及western blot分别观察HIBD后脑缺血情况及脑皮质F-actin蛋白表达情况.结果:1.组织学方面:HI组出现明显的神经元变性、细胞水肿，细胞数目减少，组织间隙增宽;电镜下可见线粒体肿胀及间质水肿。Dia干预后可明显减轻这些组织细胞病理损伤。2.TTC染色:HI组出现明显脑缺血，与假手术组相比差异有统计学意义;Dia能减轻脑缺血程度，与HI组相比差异有显著性;Gli可抵消Dia的保护作用。3.Western Blot:HI组新生大鼠脑皮质F-actin蛋白表达明显减少，与假手术组相比有统计学意义;Dia干预后皮质细胞骨架崩解减少，F-actin蛋白量增加，与HI组相比差异有显著性;Gli可逆转二氮嗪对细胞骨架的稳定保护作用，细胞骨架崩解增加，F-actin蛋白量与Dia组相比有统计学意义。结论:宫内窒息后新生大鼠出现明显的HIBD,mitoKATP开放剂二氮嗪在新生大鼠HIBD后的脑保护中发挥重要的作用，并且这种保护作用可被格列苯脉抵消，并推测二氮嗪的这一保护作用是通过减轻F-actin的降解进而稳定神经细胞骨架来实现的。

摘要： 细胞骨架蛋白基因有研究表明心肌骨架蛋白的编码基因与扩张型心肌病的发病有着密切关系。细胞骨架系统起传导收缩力和机械支撑作用，研究发现许多扩张型心肌病与力传导蛋白缺陷有关，力传导过程缺陷以及心肌收缩时骨架蛋白不能有效地维持细胞膜结构，将导致心肌细胞慢性机械损伤，进而间质纤维化,心脏扩大。与之相关的细胞骨架蛋白有核纤层蛋白、桥粒蛋白、8-肌聚糖、抗肌营养不良蛋白及纽带蛋白等。

摘要： 目的：建立4.1R基因缺失的小鼠胚胎成纤维细胞系，为研究细胞骨架蛋白4.1对细胞迁移的调控提供实验模型。rn 方法：从C57BL/6J-4.1R-/--和C57BL/6J-4.1R+/+小鼠胚胎中分离培养胚胎成纤维细胞，SV40大T 抗原转化法筛选出可以在体外连续传代的细胞系；Western Blot 鉴定4.1 蛋白家族、粘着斑形成相关蛋白Paxillin和β Ⅰ 整合素(β1 integrin)的表达，共聚焦显微镜观察比较 C57BL/6J-4.1R+/+与C57BL/6J-4.1R/-小鼠胚胎成纤维细胞的肌动蛋白张力纤维和粘着斑形成。自动聚 焦视频显微镜进行活细胞运动能力比较；流式细胞术检测细胞表面β1 integrin的活化。rn 结果：从C57BL/6J-4.1R-/-小鼠中分离出的胚胎成纤维细胞可以在体外连续传代，与C57BL/6J-4.1R+/+小鼠胚胎 成纤维细胞相比135kDa、80kDa4.1R 分子表达缺失，而4.1 蛋白家族的其他成员4.1B、4.1N、4.1G 及 Paxillin 表达正常，β1 integrin 表达上调，细胞运动能力和伤痕愈合能力明显增强，细胞表面活化的β1 integrin 明显降低。rn 结论：成功建立4.1R基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞系，4.1R通过β1 integrin 活化调控MEF运动，为研究4.1R对细胞运动调控的机制提供了基因工程细胞模型。

摘要： 本发明描述了通过使细胞接触氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯来预防或降低肌动蛋白细胞骨架重排和细胞间间隙形成的方法。特别地，本公开的方法可用于预防或降低与缺血性或缺血-再灌注事件相关的肌动蛋白细胞骨架重排和/或细胞间间隙形成，且可用于预防或缓解与肌动蛋白细胞骨架重排增加相关的疾病或病症。

摘要： 本发明公开了一种确定细胞骨架肌动蛋白纤维分叉点抗弯刚度的方法，将分叉纤维近似为两端简支的梁，梁的一端受集中弯矩M作用，梁上受分布的随机布朗力f

摘要： 本发明描述了通过使细胞接触氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯来预防或降低肌动蛋白细胞骨架重排和细胞间间隙形成的方法。特别地，本公开的方法可用于预防或降低与缺血性或缺血-再灌注事件相关的肌动蛋白细胞骨架重排和/或细胞间间隙形成，且可用于预防或缓解与肌动蛋白细胞骨架重排增加相关的疾病或病症。

摘要： 本发明公开了一种骨架蛋白源性多肽在制备抑制大肠癌细胞侵袭转移的药物中的应用。本发明的V+Repeat融合性多肽对于大肠癌的侵袭转移的具有显著的抑制作用。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及Cytoskeleton‑associatedprotein4在制备血管内皮细胞损伤检测试剂盒中的应用。本发明还提供了一种检测抗Cytoskeleton‑associatedprotein4‑IgG抗体的试剂盒，对生物样本中的抗Cytoskeleton‑associatedprotein4‑IgG抗体进行定性定量检测，准确度和灵敏度较高，且简便快速，填补了本领域中检测抗Cytoskeleton‑associatedprotein‑IgG抗体试剂盒的空白。

摘要： 本发明提供一种尿液角蛋白,II型细胞骨架1（Keratin,type II cytoskeletal 1）蛋白及其多肽片段的应用，具体为尿液角蛋白,II型细胞骨架1及其多肽片段在制备用于检测过敏性疾病制剂中的应用。过敏性疾病又称变态反应性疾病，典型的过敏性疾病（变态反应性疾病）包括过敏性鼻炎、支气管哮喘、变应性皮炎、湿疹、变应性结膜炎及过敏性休克等，以下统称为过敏性疾病。本发明通过研究证实，与健康人组（正常对照）相比，尿液角蛋白,II型细胞骨架1及其多肽片段在过敏性疾病患者组表达升高，可用于过敏性疾病患者的辅助诊断。本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液角蛋白,II型细胞骨架1及其多肽片段。

摘要： 本发明公开了针对细胞骨架蛋白β‑actin的纳米抗体及其决定抗体特异性的互补决定区(CDR)编码序列。所述抗体是含有SEQ ID NO:1所示CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2所示CDR2氨基酸序列及SEQ ID NO:3所示CDR3氨基酸序列。本发明涉及的一种针对β‑actin纳米抗体能够良好地特异性结合细胞骨架蛋白β‑actin。

摘要： 本发明公开一种确定急性高血压肾损伤时足细胞骨架蛋白及其标志蛋白变化的方法，其特点是：建立小鼠急性高血压模型;确定GSK3β/β-catenin信号通路参与急性高血压导致足细胞损害：应用Western blot、RQ-PCR测定上述蛋白及mRNA的表达;体外培养足细胞研究GSK3β/β-catenin信号通路对足细胞相关蛋白、细胞骨架蛋白的调控机制，进一步阐明GSK3β/β-catenin信号通路在急性高血压足细胞损害中的启动作用和核心作用。本发明应用“活体冷冻技术”结合冷冻置换方法进行了血液动力学改变时足细胞损伤的研究，为探索防止和减轻足细胞损伤，减少蛋白尿提供新的治疗靶点做出了贡献。

摘要： 本发明公开了针对细胞骨架蛋白β‑actin的纳米抗体及其决定抗体特异性的互补决定区(CDR)编码序列。所述抗体是含有SEQ ID NO:1所示CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2所示CDR2氨基酸序列及SEQ ID NO:3所示CDR3氨基酸序列。本发明涉及的一种针对β‑actin纳米抗体能够良好地特异性结合细胞骨架蛋白β‑actin。

摘要： 本发明公开了一种标记细胞骨架蛋白的多肽及其真核表达载体，该多肽转入细胞或者通过真核表达载体在细胞得到表达后能够与微丝结合，荧光标记的多肽能够用于细胞骨架蛋白的标记。所述的多肽为JN27、JN30或者TatJN27；所述的真核表达载体为pEGFP-C2-JN27或者pEGFP-C2-JN30。荧光标记的JN27、JN30、TatJN27多肽导入细胞，pEGFP-C2-JN27和pEGFP-C2-JN30真核表达质粒转染细胞后，均可以与细胞内骨架蛋白中的微丝蛋白结合，实现细胞内骨架蛋白的荧光标记。